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江西铅山红芽芋胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存技术的研究 被引量:5
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作者 洪森荣 尹明华 王艾平 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期333-338,共6页
探索江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的小滴玻璃化法超低温保存,为其种质资源的超低温保存提供技术基础和理论依据。植物组织培养和单因子试验的方法。江西铅山红芽芋胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存的较佳程序为:约0.2 g胚性愈伤组织... 探索江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的小滴玻璃化法超低温保存,为其种质资源的超低温保存提供技术基础和理论依据。植物组织培养和单因子试验的方法。江西铅山红芽芋胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存的较佳程序为:约0.2 g胚性愈伤组织在25℃下转入MS+2 mg·L-1TDZ+1 mg·L-1NAA+0.5 mmol·L-1蔗糖的培养基中,于14 h·d-1光周期下预培养3 d后用MS+2 mmol·L-1甘油+0.4 mmol·L-1蔗糖在25℃下装载20min,然后用PVS2在0℃下脱水40 min,吸取5滴PVS2到铝箔条上,将脱水后的红芽芋胚性愈伤组织块转到铝箔条上的PVS2液滴里。附有胚性愈伤组织块的铝箔条在液氮里蘸一下,然后迅速将其转入2 mL装满液氮的冷冻管中,再投入液氮保存1 d。从液氮中取出冷冻管中的铝箔条,浸入用40℃温水预热过的洗涤液(MS+2 mg·L-1TDZ+1 mg·L-1NAA+1.2 mmol·L-1蔗糖)中,使胚性愈伤组织块从铝箔条上脱落下来,然后再将胚性愈伤组织块转入新鲜的洗涤液中洗涤3次,每次10 min。洗涤后转入MS+2 mg·L-1TDZ+1 mg·L-1NAA固体培养基上,先暗培养7 d再转到14 h·d-1光周期中培养。30 d后将分化出的胚状体再次转入MS+2 mg·L-1TDZ+1 mg·L-1NAA固体培养基上可再生完整植株。红芽芋胚性愈伤组织包埋玻璃化超低温保存后的平均成活率约为80%。红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗没有发生形态学、生理学和细胞学的变异。红芽芋胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存可以保证其遗传资源的稳定性,为江西铅山红芽芋种质资源的离体保存提供了一条新的途径。 展开更多
关键词 江西铅山 红芽芋 胚性愈伤组织 小滴玻璃化法 超低温保存
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黄独胚性悬浮细胞的小滴玻璃化法超低温保存 被引量:2
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作者 尹明华 李诚欣 +4 位作者 李祥媛 刘凯盈 封昀 卢霞 柯维忠 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第11期2332-2339,共8页
【目的】建立和优化黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存的技术体系。【方法】通过单因子试验探究各种条件对黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存效果的影响,并通过RAPD分子标记检测其冻后再生苗的遗传稳定性。【结果】黄独胚... 【目的】建立和优化黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存的技术体系。【方法】通过单因子试验探究各种条件对黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存效果的影响,并通过RAPD分子标记检测其冻后再生苗的遗传稳定性。【结果】黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存较佳的技术体系如下:黄独胚性悬浮细胞(25±1)℃下在MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D+0.8 mol/L蔗糖的液体培养基中预培养4 d;(25±1)℃下在装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖,pH 5.8)中装载70 min;0℃下在PVS2(300 g/L甘油+150 g/L乙二醇+150 g/L二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖,pH 5.8)中脱水100 min;冻后铝箔条浸入37℃恒温预热过的培养液(MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+30 g/L蔗糖,pH 5.8)中化冻;(25±1)℃下用洗涤液(MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+1.2 mol/L蔗糖,pH 5.8)进行洗涤,洗涤3次,每次洗涤时间为10 min;洗涤后先黑暗培养5 d再置于光周期下培养。黄独胚性悬浮细胞冻后相对存活率为90.5%±4.4%。液氮保存时间对黄独胚性悬浮细胞冻后存活率无显著影响。RAPD检测结果表明黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存再生植株无变异,未发现遗传稳定性发生变化。【结论】本试验建立的黄独胚性悬浮细胞小滴玻璃化法超低温保存技术程序较为可靠,可为黄独胚性悬浮细胞的长期保存提供技术参考。 展开更多
关键词 黄独 胚性悬浮细胞 小滴玻璃化法 超低温保存
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红掌小滴玻璃化法超低温保存研究 被引量:4
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作者 高洁 李志英 +5 位作者 张玄兵 谢龙海 陈莹 朱振芬 符运柳 徐立 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第9期1909-1916,共8页
以红掌腋芽为试材,探讨小滴玻璃化法对红掌超低温保存的影响因素,并对再生植株进行遗传稳定性检测。结果表明,红掌腋芽置于含0.4 mmol/L蔗糖和2 mmol/L甘油的MS固体培养基中预培养4 d后,在0℃下80%PVS_(2)处理50 min,转到铝箔条上PVS_(2... 以红掌腋芽为试材,探讨小滴玻璃化法对红掌超低温保存的影响因素,并对再生植株进行遗传稳定性检测。结果表明,红掌腋芽置于含0.4 mmol/L蔗糖和2 mmol/L甘油的MS固体培养基中预培养4 d后,在0℃下80%PVS_(2)处理50 min,转到铝箔条上PVS_(2)液滴中,将铝箔条迅速浸入液氮中,2 s后直接转入装满液氮的冻存管中,投入液氮至少保持30 min;室温下用含有1.2 mmol/L蔗糖的MS液体培养基复温并卸载20 min后置于恢复培养基上,腋芽存活率高达63.70%。通过ISSR和SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性未发生改变。该研究结果为红掌种质资源的长期保存提供有效途径。 展开更多
关键词 红掌 小滴玻璃化法 超低温保存 腋芽 遗传稳定性
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小滴玻璃化法脱除蝴蝶兰种苗建兰花叶病毒的研究 被引量:2
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作者 王仁睿 汤玲莉 +2 位作者 苏仕林 刘成才 李杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期514-521,共8页
以感染建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)的蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite)品种‘满天红’为试材,通过筛选蔗糖预培养浓度、预培养时间、PVS2(Plant vitrification solution 2,PVS2)处理时间三个关键因素,建立蝴蝶兰茎尖小... 以感染建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)的蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite)品种‘满天红’为试材,通过筛选蔗糖预培养浓度、预培养时间、PVS2(Plant vitrification solution 2,PVS2)处理时间三个关键因素,建立蝴蝶兰茎尖小滴玻璃化超低温脱毒体系,将再生的茎尖诱导类原球茎,再分化成苗,经RT-PCR检测CymMV的脱除情况,阴性结果的再生植株进行增殖和诱导生根。结果显示:最佳预培养为:BM+0.6 mol·L-1蔗糖处理1~2 d,超低温茎尖的成活率为70%~76.7%,再生率为53.3%~56.7%;PVS2最佳处理时间为60~90 min,超低温茎尖的成活率为73.3%~76.7%,再生率为50.0%~56.7%。再生植株经RT-PCR检测,CymMV的脱除率为50%。该研究为兰科植物脱除CymMV提供了理论和技术基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 茎尖 超低温 小滴玻璃化法 建兰花叶病毒
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香蕉离体茎尖超低温保存研究 被引量:16
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作者 李俊慧 何平 +4 位作者 陈晓玲 卢新雄 辛霞 张志娥 辛萍萍 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期34-39,共6页
以香蕉(Musa spp.)试管苗为试材,对其离体茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究。小滴玻璃化法和玻璃化法超低温保存后再生率的差异表明,香蕉更适合用小滴玻璃化法进行超低温保存。香蕉小滴玻璃化法超低温保存的方案如... 以香蕉(Musa spp.)试管苗为试材,对其离体茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究。小滴玻璃化法和玻璃化法超低温保存后再生率的差异表明,香蕉更适合用小滴玻璃化法进行超低温保存。香蕉小滴玻璃化法超低温保存的方案如下:试管苗在60g/L蔗糖的MS培养基上培养1—2个月,剥离带有1~2片叶原基的茎尖,室温下装载30min(可延长至4h),0℃下PVS2处理40~50min。6个基因型的14个品种的再生率平均为46.9%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。该结果为香蕉种质资源的长期保存提供了理论依据和技术支撑。 展开更多
关键词 香蕉 离体茎尖 小滴玻璃化法 超低温保存 遗传稳定性
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