从非变性聚丙烯酰胺凝胶中快速高效回收DNA片段 被引量：2

1

作者 周颐 王忆平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期194-198,共5页

获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂... 获得特异性的DNA是开展多种分子生物学试验的前提,具有高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化特异性DNA的首选。借助液氮对凝胶的固化作用,介绍了通过研磨破坏聚丙烯酰胺凝胶结构回收纯化DNA的方法。将通过该方法回收纯化的DNA和采用琼脂糖凝胶电泳回收纯化的DNA,经由聚丙烯酰胺凝胶电泳的进一步检测,结果显示,该方法与琼脂糖凝胶电泳回收法相比,所获得DNA的纯度高,特异性好,且效率相当。在提高DNA特异性的同时也兼具了经济高效耗时少等优点,可以广泛应用。 展开更多

关键词 非变性聚丙烯酰胺凝胶 琼脂糖凝胶 小片段dna回收纯化 凝胶阻滞试验

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从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本 被引量：7

2

作者 朱玉君 樊叶杨 庄杰云 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期193-195,共3页

介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。

关键词 非变性聚丙烯酰胺凝胶 回收纯化 目标dna片段

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一种有效回收小分子DNA片段的方法 被引量：5

3

作者 张亮 赵晓瑜 +1 位作者 康现江 穆淑梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第1期99-100,104,共3页

介绍了一种有效回收小于200bp DNA片段的方法。用改进的冻融-离心回收法对155bp的DNA片段进行回收,并且与常规冻融-离心回收、TaKaRa回收试剂盒的结果做对比,用琼脂糖凝胶电泳检测回收结果,紫外吸收法定量分析。结果证明:改进的方法是... 介绍了一种有效回收小于200bp DNA片段的方法。用改进的冻融-离心回收法对155bp的DNA片段进行回收,并且与常规冻融-离心回收、TaKaRa回收试剂盒的结果做对比,用琼脂糖凝胶电泳检测回收结果,紫外吸收法定量分析。结果证明:改进的方法是一种经济、方便、可靠的回收小分子DNA片段的方法。 展开更多

关键词 PCR产物 小分子dna片段 回收方法

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电洗脱法纯化DNA片段 被引量：7

4

作者 汪渊 桂淑玉 《安徽医科大学学报》 CAS 1996年第6期566-568,共3页

电洗脱法纯化ＤＮＡ片段汪渊，桂淑玉分子生物学研究方法作为一类十分有用的技术已在生物学科的各个领域得到广泛的应用。ＤＮＡ片段的纯化是获得目的ＤＮＡ的手段，是分子生物学的基本方法，是各种分子生物学研究方法的基础。目前，Ｄ... 电洗脱法纯化ＤＮＡ片段汪渊，桂淑玉分子生物学研究方法作为一类十分有用的技术已在生物学科的各个领域得到广泛的应用。ＤＮＡ片段的纯化是获得目的ＤＮＡ的手段，是分子生物学的基本方法，是各种分子生物学研究方法的基础。目前，ＤＮＡ片段的纯化方法众多，如电洗脱法... 展开更多

关键词 dna片段 纯化 电洗脱法

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一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法 被引量：2

5

作者 向小华 焦禹顺 +4 位作者 吴新儒 程亚增 侯烁 刘贯山 王元英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期68-72,共5页

利用高分辨率的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、纯化特异性小片段DNA的首选方法,也是开展后续多种分子生物学试验的前提。本试验比较了改良煮沸法(液氮研磨+煮沸+低温浓缩)、煮沸法及直取法回收小片段DNA,以回收样品模板进行第二次PC... 利用高分辨率的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、纯化特异性小片段DNA的首选方法,也是开展后续多种分子生物学试验的前提。本试验比较了改良煮沸法(液氮研磨+煮沸+低温浓缩)、煮沸法及直取法回收小片段DNA,以回收样品模板进行第二次PCR扩增,结果表明:改良方法回收的DNA的纯度高,特异性好,回收率与经典煮沸法相当。在保证回收产物的特异性时,用低温浓缩法替代乙醇/醋酸钠共沉淀也具有可行性及一定的创新性。 展开更多

关键词 非变性聚丙烯凝胶 dna小片段 二次PCR 改良煮沸法 胶回收

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大片段DNA提取和纯化的优化方案 被引量：4

6

作者 陈琰 艾云灿 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第9期5096-5097,5100,共3页

[目的]研究大片段DNA提取和纯化的优化方案研究。[方法]在传统SDS提取法的基础上,对大片段DNA的提取和纯化过程进行了改进。[结果]建立了一种优化的DNA提取和纯化的方案,通过该方案能够得到片段大、纯度高的DNA。[结论]为今后大片段DNA... [目的]研究大片段DNA提取和纯化的优化方案研究。[方法]在传统SDS提取法的基础上,对大片段DNA的提取和纯化过程进行了改进。[结果]建立了一种优化的DNA提取和纯化的方案,通过该方案能够得到片段大、纯度高的DNA。[结论]为今后大片段DNA的提取和纯化提供了参考。 展开更多

关键词 大片段dna 提取 纯化 优化方案

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利用高效的大片段DNA回收方法改良Fosmid文库的构建

7

作者 张翠翠 赵胜 +2 位作者 王越 张鹏 常玉晓 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期220-227,共8页

外源DNA插入片段为40 kb左右的Fosmid文库在基因组学研究中有广泛的应用,但长期以来,40 kb外源片段的分离与纯化依赖于传统的切胶并电洗脱至透析袋的方法,难以得到足够量的DNA片段,极大降低Fosmid文库构建的成功率。通过改进全自动核酸... 外源DNA插入片段为40 kb左右的Fosmid文库在基因组学研究中有广泛的应用,但长期以来,40 kb外源片段的分离与纯化依赖于传统的切胶并电洗脱至透析袋的方法,难以得到足够量的DNA片段,极大降低Fosmid文库构建的成功率。通过改进全自动核酸/蛋白质回收系统SageELF的操作流程,建立一种简单、便捷、高效地回收40 kb左右DNA片段的方法,并用其成功地构建高质量的Fosmid文库。从文库中随机挑选的25个单克隆,经过测序及酶切分析,发现该文库中插入的DNA片段大小为37.9±5.2 kb。以上结果表明,利用改良的操作方法回收40 kb基因组DNA,操作简捷、高效,片段大小精准;另外,用该DNA片段构建的Fosmid文库,插入片段比较集中,有利于后续的基因组学分析。 展开更多

关键词 FOSMID文库 大片段dna回收 透析袋

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聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化DNA片段方法的改进

8

作者 李树义 金春元 孙开来 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期217-217,共1页

聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化ＤＮＡ片段方法的改进李树义金春元孙开来（基础医学院分子遗传学教研室，沈阳１１０００１）关键词分离；纯化；ＤＮＡ片段；聚丙烯酰胺凝胶在ＰＣＲ扩增目的基因片段时，经常出现引物二聚体，非特异扩增带以... 聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化ＤＮＡ片段方法的改进李树义金春元孙开来（基础医学院分子遗传学教研室，沈阳１１０００１）关键词分离；纯化；ＤＮＡ片段；聚丙烯酰胺凝胶在ＰＣＲ扩增目的基因片段时，经常出现引物二聚体，非特异扩增带以及扩增产物产量过低等问题。改变ＰＣ... 展开更多

关键词 分离 纯化 dna片段 聚丙烯酰胺凝胶

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琼脂糖凝胶中DNA的回收

9

作者 张桂筠 张兆松 +1 位作者 陈淑贞 沈一平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1996年第3期241-243,共3页

用冻结压榨法、玻璃粉吸附洗脱法和透析袋电洗脱法,分别从琼脂糖凝胶中回收日本血吸虫中国大陆株副肌球蛋白编码基因的聚合酶链反应(PCR)扩增产物,经 BamH Ⅰ及 EcoR Ⅰ双酶切的线状质粒载体 pTrcHis A,以及碱裂解法制备的质粒载体,均... 用冻结压榨法、玻璃粉吸附洗脱法和透析袋电洗脱法,分别从琼脂糖凝胶中回收日本血吸虫中国大陆株副肌球蛋白编码基因的聚合酶链反应(PCR)扩增产物,经 BamH Ⅰ及 EcoR Ⅰ双酶切的线状质粒载体 pTrcHis A,以及碱裂解法制备的质粒载体,均取得较为满意的回收率。冻结压榨法适于回收少量的 DNA,透析袋电洗脱法适于回收较大量 DNA,玻璃粉吸附洗脱法则应用范围较宽。 展开更多

关键词 琼脂糖凝胶电泳 dna 回收 纯化

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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)染色体DNA的分离纯化

10

作者 黄为 马振刚 +3 位作者 张时恒 潘国庆 李田 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期523-528,共6页

为了获取可供家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)单染色体测序的基础材料,通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分离家蚕微孢子虫CQ1株系的染色体DNA,随后切取含有目的染色体DNA条带的琼脂糖胶块,分别利用电洗脱法、柱式胶回收试剂盒法及玻璃奶胶... 为了获取可供家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)单染色体测序的基础材料,通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分离家蚕微孢子虫CQ1株系的染色体DNA,随后切取含有目的染色体DNA条带的琼脂糖胶块,分别利用电洗脱法、柱式胶回收试剂盒法及玻璃奶胶回收试剂盒法进行染色体DNA的分离纯化实验。结果显示3种方法均能回收到目的染色体DNA,但分离纯化的效率和样品质量存在差异:电洗脱法对胶块中的DNA损失较大,回收的染色体DNA含量低,而柱式胶回收试剂盒回收的染色体DNA断裂严重,因此这2种方法获得的样品质量均达不到染色体建库测序的要求;通过优化后的玻璃奶胶回收试剂盒法获得的染色体DNA相对完整且污染较少,质量检验分析133μL样品中的DNA质量浓度为8.495 ng/μL(DNA总量1.13μg),达到后续构建染色体测序文库的要求。玻璃奶胶回收试剂盒法不仅适用于家蚕微孢子虫染色体DNA的分离纯化,也可供基因组较小的物种制备单染色体建库测序材料参考。 展开更多

关键词 家蚕微孢子虫 分子核型 染色体dna 纯化 玻璃奶胶回收试剂盒

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一种土壤微生物总DNA的高效提取方法 被引量：29

11

作者 黄婷婷 曹慧 +1 位作者 王兴祥 崔中利 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期662-666,共5页

获得高浓度、大片段、多样性程度高的土壤微生物总DNA 是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础。本文采用间接法(菌体细胞回收法)提取红壤地区两种土壤类型的土壤微生物总DNA,定量计算其回收率,并与直接法(细胞原位裂解法)比较了提... 获得高浓度、大片段、多样性程度高的土壤微生物总DNA 是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础。本文采用间接法(菌体细胞回收法)提取红壤地区两种土壤类型的土壤微生物总DNA,定量计算其回收率,并与直接法(细胞原位裂解法)比较了提取效率和纯度。结果表明:红壤地区2种土壤每克干土的总DNA提取量,间接法约为0.34和0.53礸/g干土,直接法约为13.62和24.32礸/g干土;间接法的提取效率低于直接法,但所得DNA片段较大,且Sau 3AⅠ 酶切和16 S rDNA通用引物PCR扩增结果显示,间接法比直接法更能有效地去除土壤中的某些抑制剂,所得总DNA的纯度更高,有利于后续操作。 展开更多

关键词 土壤微生物 总dna提取 细胞回收 粗dna纯化

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人地中海贫血β654基因作为外源基因用于转基因的制备方法 被引量：1

12

作者 韦相才 卢丽 +3 位作者 黄冰 韩俊英 洪迅 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第2期119-123,共5页

目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础。方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连... 目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础。方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连接酶反应将其克隆入含βLCR调控序列的基础载体pBGT51质粒中,经PCR扩增、酶切、反向点杂交及DNA测序鉴定重组质粒,用EcoRⅤ酶切获得转基因所用的外源基因。结果将人地中海贫血β654基因作为外源基因克隆入基础载体pBGT51质粒中构建了重组质粒βBGT51,用EcoRV酶切获得含人β654基因及βLCR调控序列的6.5kb的DNA片段,制备了可用于显微注射转基因的外源基因。结论采用该方法构建的含人地中海贫血β654基因的重组质粒,可获得用于显微注射转基因的外源基因。 展开更多

关键词 地中海贫血 外源基因 制备方法 转基因小鼠 重组质粒 调控序列 显微注射 PCR扩增 dna测序 dna片段 PCR法 分离纯化 基因克隆 LCR 基础 纯合子 杂交法 酶反应 酶切 点杂交 制作 反向 载体 构建

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睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达 被引量：2

13

作者 张国华 丛爱日 +3 位作者 徐国宾 孙立颖 严岩 夏铁安 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期203-206,共4页

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据... 目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。 展开更多

关键词 睾丸酮丛毛单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶 克隆表达 大肠杆菌 基因组dna 相对分子质量 亲和层析纯化 诱导表达 PCR扩增 分离鉴定 初步鉴定 生化特征 设计引物 扩增片段 重组质粒 培养特征 生化反应 融合蛋白 测定方法 酶活性

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