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小细胞肺癌细胞系H446中肿瘤干细胞的分选与鉴定 被引量：4
1
作者 孟祥姣 李明 +2 位作者 王秀问 王亚伟 马道新 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期533-537,共5页
目的明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选(magnetic cell separation,MACS)法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性(CD133+)... 目的明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选(magnetic cell separation,MACS)法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性(CD133+)细胞与CD133阴性(CD133-)细胞在集落形成、自我更新、增殖分化、侵袭性、耐药性和成瘤性方面的不同。结果CD133+细胞和CD133-细胞在集落形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化能力、侵袭能力和耐药性方面基本相同。集落形成和成瘤性实验结果显示:CD133+或CD133-细胞中40%以上的细胞都能够形成含有100个细胞以上的大集落,增殖成为与未分选细胞相同的细胞群,并能在裸鼠身上成瘤。结论表面黏附分子CD133不能作为分选小细胞肺癌H446细胞系中肿瘤干细胞的分子标志物,分选后的CD133+与CD133-细胞中含有相同的肿瘤干细胞。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 h446细胞系 CD133 肿瘤干细胞
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埃本膦酸钠对肺癌H446细胞体外粘附、移动和侵袭的影响 被引量：1
2
作者 俞惠新 林秀峰 +3 位作者 谭成 陈波 张荣军 王博诚 《医学研究生学报》 CAS 2003年第12期888-890,共3页
目的 :研究埃本膦酸钠 (BM 2 1 0 95 5 )对人小细胞肺癌细胞系H4 4 6在体外的粘附、移动及侵袭能力的影响。方法 :经BM 2 1 0 95 5体外诱导的H4 4 6细胞 ,应用SRB比色法测定其在重构基膜Matrigel胶上的粘附 ,使用Millicell PCF培养系统... 目的 :研究埃本膦酸钠 (BM 2 1 0 95 5 )对人小细胞肺癌细胞系H4 4 6在体外的粘附、移动及侵袭能力的影响。方法 :经BM 2 1 0 95 5体外诱导的H4 4 6细胞 ,应用SRB比色法测定其在重构基膜Matrigel胶上的粘附 ,使用Millicell PCF培养系统计数测定细胞的移动力和侵袭力。　结果 :BM2 1 0 95 5诱导的H4 4 6细胞在 2 4 0min粘附实验中的粘附率下降 32 .1 1 % (P <0 .0 5 ) ,而其移动和侵袭能力在 4～ 72h内均有显著下降 (P <0 .0 5 )。　结论 :BM 2 1 0 95 5可抑制人小细胞肺癌H4 4 6的体外粘附。 展开更多
关键词 埃本膦酸钠 小细胞肺癌细胞系/h446 侵袭
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槲皮素对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响 被引量：13
3
作者 刘涛 张雅雅 +1 位作者 许英艺 包传恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期169-174,共6页
目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增... 目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增殖的影响,流式细胞术检测槲皮素对H446细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting检测槲皮素对H446细胞内P53、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:槲皮素对H446细胞的增殖抑制具有显著的剂量和时间依赖性(P<0.05),在12、24、48及72 h四个时间点,槲皮素作用于H446细胞的IC50值分别为(172.2±2.6)、(102.4±5.3)、(68.6±2.7)及(48.8±1.9)μmol/L。槲皮素处理后,随着H446细胞密度的降低,细胞核部分皱缩并裂解为凋亡小体,其对H446细胞的促凋亡作用呈现出显著的剂量依赖性,40μmol/L组H446细胞的凋亡率即显著高于对照组[(8.3±0.4)%vs(4.0±0.5)%;P<0.01],当药物浓度达到200μmol/L时凋亡率达到最高。槲皮素能将H446细胞周期特异性地阻滞于G2/M期。与对照组相比,200μmol/L槲皮素处理组P53[(4.98±0.91)vs(0.68±0.26),P<0.01]和Bax蛋白[(4.26±0.23)vs(0.89±0.29),P<0.01]表达显著升高,Bcl-2蛋白表达[(0.36±0.06)vs(8.23±1.65),P<0.01]显著下降。结论:槲皮素能够抑制H446细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控Bax、p53和Bcl-2等细胞凋亡相关蛋白有关。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 h446细胞 槲皮素 凋亡 增殖 BAX P53 BCL-2
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Notch3信号通路介导SAHA诱导的小细胞肺癌H446细胞凋亡 被引量：3
4
作者 陈红莲 刘辉 +1 位作者 杨旭光 袁磊 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1556-1561,共6页
目的:观察辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人小细胞肺癌H446细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测SAHA的细胞毒作用并测定IC50,采用流式细胞术检... 目的:观察辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人小细胞肺癌H446细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测SAHA的细胞毒作用并测定IC50,采用流式细胞术检测细胞凋亡,转染N3ICD真核表达质粒构建高表达N3ICD的H446细胞系,采用RT-PCR法检测Notch3的mRNA水平,采用Western blot法检测Notch3、N3ICD、Puma和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:SAHA可显著降低H446细胞存活率且呈剂量依赖性(P<0.05),SAHA作用48 h的IC50为1.91μmol/L;SAHA可诱导H446细胞凋亡且具有剂量依赖性(P<0.05);H446细胞中Notch3基因表达呈阴性,SAHA可使H446细胞Notch3基因恢复表达并激活Notch3信号通路(P<0.05);沉默Notch3基因可抑制SAHA对H446细胞的促凋亡作用(P<0.05);N3ICD高表达使H446细胞中Puma和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P<0.01)。结论:在体外SAHA可激活人小细胞肺癌H446细胞Notch3信号通路,上调Puma蛋白表达水平,诱导H446细胞凋亡。 展开更多
关键词 辛二酰苯胺异羟肟酸 小细胞肺癌 NOTCh3 细胞凋亡 h446细胞
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澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨 被引量：12
5
作者 黄文斯 王颖 +3 位作者 朱海涛 吴荧荧 谢晓东 王冬青 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期416-421,共6页
背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合... 背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 澳洲茄碱 凋亡 肺癌细胞株h446
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转录因子SP1通过调控ABCC1影响小细胞肺癌H446/DDP细胞耐药的机制 被引量：2
6
作者 高月娟 李志平 +1 位作者 贺飞飞 王加良 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1025-1031,共7页
目的:探讨敲减转录因子特异蛋白1(SP1)对小细胞肺癌(SCLC)H466/DDP细胞顺铂(DDP)耐药的影响及其分子机制。方法:构建敲减SP1同时过表达ATP结合盒亚家族C成员1(ABCC1)的SCLC H466/DDP细胞,采用IHC法检测SP1、ABCC1在非耐药和耐药SCLC组... 目的:探讨敲减转录因子特异蛋白1(SP1)对小细胞肺癌(SCLC)H466/DDP细胞顺铂(DDP)耐药的影响及其分子机制。方法:构建敲减SP1同时过表达ATP结合盒亚家族C成员1(ABCC1)的SCLC H466/DDP细胞,采用IHC法检测SP1、ABCC1在非耐药和耐药SCLC组织中的表达,用Spearman r法分析SP1与ABCC1在SCLC组织中表达的相关性;WB法检测SP1、ABCC1、CD44在转染后H446/DDP细胞中的表达;CCK-8法、FCM术、微球实验检测转染后H446/DDP细胞的增殖、凋亡及自我复制能力的变化;染色质免疫共沉淀(CHIP)实验检测SP1是否是ABCC1的转录因子。结果:耐药细胞H446/DDP和耐药SCLC组织中的SP1、ABCC1蛋白水平均高于H446细胞和非耐药SCLC组织(均P<0.05),SCLC组织中的SP1、ABCC1蛋白表达呈正相关;敲减SP1抑制H446/DDP细胞的增殖活力,降低CD44、ABCC1蛋白表达水平、减少细胞微球形成数(均P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);SP1是ABCC1的转录因子。结论:转录因子SP1通过调控ABBC1的表达影响SCLC H446/DDP细胞的耐药,SP1是SCLC对DDP耐药的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 顺铂 h446/DDP细胞 耐药 ATP结合盒亚家族C成员1 特异蛋白1 转录因子
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千金苇茎汤调控人肺小细胞癌H446细胞凋亡的分子机制研究 被引量：8
7
作者 蒋凤荣 蒋日磊 +1 位作者 张旭 黄玉芳 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2009年第10期1633-1635,共3页
目的:研究千金苇茎汤对人肺小细胞癌H446增殖与凋亡的影响。方法:将千金苇茎汤通过化学分离法制得水提部位;分为不同药物浓度,与H446共同培养,流式细胞仪细胞周期检测以及荧光显微镜线检测凋亡结果;AgNOR染色观察以及免疫组织化学检测P... 目的:研究千金苇茎汤对人肺小细胞癌H446增殖与凋亡的影响。方法:将千金苇茎汤通过化学分离法制得水提部位;分为不同药物浓度,与H446共同培养,流式细胞仪细胞周期检测以及荧光显微镜线检测凋亡结果;AgNOR染色观察以及免疫组织化学检测PCNA、caspase-3蛋白的变化。结果:不同浓度的千金苇茎汤水提部位与H446培养后,细胞凋亡率明显升高、AgNOR数目减少以及PCNA、caspase-3蛋白明显的改变(P<0.01),并有一定的浓度依赖性。结论:千金苇茎汤水提部位可以有效抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 千金苇茎汤 人肺细胞株(h446) 肺癌
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MDR相关新基因CA916798真核表达载体的构建及其对H446细胞增殖的影响 被引量：5
8
作者 王海晶 杨和平 周向东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第24期2315-2318,共4页
目的构建新基因CA916798真核表达载体,并观察其对H446增殖的影响。方法以人A549细胞总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增获得CA916798开放阅读框序列,连接入pBluescriptⅡSK克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,酶切与DNA... 目的构建新基因CA916798真核表达载体,并观察其对H446增殖的影响。方法以人A549细胞总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增获得CA916798开放阅读框序列,连接入pBluescriptⅡSK克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,酶切与DNA测序鉴定准确,再用双酶切方法将CA916798开放阅读框序列定向连接到真核表达载体pQE-Trisystem中,构成pQE-Tri-CA916798,将pQE-Tri-CA916798转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,脂质体转染人小细胞肺癌细胞系H446细胞,选取稳定转染不同质粒的H446细胞,采用MTT绘制细胞增殖曲线,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果扩增出CA916798开放阅读框序列,大小约为350bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致,测序结果完全正确。转染了pQE-Tri-CA916798的H446细胞顺铂作用后增殖速度加快,凋亡率下降。结论成功构建了pQE-Tri-CA916798真核表达质粒,并初步证实了其与顺铂诱导的肺癌多药耐药相关。 展开更多
关键词 肺癌多药耐药相关基因 CA916798基因 h446细胞 表达载体
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肉色香蘑子实体提取物的体外抗氧化与抗肿瘤活性研究 被引量：4
9
作者 陈颖 孙红 +1 位作者 张树斌 王立安 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第23期214-217,共4页
以肉色香蘑子实体为材料,采用不同有机溶剂萃取子实体干粉,除多糖外,各有机相提取物的得率为:乙醇相>石油醚相>乙酸乙酯相。以叔丁基羟基茴香醚(BHA)为阳性对照,通过抑制1,1-二苯代苦味肼基(DPPH)自由基实验和清除超氧阴离子自由... 以肉色香蘑子实体为材料,采用不同有机溶剂萃取子实体干粉,除多糖外,各有机相提取物的得率为:乙醇相>石油醚相>乙酸乙酯相。以叔丁基羟基茴香醚(BHA)为阳性对照,通过抑制1,1-二苯代苦味肼基(DPPH)自由基实验和清除超氧阴离子自由基实验,对各提取物的体外抗氧化活性进行测定,结果显示:各有机相提取物和多糖均具有不同程度的抗氧化活性,以乙酸乙酯相、乙醇相提取物的抗氧化活性最强。以抗肿瘤药物顺铂为阳性对照,采用MTT法对各提取物的体外抗肿瘤活性进行检测,结果表明:各相提取物均具不同程度的抗肿瘤活性,其中乙酸乙酯相的抗肿瘤活性最强,达到82.7%,显著(P<0.05)高于阳性对照;其次为多糖,同浓度下与顺铂较接近。综上所述,肉色香蘑子实体含丰富的抗氧化、抗肿瘤活性成分。 展开更多
关键词 叔丁基羟基茴香醚 1 1-二苯代苦味肼基自由基 顺铂 MTT法 h446肺癌细胞株
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