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题名吐温/缓冲液体系中酶法合成(R)-对氯环氧苯乙烷
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作者
王婷婷
董文彦
胡蝶
李闯
胡博淳
邬敏辰
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机构
江南大学药学院
江南大学无锡医学院
江南大学生物工程学院
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出处
《精细化工》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期515-520,共6页
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基金
中国博士后基金面上项目(2018M630522)
江苏省研究生科研与实践创新计划项目(SJCX18_0641)
江苏省青年基金项目(BK20180622)。
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文摘
利用环氧化物水解酶突变体Pv EH1Z4X4-59制备了(R)-对氯环氧苯乙烷〔(R)-p CSO〕。以E.coli/pveh1Z4X4-59全细胞作为生物催化剂,在磷酸盐缓冲液体系(Na2HPO4-Na H2PO4,100mmol/L,pH=7.0)中有效拆分250mmol/L对氯环氧苯乙烷(rac-p CSO)制备(R)-p CSO(ees>99%)。随后,依据6种非离子型表面活性剂对E.coli/pveh1Z4X4-59全细胞酶活力和对映选择性的影响,筛选吐温-20作为最佳添加剂,构建并优化吐温-20/缓冲液反应体系。在最优反应条件下,吐温-20的添加量为4%(体积分数),E.coli/pveh1Z4X4-59全细胞的添加量为200 g/L,反应时间为12 h,初始底物浓度显著提高至800 mmol/L(123.7 g/L),获得(R)-p CSO的ees和产率分别为99%和45.7%(理论产率为50%),时空产率高达4.71 g/(L·h)。反应体系放大至100 mL后,制备4.5 g(R)-p CSO的总收率为36.3%。
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关键词
环氧化物水解酶
动力学拆分
(R)-对氯环氧苯乙烷
吐温-20
生物工程
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Keywords
epoxide hydrolase
kinetic resolution
(R)-p-chlorostyrene oxide
Tween-20
biological engineering
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分类号
Q814.9
[生物学—生物工程]
O624
[理学—有机化学]
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题名定点突变提高菜豆环氧水解酶的对映选择性
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作者
宗迅成
胡蝶
阚婷婷
王婷婷
邬敏辰
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机构
江南大学生物工程学院
江南大学无锡医学院
江南大学药学院
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出处
《化工学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第10期4335-4341,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(21676117)
2017年江苏省研究生实践创新计划项目(SJCX17_0467)~~
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文摘
为了提高菜豆环氧水解酶(PvEH1)催化对氯环氧苯乙烷(pCSO)的对映选择性,利用定点突变构建了PvEH1^(W102L)、PvEH1^(P137K)及PvEH1^(I151V)三种突变体,分别研究了突变体全细胞动力学拆分rac-pCSO的催化特性,优化了PvEH1W102L动力学拆分rac-pCSO的初始底物浓度及反应时间,通过分子模拟分析了PvEH1^(W102L)对映选择性提高的机理。结果表明,最优突变体PvEH1^(W102L)的E值为25.5,相对酶活为212.6%,分别是PvEH1的11.6倍与2.1倍;PvEH1^(W102L)动力学拆分150 mmol·L^(-1) rac-pCSO,反应4 h后,可获得(R)-pCSO(产率为45.62%,ees为96.30%)和(R)-对氯苯基乙二醇(产率为50.91%,eep为90.26%)。分子模拟结果分析表明,PvEH1的102位色氨酸(W)突变为亮氨酸(L)降低了酶与(R)-pCSO的结合能力,从而提高了PvEH1^(W102L)对pCSO的对映选择性。
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关键词
生物催化
定点突变
环氧水解酶
对氯环氧苯乙烷
对氯苯基乙二醇
分子模拟
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Keywords
biocatalysis
site-directed mutagenesis
epoxide hydrolase
p-chlorostyrene oxide
(R)-p-chlorophenyl-1,2-ethanediol
molecular simulation
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分类号
Q814.9
[生物学—生物工程]
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