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小反刍兽疫病毒N蛋白原核表达与间接ELISA检测方法的建立 被引量:16
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作者 孙雨 赵柏林 +7 位作者 王晓英 董浩 翟新验 曲萍 胡冬梅 杨天意 石慧 宋晓晖 《动物医学进展》 北大核心 2017年第1期6-10,共5页
小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白是病毒粒子的主要结构蛋白,也是诊断小反刍兽疫的主要靶蛋白。为获得高效表达的可溶性N蛋白,并建立基于N蛋白的小反刍兽疫的间接ELISA检测方法,通过优化密码子、优化表达条件等条件探索,在大肠埃希菌表达系统... 小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白是病毒粒子的主要结构蛋白,也是诊断小反刍兽疫的主要靶蛋白。为获得高效表达的可溶性N蛋白,并建立基于N蛋白的小反刍兽疫的间接ELISA检测方法,通过优化密码子、优化表达条件等条件探索,在大肠埃希菌表达系统中获得了高效表达的可溶性N蛋白,进一步基于N蛋白建立了间接ELISA检测方法,该方法对其他相关的羊类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数均低于9%,具有良好的重复性。对480份临床血清样品进行检测,同时用法国IDVET竞争ELISA试剂盒进行比较,符合率达到98.33%。本研究为进一步开发成熟的小反刍兽疫抗体检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍 n活性蛋白 可溶性表达与纯化 间接酶联免吸附试验
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小反刍兽疫病毒N蛋白B细胞表位预测、合成及间接ELISA方法的建立 被引量:5
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作者 曾少灵 阮周曦 +10 位作者 唐金明 廖立珊 孙洁 林庆燕 吕建强 叶奕优 祝贺 李希强 王红英 杨俊兴 花群义 《动物医学进展》 北大核心 2015年第8期40-44,共5页
基于氨基酸序列和采用Gamier-Robson和Chou-Fasman等多种方法分析的α-螺旋、β-折叠和转角等二级结构结果,预测小反刍兽疫病毒N蛋白的B细胞抗原表位。设计4段多肽并进行人工合成,作为包被抗原建立小反刍兽疫血清抗体间接ELISA检测方法... 基于氨基酸序列和采用Gamier-Robson和Chou-Fasman等多种方法分析的α-螺旋、β-折叠和转角等二级结构结果,预测小反刍兽疫病毒N蛋白的B细胞抗原表位。设计4段多肽并进行人工合成,作为包被抗原建立小反刍兽疫血清抗体间接ELISA检测方法,用于检测小反刍兽疫山羊临床血清样品,以对预测的B细胞抗原表位进行验证。结果显示,研制的间接ELISA敏感性为96.0%,特异性为96.25%,与进口标准竞争ELISA试剂盒的符合率为96.15%。结果表明,研制的间接ELISA方法适用于小反刍兽疫临床血清抗体的检测。 展开更多
关键词 小反刍病毒 n蛋白 B细胞表位 酶联免吸附试验
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稳定表达小反刍兽疫病毒N蛋白的CHO细胞系的建立及表达产物的抗原性鉴定 被引量:3
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作者 李翠翠 孙一瑞 +2 位作者 王子龙 陈伟业 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期262-265,共4页
为制备具有天然抗原活性的小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳(N)蛋白,本研究建立了稳定表达PPRV N蛋白的真核细胞系。首先,将去除核定位信号(NLS)编码序列并且在其5'端引入组织纤维蛋白溶酶原抗原信号肽(tPA SP)编码序列的PPRV N基因克隆... 为制备具有天然抗原活性的小反刍兽疫病毒(PPRV)核衣壳(N)蛋白,本研究建立了稳定表达PPRV N蛋白的真核细胞系。首先,将去除核定位信号(NLS)编码序列并且在其5'端引入组织纤维蛋白溶酶原抗原信号肽(tPA SP)编码序列的PPRV N基因克隆至真核表达质粒pCAGG-neo中,构建了重组质粒pCAGG-N△NLS/his。并将其转染于CHO细胞中,经G418压力培养并采用间接免疫荧光试验(IFA)及western blot试验筛选鉴定,获得稳定表达PPRV N蛋白的细胞系。通过IFA及western blot试验鉴定His标签表明该细胞系传代至22代仍能够稳定表达PPRV N蛋白。最后通过western blot等试验表明该蛋白能够与绵羊抗PPRV多克隆抗体反应,进一步表明该细胞系表达的PPRV N蛋白具有天然的N蛋白抗原性,为PPRV病原学诊断等相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍 核衣壳蛋白 CHO细胞 细胞系
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原核载体表达的小反刍兽疫病毒N蛋白的保存期与相关抗原性、特异性研究 被引量:1
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作者 孙雨 宋晓晖 +7 位作者 肖颖 李秀梅 王睿男 吕园园 蒋菲 李晓霞 任雪建 王传彬 《中国草食动物科学》 CAS 2020年第1期27-32,共6页
为明确使用原核表达载体pET-32a表达纯化的小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白(N)的最佳保存期,检测其相关抗原性与特异性,通过优化N抗原序列的密码子和蛋白表达纯化条件,在大肠杆菌表达系统中成功获得了3批次高效表达的小反刍兽疫病毒可溶性重组... 为明确使用原核表达载体pET-32a表达纯化的小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白(N)的最佳保存期,检测其相关抗原性与特异性,通过优化N抗原序列的密码子和蛋白表达纯化条件,在大肠杆菌表达系统中成功获得了3批次高效表达的小反刍兽疫病毒可溶性重组N蛋白。将3批次小反刍兽疫病毒N蛋白放置2~8℃保存,分别于1、2、3、6、9、12、15个月检验蛋白性状、蛋白浓度、纯度、抗原性和特异性等指标。经分析,各个时期蛋白的抗原浓度、抗原性、特异性等要素均符合标准,N蛋白保存15个月后,依然具有较强的检测抗原性与特异性。该研究结果为今后以小反刍兽疫N蛋白为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法以及双抗原夹心ELISA抗体检测方法奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 原核载体 小反刍病毒 n蛋白 保存期 抗原性 特异性
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小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究 被引量:1
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作者 孙雨 宋晓晖 +7 位作者 肖颖 李秀梅 王睿男 吕园园 蒋菲 辛盛鹏 杨林 王传彬 《中国草食动物科学》 CAS 2019年第6期43-47,共5页
为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在... 为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。 展开更多
关键词 小反刍 核衣壳蛋白 中和抗体 抗体代谢规律 中和试验
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两种培养条件下重组杆状病毒表达小反刍兽疫病毒N蛋白的丰度
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作者 师亚玲 韩佃刚 +5 位作者 董俊 叶玲玲 李凌枫 陈朝林 信吉阁 艾军 《中国动物检疫》 CAS 2022年第2期97-102,共6页
为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELIS... 为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELISA方法检测PPRV N蛋白表达量,并用SPSS软件对数据进行统计分析。显微镜下观察发现,在感染重组杆状病毒后,两种方式培养的细胞随着时间增加,均由形态大小均匀、圆形、透亮、折光性好,变为大小不均匀、折光性差,并且出现了很多细胞碎片。根据ELISA检测结果,摇瓶悬浮培养条件下PPRV N蛋白的表达量显著高于贴壁培养,摇瓶悬浮培养的昆虫细胞蛋白表达量在96 h达到最高峰,120 h蛋白表达量开始下降,贴壁培养的昆虫细胞蛋白表达量在120 h达到最高峰。研究表明,用昆虫杆状病毒系统大规模表达PPRV N蛋白时更适合用摇瓶悬浮培养方法。本研究为优化昆虫细胞表达PRRV N蛋白的培养条件提供了参考。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒n蛋白 Sf9昆虫细胞 贴壁培养 悬浮培养 蛋白表达
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基于MS2噬菌体的小反刍兽疫装甲RNA质控品的研制
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作者 刘丹 李慧彤 +8 位作者 张博源 高建帅 蒋卉 范学政 张广智 郜卫华 丁家波 熊涛 沈青春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期43-51,共9页
为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测质控品,本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白(CP)和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR,经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装... 为了研制安全稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测质控品,本试验将PPRV检测靶标基因N、MS2噬菌体衣壳蛋白(CP)和成熟酶蛋白A基因序列插入p ET28a构建重组质粒p ET-CPA-PPR,经表达纯化、去除残余核酸和实时荧光定量PCR鉴定后制备成PPRV装甲RNA质控品,并对其进行电子显微镜观察、定量、耐核酸酶检验、均匀性和稳定性检验,以评估其作为标准物质的可能性。结果显示,p ET-CPA-PPR经诱导表达和纯化后形成直径为23~28 nm、大小均一、已包封PPRV检测靶标基因N的装甲RNA颗粒,浓度为2.24×10^(9)copies/μL,可以有效抵抗核酸酶降解作用,均匀性良好且在(37±1)℃条件下可稳定保存至少30 d。结果表明,基于MS2噬菌体制备的PPRV装甲RNA拷贝数高,均匀性和稳定性良好,能够为PPRV核酸检测提供安全可靠的标准化参考物质。 展开更多
关键词 小反刍(PPR) MS2噬菌体 装甲RnA 病毒样颗粒
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小反刍兽疫病毒分子诊断技术研究进展 被引量:1
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作者 蒋莹 张瑞 +2 位作者 周泷 张志东 李彦敏 《畜禽业》 2025年第2期1-7,共7页
小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是一类具有高度传染性的病毒性疾病,其病原为小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV),属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)。该病主要感染山羊、绵... 小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是一类具有高度传染性的病毒性疾病,其病原为小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV),属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)。该病主要感染山羊、绵羊等小反刍兽,自2007年传入我国,已在20多个省、直辖市和自治区发生,造成较大社会经济损失。目前国内外已建立多种针对PPRV的病原分子诊断检测方法,以全球PPR为研究对象,通过对相关文献的综合分析,就PPR分子诊断技术的研究进展进行了详细讨论。 展开更多
关键词 小反刍病毒 检测方法 分子诊断
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂MGCD0103对小反刍兽疫病毒体外复制的影响
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作者 邓瑞雪 潘春容 +4 位作者 朱学亮 胡林杰 孙跃峰 曾巧英 蒙学莲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4542-4552,共11页
旨在探究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)选择性抑制剂MGCD0103(Mocetinostat)对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)在山羊子宫内膜上皮细胞(EEC细胞)复制的影响。本研究通过RT-qPCR法测定PPRV感染后宿主细胞HDACs和抑制... 旨在探究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)选择性抑制剂MGCD0103(Mocetinostat)对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)在山羊子宫内膜上皮细胞(EEC细胞)复制的影响。本研究通过RT-qPCR法测定PPRV感染后宿主细胞HDACs和抑制剂处理细胞中PPRV N基因的转录水平,通过Time of Addition Assay确定MGCD0103在PPRV复制过程的作用阶段,用Western blot检测PPRV N蛋白的相对表达量,并采用TCID50方法测定了病毒滴度。结果表明,PPRV感染引起EEC细胞HDAC1(P<0.001)和HDAC2(P<0.002)转录水平明显上升;MGCD0103在病毒入侵和复制阶段均发挥了抑制作用,且在复制阶段抑制作用更明显;MGCD0103显著降低PPRV N基因转录水平和表达水平及病毒滴度(P<0.002),且其抑制PPRV在EEC中的半数有效浓度(EC50)和药物选择指数(SI)分别是0.43μmol·L^(-1)和4.35。本研究确定MGCD0103显著抑制PPRV的复制,这对研发有效抗PPRV药物具有重要意义,为高效率产毒细胞株的构建提供新思路。 展开更多
关键词 蛋白去乙酰化酶抑制剂 MGCD0103 抑制 小反刍病毒 病毒复制
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小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 李菊 毕冬琳 +5 位作者 杨晓莉 杨东亮 张潇文 刘方程 李琼毅 柏家林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1047-1054,共8页
为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与... 为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。 展开更多
关键词 小反刍病毒 非结构蛋白C 杂交瘤细胞技术 单克隆抗体
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小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达 被引量:2
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作者 田晓灵 赵永刚 +3 位作者 包静月 王志亮 李金明 吴树清 《中国动物检疫》 CAS 2009年第8期31-34,共4页
目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序... 目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序列分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒以磷酸钙介导法转染Vero细胞,用免疫荧光方法鉴定其在细胞中的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;重组质粒经pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫病毒N、H、F蛋白基因序列完全一致,其大小分别为1575bp、1830bp和1641bp;将重组质粒感染真核细胞,经免疫荧光检测,证明所有蛋白均得到表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF,为继续进行基因免疫研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍病毒 真核表达 重组质粒 转染
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小反刍兽疫病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立 被引量:1
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作者 许芳 蔡杰 +3 位作者 薛华平 罗均 蒋永青 郭霄峰 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期1-7,共7页
为建立一种能准确、灵敏地检测小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的ELISA方法,通过诱导BL21(DE3)-pET-30a-PPRV N表达菌种获得PPRV N蛋白,将纯化的PPRV N蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株能够高效表... 为建立一种能准确、灵敏地检测小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的ELISA方法,通过诱导BL21(DE3)-pET-30a-PPRV N表达菌种获得PPRV N蛋白,将纯化的PPRV N蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株能够高效表达、稳定分泌和具有较好竞争效果的抗PPRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1G2)。以纯化的PPRV N蛋白为包被抗原,HRP标记的1G2单克隆抗体(1G2-HRP)作为竞争抗体,建立了小反刍兽疫病毒竞争ELISA(competitive ELISA,cELISA)抗体检测方法。经优化反应条件确定最佳抗原包被浓度为1.0μg/mL,待检血清最佳稀释条件为4倍稀释,1G2-HRP酶标抗体最佳工作浓度为250 ng/mL;当阻断率(PI值)小于42%,判定为抗体阴性;阻断率大于或等于42%,判定为抗体阳性。该方法最低可检测128倍稀释的PPRV抗体阳性血清,具有较高的敏感性;仅能检测PPRV抗体,与羊源常见病原和pET-30a-BL21(DE3)的抗体阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。该方法与血清中和试验的阳性符合率为87.80%(95%CI:73.80,95.92),阴性符合率为94.95%(95%CI:88.61,98.34),总符合率为92.86%(95%CI:84.11,97.64),Kappa值为0.83(95%CI:53.10,112.50),具有较高的符合率。表明建立的ELISA方法在我国PPRV的流行病学调查、疫苗免疫效果评估方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 小反刍病毒 小反刍兽疫病毒n蛋白 竞争酶联免吸附试验
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表达羧基端融合HA表位N蛋白的重组小反刍兽疫病毒的拯救及鉴定 被引量:3
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作者 殷倩倩 陈伟业 +4 位作者 胡倩倩 温志远 葛金英 王喜军 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期456-459,共4页
为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码H A表位(YPYD VPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cD N A N基因的3'末端构建感染性克隆质粒pN g75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGG... 为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码H A表位(YPYD VPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cD N A N基因的3'末端构建感染性克隆质粒pN g75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGGS-P、pCAGGS-L共转染V ero细胞救获表达融合H A表位N蛋白的重组病毒rPPRV/GFP/NHA。W estern blot和间接免疫荧光试验表明融合H A表位的N蛋白获得正确表达;体外生长动力学试验分析表明rPPRV/G FP/N H A的生长最高滴度可达106.2TCID50/m L,能够满足标记疫苗的使用要求。本研究结果为进一步研制PPRV标记疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 小反刍病毒 n蛋白 HA表位 标记
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小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白(N)重组表达条件的优化 被引量:2
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作者 李文涛 李震 +2 位作者 董世娟 朱于敏 于瑞嵩 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期7-9,共3页
为获得更高含量的可溶性N蛋白,对构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET-32a-N)的表达条件(如诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行了优化。结果表明:N蛋白最佳诱导表达条件为18℃诱导17 h、IPTG浓度0.2 mmol/L;优化后可溶性N蛋白的表... 为获得更高含量的可溶性N蛋白,对构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET-32a-N)的表达条件(如诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行了优化。结果表明:N蛋白最佳诱导表达条件为18℃诱导17 h、IPTG浓度0.2 mmol/L;优化后可溶性N蛋白的表达量为22.1 mg/L,比优化前37℃、IPTG浓度1.0 mmol/L条件下诱导4 h提高了58.5%。 展开更多
关键词 小反刍 核壳蛋白 诱导表达 大肠杆菌
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羊小反刍兽疫综合防控技术探析 被引量:1
15
作者 陈继军 吴永进 郑周兴 《中国畜牧业》 2025年第5期89-90,共2页
羊小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒感染导致的一种发病急、传染性强、危害性大、防控难度高的疾病。近年来,羊养殖业发展迅速,羊小反刍兽疫的发病率也呈上升趋势,发病情况日益复杂,其发病率可超过60%,死亡率可超过50%。对羊养殖业造成了... 羊小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒感染导致的一种发病急、传染性强、危害性大、防控难度高的疾病。近年来,羊养殖业发展迅速,羊小反刍兽疫的发病率也呈上升趋势,发病情况日益复杂,其发病率可超过60%,死亡率可超过50%。对羊养殖业造成了显著影响。基于此,笔者主要探讨了羊小反刍兽疫的综合防控技术,旨在为羊养殖的稳定、健康和可持续发展提供参考和建议。 展开更多
关键词 小反刍 小反刍病毒 羊养殖 可持续发展 综合防控技术 养殖业发展 危害性 传染性
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小反刍兽疫病毒液滴式数字PCR检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 苏佳 赵炜 +6 位作者 刘伟洁 白洪旭 陈延飞 孙淼 吴华伟 薛青红 陈晓春 《中国兽药杂志》 2024年第5期17-25,共9页
为实现小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的快速、准确、定量检测,以国内PPRV Clone 9疫苗株N基因为靶位点设计特异性引物及探针,建立了液滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法,并对其特异性、敏感性及重... 为实现小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的快速、准确、定量检测,以国内PPRV Clone 9疫苗株N基因为靶位点设计特异性引物及探针,建立了液滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法,并对其特异性、敏感性及重复性进行评价。将所建立的ddPCR方法与实时荧光定量PCR(Fluorescence quantitative PCR,qPCR)方法的灵敏度进行比较分析并应用于PPRV(Clone 9株)核糖核酸标准物质的定量。结果显示,所建立的ddPCR方法特异性好,仅PPRV检测结果为阳性,其他羊源病毒类生物制品及毒种检测结果均为阴性;敏感性高,基因拷贝数检出限度为4.33拷贝/μL,比qPCR方法的灵敏度(57.3拷贝/μL)高10倍;重复性好,重复性试验的变异系数为1.8%;定量准确,具有一定资质的9家单位各组测量数据组间变异系数小于5%。试验建立的ddPCR方法能够有效地对PPRV核酸进行快速检测,为PPRV的诊断及绝对定量提供了有效方法。 展开更多
关键词 小反刍病毒 液滴式数字PCR 荧光定量PCR 检测
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小反刍兽疫流行病学及诊断技术研究进展
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作者 石亚楠 安治通 《现代畜牧兽医》 2025年第3期75-78,共4页
小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染山羊、绵羊等小反刍动物引起的一种急性、高度接触性传染病,主要临床特征为高热、黏液脓性眼鼻分泌物、口腔炎、急性腹泻和... 小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染山羊、绵羊等小反刍动物引起的一种急性、高度接触性传染病,主要临床特征为高热、黏液脓性眼鼻分泌物、口腔炎、急性腹泻和死亡等。由于PPR具有较高的发病率和致死率,严重阻碍了养殖业健康发展,并造成农业经济的巨大损失。因此,分析该病的流行特点、临床特征和诊断技术对其防控工作意义重大。文章简述PPR的流行病学及诊断技术的研究进展,以期为该病的防控诊疗提供参考。 展开更多
关键词 小反刍 小反刍病毒 流行病学 诊断技术
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小反刍兽疫病毒N基因在昆虫细胞中的表达 被引量:6
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作者 龙云凤 祝贺 +6 位作者 杨建明 陈朝银 徐维佳 周晓黎 董俊 叶玲玲 艾军 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第12期1-5,共5页
为了研发小反刍兽疫病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原物质,参照GenBank公布的小反刍兽疫疫苗株Nigeria75/1的全基因组序列(GenBank登录号:X74443),人工合成表达核蛋白的N基因开放阅读框序列,通过PCR扩增、经引物设计引入的EcoRⅠ... 为了研发小反刍兽疫病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原物质,参照GenBank公布的小反刍兽疫疫苗株Nigeria75/1的全基因组序列(GenBank登录号:X74443),人工合成表达核蛋白的N基因开放阅读框序列,通过PCR扩增、经引物设计引入的EcoRⅠ和KpnⅠ特异性酶切位点,将N基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,阳性重组质粒命名为pFastBacHTA-PPRV-N,测序结果显示N基因片段长度为1 578bp。将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-PPRV-N,将该重组穿梭质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blot分析表明该蛋白得到表达产物,具有与抗体反应的活性,大小约为61.3ku。 展开更多
关键词 小反刍病毒 n基因 杆状病毒表达载体 昆虫细胞 表达
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表达小反刍兽疫病毒F蛋白的重组山羊痘病毒疫苗的研究 被引量:6
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作者 曲林茂 陈伟业 +5 位作者 胡倩倩 胡森 张倩 支海兵 黄克和 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期415-420,共6页
本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-P... 本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定。免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRVF蛋白。以2×106PFU的rGPV-PPRV-F皮内注射免疫山羊3只,并于首次免疫后第28d以相同剂量进行二次免疫。分别于一免后21d和二免后14d采血后分离血清进行病毒中和试验。结果表明,一免后21d山羊痘病毒(GPV)中和抗体效价依次为1∶40、≥1∶80、≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次别为1∶20、1∶40、1∶20,全部阳转;二免后14d,GPV中和抗体效价≥1∶80,PPRV中和抗体效价依次为1∶20、1∶80、1∶40。本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍 F蛋白 山羊痘病毒载体 重组 中和抗体
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小反刍兽疫病毒N基因的原核表达 被引量:9
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作者 阮洋 秦峻岭 +8 位作者 高玉伟 孙玮 张涛 杨玉姣 杨松涛 王承宇 王铁成 黄耕 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期21-25,共5页
目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中... 目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-28a-N。阳性质粒转化原核表达宿主菌Transetta(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间、温度。通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析确定表达蛋白的表达量和活性。扩增出PPRV-N基因,构建的原核表达载体pET-28a-N和原核表达菌,表达了N蛋白,表达蛋白能与PPRV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 小反刍病毒n基因 原核表达 SDS-PAGE电泳 WESTERn-BLOT
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