外源物质诱导家蚕小分子热激蛋白基因HSP19.9的组织表达活性分析 被引量：5

1

作者 王瑞娴 高瑞娜 +4 位作者 张婷 赵国栋 李兵 卫正国 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期780-784,共5页

小分子热激蛋白(sHSP)参与生物体细胞内多种生理生化反应,并保护细胞在外界不良环境胁迫下免于受损或降低受损程度。为了探讨家蚕小分子热激蛋白在家蚕组织对外源物质代谢中的作用,分别给家蚕添食蜕皮激素(MH)和芸香苷(rutin)后,采用双... 小分子热激蛋白(sHSP)参与生物体细胞内多种生理生化反应,并保护细胞在外界不良环境胁迫下免于受损或降低受损程度。为了探讨家蚕小分子热激蛋白在家蚕组织对外源物质代谢中的作用,分别给家蚕添食蜕皮激素(MH)和芸香苷(rutin)后,采用双跟踪标定定量PCR(dual spike-in qPCR)方法,分析家蚕sHSP19.9基因(BmHSP19.9)的组织应急表达特征。结果表明,家蚕5龄幼虫食下2×10-3μg/μL蜕皮激素溶液或5×10-2 ng/μL芸香苷溶液浸泡的桑叶2 h后,BmHSP19.9基因在中肠、脂肪体和马氏管组织中的转录水平均有上升,尤其是在脂肪体中的转录水平非常高,在中肠组织的转录水平出现2个峰值,推测与中肠组织存在不同的应激系统有关。 展开更多

关键词 家蚕 小分子热激蛋白基因hsp19.9 诱导表达 双跟踪标定定量PCR 中肠 脂肪体 马氏管

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野桑蚕小分子热激蛋白基因BmmHSP19.9的克隆与表达分析 被引量：2

2

作者 丁佳奇 蒋青萍 +3 位作者 陈恩熙 林明君 钱荷英 赵国栋 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期481-489,共9页

为探究野桑蚕(Bombyx mandarina)响应外源不良胁迫的分子机制,利用RT-PCR技术克隆野桑蚕小分子热激蛋白(small heat shock protein, sHSP)基因BmmHSP19.9,并进行生物信息学分析。BmmHSP19.9基因(GenBank登录号:OP779245)的开放阅读框(O... 为探究野桑蚕(Bombyx mandarina)响应外源不良胁迫的分子机制,利用RT-PCR技术克隆野桑蚕小分子热激蛋白(small heat shock protein, sHSP)基因BmmHSP19.9,并进行生物信息学分析。BmmHSP19.9基因(GenBank登录号:OP779245)的开放阅读框(ORF)长534 bp,编码177个氨基酸。BmmHSP19.9具有sHSP特征结构域,相对分子质量为19.9 kD,等电点(pI)为6.53。同源比对和系统进化分析显示,昆虫sHSP蛋白具有较高的保守性,BmmHSP19.9与家蚕的BmHSP19.9亲缘关系最近。RT-qPCR结果表明,BmmHSP19.9在野桑蚕5龄幼虫的精巢、中部丝腺和后部丝腺的表达量较高;在高温(40℃)和低温(8℃)胁迫时,BmmHSP19.9在5龄幼虫所有组织中的表达水平均有所上调;添食BmNPV对BmmHSP19.9在5龄幼虫血淋巴和中肠组织的表达有诱导作用;溴氰菊酯胁迫下,BmmHSP19.9在5龄幼虫中肠中的表达水平显著上调。上述结果表明,BmmHSP19.9可能在野桑蚕响应外源不良胁迫的过程中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 野桑蚕 小分子热激蛋白基因 基因克隆 表达分析 外源胁迫

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农药与紫外胁迫对白蛾周氏啮小蜂小分子热激蛋白sHSP12.2基因表达的影响 被引量：3

3

作者 范伟健 相伟芳 +5 位作者 王静 白鹏华 潘丽娜 杨艺新 朱耿平 李敏 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期128-136,共9页

【目的】研究寄生性天敌昆虫热激蛋白HSPs的功能,为探讨寄生性天敌昆虫的小分子热激蛋白对农药与紫外胁迫下的抗逆性作用提供基础。【方法】克隆白蛾周氏啮小蜂的一个小热激蛋白基因Ccshsp12.2,对其从系统发育、核苷酸替换速率和密码子... 【目的】研究寄生性天敌昆虫热激蛋白HSPs的功能,为探讨寄生性天敌昆虫的小分子热激蛋白对农药与紫外胁迫下的抗逆性作用提供基础。【方法】克隆白蛾周氏啮小蜂的一个小热激蛋白基因Ccshsp12.2,对其从系统发育、核苷酸替换速率和密码子使用偏好性等方面进行分析,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术研究其经紫外照射及用阿维菌素、苏云金杆菌、灭幼脲和高效氯氰菊酯4种农药处理后,Ccshsp12.2的表达量变化。【结果】获得了含有完整编码区的Ccshsp12.2基因序列,编码206个氨基酸,分子量为23.1 kDa;进化分析结果表明白蛾周氏啮小蜂等寄生性类群与麦茎蜂等自由生活类群聚成2个分支。选取的9条基因平均Ka/Ks(即dN/dS)值为0.906 556,主要接受负选择压力。寄生性昆虫的平均密码子选择偏好性指数为0.344,自由生活昆虫的平均密码子选择偏好性指数为0.353。RT-qPCR试验结果显示,与对照相比,经农药和紫外线的处理后,白蛾周氏啮小蜂Ccshsp12.2表达量均有所上调,达3.36～6.17倍。【结论】通过分子进化分析,发现不同生活方式的昆虫其热激蛋白所受的进化压力有显著差别;紫外照射及阿维菌素等4种农药均能显著诱导Ccshsp12.2基因表达上调。本研究结果将为白蛾周氏啮小蜂HSPs的抗逆性研究提供依据。 展开更多

关键词 白蛾周氏啮小蜂 抗逆性 小分子热激蛋白12.2 基因表达 昆虫

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甜椒内质网小分子热激蛋白基因(CaHSP22.5)克隆及其在转基因烟草中的表达分析 被引量：1

4

作者 苏振华 张泽鑫 +2 位作者 李妹芳 郭尚敬 冀芦沙 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1080-1090,共11页

【目的】克隆甜椒内质网小分子热激蛋白基因(CaHSP22.5),并检测其表达特性,为探究其在植物抗逆中的调控机制提供理论依据。【方法】克隆CaHSP22.5基因并构建其表达载体pBI121-CaHSP22.5,转化农杆菌LBA4404后通过叶盘法转化野生型烟草,... 【目的】克隆甜椒内质网小分子热激蛋白基因(CaHSP22.5),并检测其表达特性,为探究其在植物抗逆中的调控机制提供理论依据。【方法】克隆CaHSP22.5基因并构建其表达载体pBI121-CaHSP22.5,转化农杆菌LBA4404后通过叶盘法转化野生型烟草,即获得CaHSP22.5转基因株系;以转pBI121空载体的野生型烟草为对照组。对转基因株系和野生型烟草进行4℃6 h低温处理,根据幼苗成活率测定CaHSP22.5基因表达对植株耐寒性的影响。采用脉冲振幅调制叶室荧光仪Li-6400测量4℃处理10 h后野生型植株与CaHSP22.5转基因株系叶绿素荧光,根据非光化学淬灭系数(NPQ)值测定CaHSP22.5基因表达对在低温下植株光合作用的影响;使用过氧化氢(H2O2)钛络合物法对烟草叶片中H2O2进行定量分析,通过测定活性氧(ROS)积累程度分析CaHSP22.5对植物光合系统的影响;采用检测柠檬酸合成酶(CS)活性的方法,在体外通过对变性CS复性的影响测定CaHSP22.5的分子伴侣活性。【结果】经低温处理后发现CaHSP22.5转基因株系13号、24号和32号幼苗的平均存活率分别为84%、75%和52%,而野生型烟草的平均存活率为30%,CaHSP22.5转基因株系烟草幼苗成活率菌高于野生型幼苗。低温处理10 h后发现CaHSP22.5转基因植株NPQ较野生型植株显著升高(P<0.05),说明转基因烟草中CaHSP22.5的积累有利于保护光合系统,在低温胁迫下清除ROS。同时发现低温胁迫导致植株ROS产量增加,CaHSP22.5转基因植系与野生型相比ROS积累水平较低。不同浓度的CaHSP22.5均可使变性的CS复性,且其CS活性均高于未添加CaHSP22.5的CS活性。【结论】CaHSP22.5蛋白可增强植株的耐寒性及光合作用,在植物体内可降低ROS积累,减轻脂质过氧化,同时具有分子伴侣活性。 展开更多

关键词 甜椒 内质网小分子热激蛋白 低温胁迫 转基因烟草 耐受性

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鲍姆桑黄(Sanghuangporus baumii)HSP20基因家族的分子特征及不同发育阶段的表达模式分析

5

作者 田彦挺 齐欣 +2 位作者 刘昊 廖方舟 仝雅娜 《天津农业科学》 2025年第5期1-7,共7页

为阐明药用真菌鲍姆桑黄(Sanghuangporus baumii)热休克蛋白20(HSP20)基因家族的生物学功能及其分子机制,基于全基因组数据系统鉴定了SbHSP20基因家族成员,并探究其在菌株生长调控中的作用。结果表明:在鲍姆桑黄中共鉴定出11个Sb HSP20... 为阐明药用真菌鲍姆桑黄(Sanghuangporus baumii)热休克蛋白20(HSP20)基因家族的生物学功能及其分子机制,基于全基因组数据系统鉴定了SbHSP20基因家族成员,并探究其在菌株生长调控中的作用。结果表明:在鲍姆桑黄中共鉴定出11个Sb HSP20基因,其编码蛋白分子量范围为17.5~89.6 kDa,等电点分布范围为5.07~10.38。系统发育分析显示,SbHSP20与糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)HSP20蛋白具有高度同源性(平均序列一致性76.8%)。启动子区域含有ABRE、MBS、STRE等12类胁迫响应元件,其中SbHSP20-7基因启动子包含7种不同类型的胁迫相关元件。表达谱分析表明,SbHSP20-2和SbHSP20-10在培养5 d的菌丝体中转录水平较高,分别为23.20和9.023;SbHSP20-6、SbHSP20-7和SbHSP20-10在培养9 d的菌丝体中表达量分别为5.212、6.209和10.098。共线性分析显示,桑黄与双孢蘑菇(Agaricus bisporus)之间存在染色体同源区段。综上,本研究首次系统解析了鲍姆桑黄SbHSP20基因家族的分子特征及表达调控模式,笔者发现SbHSP20-10可作为关键候选基因用于菌株抗逆性改良,为药用真菌抗逆分子育种提供了理论依据和基因资源。 展开更多

关键词 小热激蛋白(hsp20) 基因结构 系统发育 染色体定位

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莲草直胸跳甲小分子热激蛋白sHsp20.8基因的克隆及生物信息学分析

6

作者 袁晓芳 徐朝茜 +2 位作者 纪周瑜 马瑞燕 贾栋 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第7期31-38,共8页

[目的]小分子热激蛋白基因对昆虫的生长发育和抵御环境胁迫具有重要作用,本研究在PacBio SMRT测序的基础上,进一步克隆鉴定莲草直胸跳甲(Agasicles hygrophila)小分子热激蛋白sHsp20.8基因并进行生物信息学分析。[方法]采用RT-PCR技术... [目的]小分子热激蛋白基因对昆虫的生长发育和抵御环境胁迫具有重要作用,本研究在PacBio SMRT测序的基础上,进一步克隆鉴定莲草直胸跳甲(Agasicles hygrophila)小分子热激蛋白sHsp20.8基因并进行生物信息学分析。[方法]采用RT-PCR技术克隆鉴定了莲草直胸跳甲sHsp20.8基因的完整CDS;利用各种生物信息学方法对该热激蛋白的理化性质、保守结构域、亲水/疏水性、信号肽、亚细胞定位、跨膜区进行分析,并进行了二、三级结构的预测和系统发育分析。[结果]莲草直胸跳甲sHsp20.8基因完整CDS为543bp,编码180个氨基酸,分子量为20.8kDa,等电点为6.45。编码蛋白含有小分子热激蛋白保守结构域和特征基序,不含跨膜区和信号肽,定位于细胞核。系统发育分析表明小分子热激蛋白基因可以作为昆虫系统进化分析的标志基因。[结论]获得的sHsp20.8基因是sHsps家族成员,结果将为深入研究小分子热激蛋白的功能奠定理论基础。 展开更多

关键词 莲草直胸跳甲 小分子热激蛋白 基因克隆 生物信息学分析

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过量表达内质网小分子热激蛋白增强转基因番茄果实的耐冷藏性 被引量：2

7

作者 赵春梅 张文彦 刘箭 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期33-37,共5页

利用番茄内质网小分子热激蛋白(ERsHSP)特异性抗体,对番茄果实蛋白进行Western分析,以测定低温冷藏下番茄果实中ERsHSP的表达量,并测定果实硬度、腐烂度和失重率等指标,以比较中蔬4号转ERsHSP基因番茄和未转基因番茄果实在4℃低温下的... 利用番茄内质网小分子热激蛋白(ERsHSP)特异性抗体,对番茄果实蛋白进行Western分析,以测定低温冷藏下番茄果实中ERsHSP的表达量,并测定果实硬度、腐烂度和失重率等指标,以比较中蔬4号转ERsHSP基因番茄和未转基因番茄果实在4℃低温下的耐冷藏性.结果表明:在4℃冷藏30 d期间,转基因番茄果实具有较高的ERsHSP表达水平,而未转基因番茄果实中没有ERsHSP的表达;相对于未转基因番茄果实,转基因番茄果实冷害症状轻,并具有较高的果实硬度(平均值为2.84 kg/cm2)、较低的果实腐烂度(平均值为21.03%)和失重率(平均值为6.33%). 展开更多

关键词 内质网小分子热激蛋白 转基因番茄 果实 冷藏

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桑树小分子热激蛋白基因的鉴定及在逆境胁迫下的表达 被引量：4

8

作者 卢承琼 曾其伟 +1 位作者 向仲怀 何宁佳 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期965-973,共9页

小分子热激蛋白(s Hsp)在植物抵抗非生物胁迫过程中起重要作用。采用生物信息学方法,在川桑(Morus notabilis)基因组中鉴定了29个桑树s Hsp基因,基于进化关系及亚细胞定位将其分为13个亚家族和1个孤儿基因。13个桑树s Hsp基因亚家族中,... 小分子热激蛋白(s Hsp)在植物抵抗非生物胁迫过程中起重要作用。采用生物信息学方法,在川桑(Morus notabilis)基因组中鉴定了29个桑树s Hsp基因,基于进化关系及亚细胞定位将其分为13个亚家族和1个孤儿基因。13个桑树s Hsp基因亚家族中,CⅫ和CⅩⅢ属于植物s Hsp的2个新的亚家族;预测有4个桑树s Hsp基因的启动子中各具1个完整热激元件(HSE),在桑树s Hsp基因的启动子中可能还包含其他响应非生物胁迫的元件。采用定量PCR方法检测非生物胁迫下印度桑(Morus indica)品种K2的叶片中10个桑树s Hsp基因都能快速地响应高温胁迫,分别有5、9、7个桑树s Hsp基因响应低温、盐分和干旱胁迫,其中Mn15.7-CⅤ基因在4种逆境胁迫下的表达均被抑制,并在高温胁迫5 min后表达显著下调。研究结果提示s Hsp可能在桑树抵抗非生物逆境胁迫的过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 桑树 小分子热激蛋白 家族成员 基因表达 非生物胁迫

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高温胁迫下B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70表达量的变化 被引量：25

9

作者 崔旭红 谢明 万方浩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1087-1091,共5页

为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫... 为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫及气温变化时B型烟粉虱成虫体内hsp70表达的情况。结果表明：缓和的高温对B型烟粉虱成虫hsp70表达具有诱导作用,在37℃-41℃范围内,hsp70的表达量随着温度的升高从8.78×10^5±6.41×10^4拷贝数上升到1.99×10^7±1.45×10^5拷贝数,在41℃时达到最高峰;而当温度升高到43℃和45℃,hsp70表达量迅速降低。B型烟粉虱成虫hsp70的表达与昼夜气温变化有关,当上午气温从34℃上升到41℃时,hsp70的表达量从1.16×10^5±1.48×10^4拷贝数上升到6.29×10^6±1.80×10^5拷贝数;当傍晚气温下降到33℃时,hsp70表达量也下降到2.32×10^5±7.69×10^3拷贝数。因此推测,hsp70在B型烟粉虱抵抗高温胁迫方面可能具有重要作用。 展开更多

关键词 B型烟粉虱 高温胁迫 热激蛋白基因hsp70 表达量 实时荧光定量RT-PCR TAQMAN-MGB探针

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朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因TCHSP70-4的克隆与表达 被引量：6

10

作者 李明 卢文才 +3 位作者 冯宏祖 袁亮 王进军 何林 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1235-1243,共9页

为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长21... 为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长2182bp,包含1959bp的开放阅读框,编码653个氨基酸,理论分子量为70.9kDa,等电点为5.4,含有HSP70家族高度保守的基序。运用real-time PCR分析冷激(4℃)和热激(40℃)1h后TCHSP70-4在朱砂叶螨体内的表达量。结果显示冷激后TCHSP70-4表达量明显下降,而热激后TCHSP70-4表达量却明显上升。这些结果一方面表明该基因属于诱导型HSP70基因,另一方面揭示了朱砂叶螨分别受到冷和热胁迫后体内TCHSP70-4的表达及所起的保护作用是不同的。 展开更多

关键词 朱砂叶螨 热激蛋白 hsp70基因 克隆 表达 温度胁迫 实时定量PCR

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B型烟粉虱和温室白粉虱热激蛋白90基因(hsp90)的全长cDNA克隆与系统发育分析 被引量：7

11

作者 余昊 万方浩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期363-371,共9页

B型烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)biotype B和温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum均为全球普遍发生的重要害虫。本研究以其他昆虫热激蛋白90基因(hsp90)保守区域设计兼并引物扩增两种粉虱hsp90中间片段,然后利用RACE技术获得全长c... B型烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)biotype B和温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum均为全球普遍发生的重要害虫。本研究以其他昆虫热激蛋白90基因(hsp90)保守区域设计兼并引物扩增两种粉虱hsp90中间片段,然后利用RACE技术获得全长cDNA。温室白粉虱hsp90全长cDNA的开放性阅读框2166bp,编码722个氨基酸;烟粉虱hsp90全长cDNA的开放性阅读框2160bp,编码720个氨基酸。两种粉虱HSP90的完整氨基酸序列相似性高达92.94%,并均具有定义HSP90家族签名序列的5个氨基酸保守区域和末尾基序"MEEVD"。通过real-time PCR技术,探测到两个基因在mRNA水平上皆能高温诱导表达。采用昆虫纲所有完整HSP90氨基酸序列进行Kimura双参数遗传距离分析并构建NJ进化树,结果显示hsp90在昆虫纲低级阶元水平和高级阶元水平系统进化上能得到一个较理想结果。本研究结果为B型烟粉虱和温室白粉虱抗逆适应性研究提供基础,并进一步验证保守的功能基因hsp90可以作为研究生物系统发育的手段之一。 展开更多

关键词 B型烟粉虱 温室白粉虱 基因克隆 hsp90 热激蛋白 系统发育

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斑玉蕈热激蛋白基因hsp70在刺芹侧耳中的转化

12

作者 徐丽丽 范晓洋 +2 位作者 于雯楠 王旭锋 郭立忠 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期8-12,共5页

将斑玉蕈(Hypsizygus marmoreus)热激蛋白基因hsp70通过农杆菌介导的方法对刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)进行遗传转化,PCR验证得到刺芹侧耳抗性转化子。试验表明:潮霉素浓度为70μg/mL,乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L,侵染时间为90 min... 将斑玉蕈(Hypsizygus marmoreus)热激蛋白基因hsp70通过农杆菌介导的方法对刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)进行遗传转化,PCR验证得到刺芹侧耳抗性转化子。试验表明:潮霉素浓度为70μg/mL,乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L,侵染时间为90 min,共培养时间为2 d时转化率最高。 展开更多

关键词 热激蛋白基因hsp70 遗传转化 刺芹侧耳

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烟草NtHSP70-2基因生物信息学及温度胁迫下的组织表达分析

13

作者 崔帅 段丽丽 +4 位作者 王余 唐琴 李长远 龙本山 刘仁祥 《山东农业科学》 北大核心 2025年第2期22-28,共7页

HSP70是热激蛋白家族重要成员之一,在植物中广泛存在,并在植物非生物胁迫响应中发挥重要作用。为研究烟草NtHSP70-2基因的结构与功能,本研究对NtHSP70-2基因的启动子序列、蛋白理化性质和结构以及对温度胁迫的响应情况进行了分析。结果... HSP70是热激蛋白家族重要成员之一,在植物中广泛存在,并在植物非生物胁迫响应中发挥重要作用。为研究烟草NtHSP70-2基因的结构与功能,本研究对NtHSP70-2基因的启动子序列、蛋白理化性质和结构以及对温度胁迫的响应情况进行了分析。结果表明:NtHSP70-2基因编码完整的开放阅读框为1947 bp,编码649个氨基酸;编码蛋白的理论等电点为5.13,不稳定系数为35.03,分子量为71.10 kDa,预测为亲水性蛋白;NtHSP70-2与辣椒、番茄、马铃薯、茄子的相应同源序列相似度高;二级结构主要为α-螺旋,三级结构与辣椒CaHSP70的相似;NtHSP70-2主要含有P-box、CGTCA-motif、ABRE、STER、MYB、DRE core等顺式作用元件,这些元件都能响应温度胁迫。qRT-PCR分析结果表明,高低温胁迫12 h内,NtHSP70-2基因的相对表达量增加,胁迫12 h后,表达量逐渐减低;NtHSP70-2基因在烟草根、茎、叶中均有表达,叶中表达量高于茎和根中,相同部位高温胁迫下的相对表达量高于低温胁迫下的。综上,NtHSP70-2基因能响应温度胁迫,提高烟草对温度的耐受性。 展开更多

关键词 烟草 hsp70热激蛋白 生物信息学 温度胁迫 基因表达

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马铃薯甲虫热激蛋白基因Ld-HSP60的克隆、序列分析及温度胁迫下的表达 被引量：4

14

作者 魏长平 蒋健 +5 位作者 李祥瑞 张云慧 张方梅 程登发 郭文超 刘怀 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期523-532,共10页

【目的】马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是一种世界性检疫害虫,对温度胁迫具有极强的适应性,为进一步明确其对温度胁迫适应性的分子机制,研究了热激蛋白HSP60在马铃薯甲虫温度胁迫应答过程中的作用。【方法】采用RT-PCR及RACE技... 【目的】马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata是一种世界性检疫害虫,对温度胁迫具有极强的适应性,为进一步明确其对温度胁迫适应性的分子机制,研究了热激蛋白HSP60在马铃薯甲虫温度胁迫应答过程中的作用。【方法】采用RT-PCR及RACE技术克隆马铃薯甲虫热激蛋白HSP60基因的cDNA全长序列;利用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白质的序列特性;运用实时荧光定量PCR技术分析该基因在温度胁迫下的表达模式。【结果】克隆得到马铃薯甲虫热激蛋白HSP60基因,命名为Ld-HSP60(Gen Bank登录号:KC556801),其cDNA全长2 234 bp,开放阅读框(ORF)长1 731 bp,编码576个氨基酸,相对分子量约为61.27 kD,理论等电点为5.51,5'端非翻译区(UTR)长101 bp,3'UTR长402 bp。氨基酸序列中含有HSP60家族典型的特征序列。实时荧光定量PCR结果表明,低温胁迫(-10和0℃)下未检测到马铃薯甲虫雌雄成虫中Ld-HSP60的诱导表达;高温胁迫(38和44℃)诱导马铃薯甲虫雄成虫Ld-HSP60上调表达,随着胁迫温度的升高LdHSP60表达量呈现先升高后降低的趋势,38℃高温胁迫下表达量最高,胁迫时间越长Ld-HSP60表达量也越高。【结论】相比其他热激蛋白,HSP60对温度敏感性较低,推测HSP60可能在马铃薯甲虫雄成虫抵御高温胁迫中发挥作用。 展开更多

关键词 马铃薯甲虫 热激蛋白 hsp60 基因克隆 温度胁迫 实时荧光定量PCR

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欧亚种葡萄中热激蛋白Hsp90的基因组学分析

15

《中外葡萄与葡萄酒》 2012年第2期72-72,共1页

热激蛋白Hsp90是一组重要的分子伴侣，受很多生物逆境和非生物逆境的诱导。在胁迫条件下能够稳定蛋白和膜的结构，防止变性蛋白聚合，以及帮助蛋白再折叠。葡萄栽培中，高温与干旱胁迫是限制葡萄生长发育的主要因素。本研究主要是对欧... 热激蛋白Hsp90是一组重要的分子伴侣，受很多生物逆境和非生物逆境的诱导。在胁迫条件下能够稳定蛋白和膜的结构，防止变性蛋白聚合，以及帮助蛋白再折叠。葡萄栽培中，高温与干旱胁迫是限制葡萄生长发育的主要因素。本研究主要是对欧亚种葡萄中热激蛋Hsp90基因家族进行鉴定分析。 展开更多

关键词 hsp90 欧亚种葡萄 热激蛋白 基因组 非生物逆境 学分 分子伴侣 胁迫条件

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谢氏宽漠王HSP70基因cDNA片段的克隆及热激条件下的表达 被引量：4

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作者 唐婷 柳峰松 任国栋 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期365-371,共7页

谢氏宽漠王Mantichorula semenowi Reitter是一种沙漠指示性甲虫。本研究由该种甲虫体内克隆到两种不同的HSP70基因片段,分别为MsHSP70和MsHSC70。同源性发现表明这两个基因片段与已报道的其他昆虫的热休克蛋白核苷酸序列高度同源。半定... 谢氏宽漠王Mantichorula semenowi Reitter是一种沙漠指示性甲虫。本研究由该种甲虫体内克隆到两种不同的HSP70基因片段,分别为MsHSP70和MsHSC70。同源性发现表明这两个基因片段与已报道的其他昆虫的热休克蛋白核苷酸序列高度同源。半定量RT-PCR分析显示：经42℃热激1h后立即诱导MsHSP70表达至最高峰;在恢复到室温的1～4h内MsHSP70表达量逐渐降低,但仍然高于未热激对照组。而MsHSC70在42℃热激1h后表达受到抑制,但在恢复2h和4h时有少量的表达,分别仅为未热激对照组的0.25和0.28倍。结果提示MsHSP70和MsHSC70在保护细胞方面具有不同的作用。本实验结果为谢氏宽漠王在极端的沙漠环境胁迫下的抗逆适应性研究提供了理论基础。 展开更多

关键词 谢氏宽漠王 hsp70基因 CDNA克隆 半定量RT-PCR 热激 热休克蛋白

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小麦Hsp70基因家族鉴定及蛋白互作网络分析 被引量：6

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作者 楚宗丽 李亮杰 +2 位作者 姬虹 程琴 孙君艳 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第10期37-44,共8页

为研究小麦Hsp70蛋白的相互作用,利用生物信息学方法,在全基因组范围内对小麦Hsp70基因家族进行鉴定,并进行蛋白互作及可视化分析。结果表明,在全基因组范围内共鉴定到21个结构域高度保守的Hsp70基因家族成员,亚细胞定位显示主要分布于... 为研究小麦Hsp70蛋白的相互作用,利用生物信息学方法,在全基因组范围内对小麦Hsp70基因家族进行鉴定,并进行蛋白互作及可视化分析。结果表明,在全基因组范围内共鉴定到21个结构域高度保守的Hsp70基因家族成员,亚细胞定位显示主要分布于细胞质,蛋白的二级结构中,α-螺旋与无规卷曲类型在每个蛋白中所占比重较大,二者之和大于70%,延伸链和β-转角所占比重较小,二者之和小于30%。互作分析结果表明,TaHsp70-14、TaHsp70-6、TaHsp70-12、TaHsp70-16、TaHsp70-3,TaHsp70-8、TaHsp70-21、TaHsp70-20,TaHsp70-17和TaHsp70-11之间有相互作用,GO分析显示所鉴定基因主要在分子功能、生物过程及细胞成分方面起作用。 展开更多

关键词 小麦 hsp70 热激蛋白 基因鉴定 蛋白互作

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葡萄HSP17基因的合成与功能分析 被引量：3

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作者 张杰 单宝来 +3 位作者 田永生 彭日荷 姚泉洪 汪良驹 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期503-509,共7页

为了探究葡萄HSP17基因(Vv HSP17)的功能,以过量表达Vv HSP17的转基因拟南芥幼苗为材料,研究了高温胁迫对植株形态、叶绿素含量、丙二醛含量、脯氨酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,同时还观察了苯酚胁迫对植株形态和种子萌发率... 为了探究葡萄HSP17基因(Vv HSP17)的功能,以过量表达Vv HSP17的转基因拟南芥幼苗为材料,研究了高温胁迫对植株形态、叶绿素含量、丙二醛含量、脯氨酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,同时还观察了苯酚胁迫对植株形态和种子萌发率的影响,并且比较了不同基因型植株对苯酚吸收降解能力的差异。结果表明,与野生型相比,转Vv HSP17基因拟南芥抗高温和苯酚胁迫的能力明显增强,逆境胁迫导致的叶绿素含量下降较少,丙二醛含量增幅较小,脯氨酸含量大幅升高,SOD酶活性较高,种子萌发率较高,处理液中苯酚残留量少。说明转Vv HSP17基因拟南芥对物理性高温胁迫和化学性苯酚胁迫都有较高的耐受性。 展开更多

关键词 葡萄 小分子热激蛋白 转基因 高温胁迫 苯酚胁迫

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菜粉蝶HSP20基因的克隆及温度胁迫下表达分析 被引量：2

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作者 袁远 张连根 +4 位作者 高熹 吴国星 张慧 龙华 朱家位 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期286-291,共6页

【目的】克隆分析菜粉蝶(Pieris rapae)热激蛋白20基因(HSP20),并检测其在温度胁迫下的表达情况,为探析菜粉蝶适应温度胁迫机制提供参考。【方法】以菜粉蝶为试验材料,采用RT-PCR和RACE克隆获得菜粉蝶HSP20基因cDNA全长,并通过生物学软... 【目的】克隆分析菜粉蝶(Pieris rapae)热激蛋白20基因(HSP20),并检测其在温度胁迫下的表达情况,为探析菜粉蝶适应温度胁迫机制提供参考。【方法】以菜粉蝶为试验材料,采用RT-PCR和RACE克隆获得菜粉蝶HSP20基因cDNA全长,并通过生物学软件分析其序列,明确其基因结构特征和亲缘关系;采用实时荧光定量PCR检测菜粉蝶HSP20基因在低温(-20～0℃)和高温(5～45℃)胁迫下的表达响应。【结果】菜粉蝶HSP20基因全长725 bp,5'-端非编码区105 bp,3'-端非编码区109 bp,开放阅读框531 bp,编码176个氨基酸,预测蛋白分子量19.5 kD,理论等电点6.61;其编码氨基酸序列中含有1个典型的HSP20家族结构域(位于第60～142位氨基酸)、1个α-晶体蛋白(位于第60～157位氨基酸)和1个Allato allatostatin(位于第14～24位氨基酸);基序列相似度分析其与二化螟、家蚕和甘蓝夜蛾HSP20蛋白氨基酸相似度较高并聚为一族。该基因随环境温度的升高或降低发生变化,在-5和40℃诱发该基因高效表达。【结论】低温和高温均能诱导菜粉蝶HSP20基因高效表达。 展开更多

关键词 菜粉蝶 热激蛋白 hsp20 基因克隆 序列分析 温度胁迫 表达分析

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马铃薯HSP17.7基因的克隆及其对高温逆境的响应 被引量：4

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作者 奚玉培 张志忠 +2 位作者 王景荣 韩晓云 Gefu WANG-PRUSKI 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1952-1960,共9页

热激蛋白和植物对高温的响应密切相关,同时在植物生长发育调控和逆境抵抗等方面具有重要作用。该研究克隆了马铃薯热激蛋白基因StHSP 17.7(GenBank登录号为XP_006350804.1),对其全长cDNA序列进行了相关生物信息学分析,并利用qRT-PCR分析... 热激蛋白和植物对高温的响应密切相关,同时在植物生长发育调控和逆境抵抗等方面具有重要作用。该研究克隆了马铃薯热激蛋白基因StHSP 17.7(GenBank登录号为XP_006350804.1),对其全长cDNA序列进行了相关生物信息学分析,并利用qRT-PCR分析StHSP17.7基因在高温胁迫下的差异表达特性。结果显示:(1)StHSP 17.7全长755 bp,包含465 bp开放阅读框,编码154个氨基酸。(2)StHSP17.7分子质量约为17.62 kD,等电点7.91,为亲水性蛋白,C端含有保守序列Ⅰ和Ⅱ组成的ACD结构域,属于典型的sHSPs家族成员。(3)系统进化分析发现马铃薯小分子热激蛋白归为12个亚家族,其中StHSP17.7与马铃薯HSP17.6蛋白亲缘关系较近,属于小分子热激蛋白C的Ⅰ类家族成员;基因结构分析显示,在马铃薯48个sHSP基因中,StHSP17.7基因不含内含子,含1个内含子的基因有23个,占47.9%。(4)qRT-PCR分析显示,高温能够快速诱导StHSP 17.7基因表达,且基因表达量呈爆发式变化,在24 h达到最高值。研究表明,StHSP 17.7基因明显参与了马铃薯对高温的响应。 展开更多

关键词 马铃薯 Sthsp17.7基因 高温逆境 小分子热激蛋白

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