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题名环氧化物水解酶PvEH3的表达及手性邻二醇的合成
被引量：5
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作者
王瑞
许耀辉
王克伟
邬敏辰
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机构
江南大学生物工程学院
江南大学无锡医学院
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出处
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期1933-1939,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(21676117)
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文摘
基于环氧化物水解酶(EHs)一级结构的计算机辅助分析,以菜豆(Phaseolus vulgaris)总RNA为模板,采用逆转录PCR和巢式PCR技术扩增了一种新型环氧化物水解酶(PvEH3)的编码基因pveh3。借助表达载体pET-28a(+)将pveh3导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行了异源表达。一级和三级结构表明,PvEH3属于α/β水解酶超家族,其催化三联体为Asp^(101)-His^(297)-Asp^(262),两个保守质子供体为Tyr^(150)和Tyr^(232)。在20℃、pH7.0的反应条件下,PvEH3能催化环氧苯乙烷及其4种衍生物的对映会聚水解。实验结果表明,PvEH3对环氧苯乙烷及其对位取代环氧底物(93.2%、86.6%和85.1%ee_p)的对映会聚性优于其间位取代环氧底物(37.1%和53.3%ee_p);PvEH3针对5种环氧底物中的环氧苯乙烷具有最高的区域选择性,区域选择性系数α_S和β_R分别为93.9%和99.0%。PvEH3的发现增加了区域选择性高且互补的EHs数目,为单酶催化环氧化物的对映会聚水解提供了更多的选择余地。
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关键词
环氧化物水解酶
生物催化
表达
区域选择性
对映会聚水解
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Keywords
epoxide hydrolase
biocatalysis
expression
regioselectivity
enantioconvergent hydrolysis
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分类号
Q556.9
[生物学—生物化学]
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