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二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞增殖和分化的影响
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作者 周亮亮 翁土军 +5 位作者 钱隆 聂振国 何莹 张春丽 王自强 李利 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期262-269,共8页
目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到... 目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到培养板24h后,实验组培养基中分别加入50μM(50μM组)和200μM(200μM组)的DMOG,对照组加入完全培养液。分别于培养1、3、5d时采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖情况,5、10d行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性检测成骨细胞分化,21d用茜素红染色检测MC3T3-E1细胞钙结节的形成并进行定量分析,采用ELISA法检测MC3T3-E1培养3d情况时上清液中的VEGF蛋白含量,并用实时荧光定量PCR法检测MC3T3-E1细胞VEGF mRNA的相对表达量。结果:培养1d时对照组、50μM组和200μM组的MC3T3-E1的光密度(optical density,OD)值分别为0.041±0.009、0.074±0.019、0.086±0.044,3d时分别为0.123±0.027、0.148±0.020、0.224±0.061,5d时分别为0.297±0.044、0.325±0.084、0.354±0.038,1d、3d时50μM组和200μM组与同时间点对照组比较均有显著性差异(P<0.05),3d时50μM组与200μM组有显著性差异(P<0.05)。培养5d和10d时对照组ALP染色颜色较深,50μM组颜色中等,200μM组颜色较浅;5d时对照组ALP活性为1.943±0.072,50μM组为1.632±0.051,200μM组为1.319±0.065;10d时对照组ALP活性为3.734±0.067,50μM组为3.381±0.070,200μM组为2.831±0.086。三组间同时间点比较均有统计学差异(P<0.05),同组10d时与5d时比较均有统计学差异(P<0.05)。茜素红染色200μM组可见少量红色结节,50μM组可见中等量红色结节,对照组可见大量红色结节;对照组茜素红含量(μg/ml)为56.178±7.940,50μM组为41.922±2.438,200μM组为31.929±1.922,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。培养3d时对照组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量(ng/孔)为9.063±0.603,50μM组为12.123±0.870,200μM组为15.540±0.581,三组间比较均有统计学差异(P<0.05);50μM组VEGF mRNA表达量为对照组的1.792±0.067,200μM组为对照组的3.963±0.092,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 :低氧模拟剂DMOG可促进MC3T3-E1细胞增殖和VEGF表达,抑制其成骨分化。 展开更多
关键词 二甲基乙二酰基甘氨酸 小鼠胚胎骨细胞细胞 碱性磷酸酶 血管内皮生长因子 骨分化
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3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸对成骨细胞前体增殖和成骨分化的作用
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作者 薛英 王永炫 +4 位作者 余新曦 蓝旭华 陈霞霞 林滢 侯建明 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2020年第1期27-33,共7页
目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细... 目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细胞增殖水平;在成骨分化诱导试剂干预7 d基础上,结合上述T3给药,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测各浓度组成骨细胞分化水平,通过实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测各浓度组的成骨细胞标记性基因及蛋白的表达差异.结果在分别干预1、2、3 d后,T3随着浓度增高,对细胞的增殖水平均呈明显上调;而且相同剂量的T3对于细胞增殖呈时间依赖性增强.此外,MC3T3-E1 Subclone 14细胞诱导7 d后,对比于0对照组,低浓度T3(1 nmol/L)对成骨细胞各分化参数均无明显作用,而10、100、1000 nmol/L的T3对细胞ALP染色,成骨细胞相关基因及蛋白均明显上调,其中以10和100 nmol/L组最为显著.结论T3对于MC3T3-E1 Subclone 14细胞的增殖和成骨细胞分化均有显著的促进作用. 展开更多
关键词 3 3' 5-碘-L-甲腺原氨酸 小鼠颅顶骨细胞亚克隆14 细胞增殖 分化
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糖基化终末产物刺激下长链非编码RNA H19通过WNT/β-catenin信号通路调控MC3T3细胞骨向分化
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作者 邓超 强诗雨 +3 位作者 马一凡 阮晓旭 孙翼 李雪雪 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期765-769,共5页
目的:探究长链非编码RNA H19(LncRNA H19)在糖基化终末产物(AGEs)刺激下对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的调控作用及其可能的机制。方法:10μg/mL AGEs浓度刺激下培养MC3T3-E1细胞,7 d后碱性磷酸酶染色、21 d后茜素红染色观察细胞矿... 目的:探究长链非编码RNA H19(LncRNA H19)在糖基化终末产物(AGEs)刺激下对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的调控作用及其可能的机制。方法:10μg/mL AGEs浓度刺激下培养MC3T3-E1细胞,7 d后碱性磷酸酶染色、21 d后茜素红染色观察细胞矿化情况;RT-PCR检测细胞中ALP、Runx-2、OCN、SP7以及LncRNA H19 mRNA的表达水平,Western blotting检测细胞中Runx-2蛋白表达水平;采用细胞转染技术过表达LncRNA H19,RT-PCR检测LncRNA H19的转染效率;并检测转染LncRNA H19后细胞中骨基因的表达水平、ALP染色情况以及β-catenin的表达情况。结果:AGEs刺激下MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶染色变浅、钙化结节形成减少,ALP、Runx-2、OCN、SP7、LncRNA H19基因表达水平降低(P<0.05),Runx-2蛋白水平表达下降;转染过表达LncRNA H19(lv-H19)后,LncRNA H19表达水平显著上调(P<0.05),ALP、Runx-2、OCN、SP7基因表达水平上升(P<0.05),碱性磷酸酶染色变深,β-catenin的表达增加。结论:AGEs刺激下,LncRNA H19可能通过WNT/β-catenin的表达影响了MC3T3-E1细胞的骨向分化。 展开更多
关键词 糖基化终末产物 长链非编码RNA H19 小鼠前成骨细胞 骨向分化
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载rhPTH(1-34)纳米缓释纤维促成骨作用的体外研究 被引量:1
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作者 袁月 刘童斌 +4 位作者 孟帅岑 蔡青 张喆 王晶晶 孟维艳 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期771-774,共4页
目的:制备载甲状旁腺相关肽(rhPTH(1-34))的电纺丝缓释纤维,研究其缓释效果及对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:制备含rhPTH(1-34)电纺丝缓释纤维(PLLA/rhPTH(1-34)),扫描电镜(SEM)观察其形貌。紫外分光光度法测定释放速率。噻唑蓝法(M... 目的:制备载甲状旁腺相关肽(rhPTH(1-34))的电纺丝缓释纤维,研究其缓释效果及对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:制备含rhPTH(1-34)电纺丝缓释纤维(PLLA/rhPTH(1-34)),扫描电镜(SEM)观察其形貌。紫外分光光度法测定释放速率。噻唑蓝法(MTT)测定PLLA/rhPTH(1-34)对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的增值活性,碱性磷酸酶(ALP)测定其分化。结果:含模型药物的电纺丝缓释纤维体外有效释放21d,PLLA/rhPTH(1-34)缓释纤维促进细胞的增殖作用明显(P<0.05),并能显著促进细胞的分化(P<0.05)。结论:PLLA/rhPTH(1-34)缓释纤维可以有效缓释药物,并能促进MC3T3-E1DE增殖、分化。 展开更多
关键词 电纺丝 甲状旁腺激素 小鼠前成骨细胞
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黄瓜籽总黄酮对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响 被引量:1
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作者 孙银玲 陈丽艳 +4 位作者 张蕾 丁纯洁 郑宏宇 綦菲 王伟明 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2022年第4期362-369,共8页
目的探讨黄瓜籽总黄酮提取物(cucumber seed flavonoids,CSF)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响,以及对富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and r... 目的探讨黄瓜籽总黄酮提取物(cucumber seed flavonoids,CSF)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响,以及对富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B,RANK)信号通路的作用。方法通过噻唑蓝(MTT)实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色,考察不同浓度CSF对MC3T3-E1细胞增殖、分化及矿化的影响;采用RT-PCR方法检测SPARC、OPG/RANKL mRNA表达水平;Western blot检测OPG/RANKL的蛋白表达量。结果CSF高、中剂量组能够明显提高细胞增殖率(P<0.05),分别为阳性对照组的1.92和1.77倍;CSF高、中剂量组ALP活性为(2.756±0.073)和(1.961±0.107)U/mL,明显高于阳性对照组(0.453±0.029)U/mL(P<0.05);CSF高、中剂量组钙化结节面积为(34.899±0.811)和(22.112±0.914)mm 2/10个视野,与阳性对照组(16.577±0.649)mm 2/10个视野相比明显增加(P<0.05);与空白组相比,CSF高、中剂量组在不同时间点均明显上调SPARC、OPG/RANKL mRNA表达量,并促进OPG/RANKL蛋白表达水平(P<0.05)。结论黄瓜籽总黄酮类成分能够促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化及矿化能力,并通过上调SPARC、OPG/RANKL的表达水平提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。 展开更多
关键词 黄瓜籽总黄酮 小鼠胚胎骨细胞细胞 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白 骨保护素/核因子κB受体活化因子配体
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明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能 被引量:1
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作者 焦自学 高承哲 +2 位作者 孙硕 武振旭 章培标 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期390-397,共8页
微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。聚醚醚酮(PEEK)材料具... 微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N′-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。 展开更多
关键词 微载体 聚醚醚酮 明胶修饰 小鼠胚胎骨细胞细胞 细胞增殖与粘附
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