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人内皮抑素小环载体的构建及其在真核细胞中的表达
1
作者
徐本玲
吴江雪
+4 位作者
薛刚
赵鹏
肖林
黄必军
黄文林
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第B03期17-20,共4页
【目的】构建表达人内皮抑素的小环DNA载体与普通质粒,并观察其在真核细胞中的表达。【方法】从pcD- NA3.1(+)中扩增Pcmv和BGHpolyA片段,定向克隆于pSP72质粒中,构建成pSP72-Pcmv-BGHpolyA。将从pSP72-hEndo- statin-IRES-EGFP质粒中酶...
【目的】构建表达人内皮抑素的小环DNA载体与普通质粒,并观察其在真核细胞中的表达。【方法】从pcD- NA3.1(+)中扩增Pcmv和BGHpolyA片段,定向克隆于pSP72质粒中,构建成pSP72-Pcmv-BGHpolyA。将从pSP72-hEndo- statin-IRES-EGFP质粒中酶切得到的hEndostatin-IRES-EGFP分别克隆到pSP72-Pcmv-BGHpolyA和pcDNA3.1(+),构建成pSP72-Pcmv-hEndostatin-IRES-EGFP-BGHpolyA(pSP72-hES)和pcDNA3.1-hEndostatin-IRES-EGFP(pcDNA-hES)。对质粒pSP72-hES和p(?)C31分别做双酶切,体外连接,构建成p(?)-hES。p(?)-hES转化TOP10细菌后,通过介导分子内重组,降解细菌骨架,获取只含目的基因表达盒的小环DNA载体mc-hES。将mc-hES、p(?)-hES、pcDNA-hES分别转染CNE2细胞48 h后,通过RT-PCR和Western blot观察其表达。【结果】松建的p(?)-hES、mc-hES、pcDNA-hES序列正确,转染CNE2细胞后,3种质粒均有人内皮抑素蛋白的表达。【结论】成功构建了真核表达载体mc-hES、pcDNA-hES、p(?)-hES,经转染细胞后在mRNA和蛋白水平证实有hEndostatin的表达,且小环组明显高于其他两组。在相同情况下,小环载体的表达强度优于传统的质粒载体。
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关键词
小环dna载体
内皮抑索
增强的绿色荧光蛋白
非病毒
载体
质粒
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职称材料
题名
人内皮抑素小环载体的构建及其在真核细胞中的表达
1
作者
徐本玲
吴江雪
薛刚
赵鹏
肖林
黄必军
黄文林
机构
华南肿瘤学国家重点实验室//中山大学肿瘤防治中心
成都军区总医院
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第B03期17-20,共4页
基金
"973"计划项目(2004CB518801)
博士后基金(2004036156)
文摘
【目的】构建表达人内皮抑素的小环DNA载体与普通质粒,并观察其在真核细胞中的表达。【方法】从pcD- NA3.1(+)中扩增Pcmv和BGHpolyA片段,定向克隆于pSP72质粒中,构建成pSP72-Pcmv-BGHpolyA。将从pSP72-hEndo- statin-IRES-EGFP质粒中酶切得到的hEndostatin-IRES-EGFP分别克隆到pSP72-Pcmv-BGHpolyA和pcDNA3.1(+),构建成pSP72-Pcmv-hEndostatin-IRES-EGFP-BGHpolyA(pSP72-hES)和pcDNA3.1-hEndostatin-IRES-EGFP(pcDNA-hES)。对质粒pSP72-hES和p(?)C31分别做双酶切,体外连接,构建成p(?)-hES。p(?)-hES转化TOP10细菌后,通过介导分子内重组,降解细菌骨架,获取只含目的基因表达盒的小环DNA载体mc-hES。将mc-hES、p(?)-hES、pcDNA-hES分别转染CNE2细胞48 h后,通过RT-PCR和Western blot观察其表达。【结果】松建的p(?)-hES、mc-hES、pcDNA-hES序列正确,转染CNE2细胞后,3种质粒均有人内皮抑素蛋白的表达。【结论】成功构建了真核表达载体mc-hES、pcDNA-hES、p(?)-hES,经转染细胞后在mRNA和蛋白水平证实有hEndostatin的表达,且小环组明显高于其他两组。在相同情况下,小环载体的表达强度优于传统的质粒载体。
关键词
小环dna载体
内皮抑索
增强的绿色荧光蛋白
非病毒
载体
质粒
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
Q81 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
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1
人内皮抑素小环载体的构建及其在真核细胞中的表达
徐本玲
吴江雪
薛刚
赵鹏
肖林
黄必军
黄文林
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
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