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STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8和NO的影响 被引量：15
1
作者 范贤明 张世波 +2 位作者 刘春涛 熊彬 王曾礼 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期487-489,492,共4页
目的:探讨STAT1(signaltransducerandactivatoroftranscription1)反义寡核苷酸(ASON)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法:取Wistar大鼠5只,向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动... 目的:探讨STAT1(signaltransducerandactivatoroftranscription1)反义寡核苷酸(ASON)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化1周大鼠肺泡巨噬细胞(AM)分泌TNF-α、IL-8和NO的影响。方法:取Wistar大鼠5只,向气管内灌注BLM复制肺纤维化模型后7d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取AM,并分为STAT1ASON组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(dexamethasone,DEX)组和空白对照组。分别用ASON、SON和DEX干预AM(空白对照组只加培养基),然后检测AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力。结果:用STAT1ASON处理AM后的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量减少,与空白对照组、SON组及DEX组相比较差异显著(P<0.05);DEX组AM的培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量明显低于空白对照组和SON组(P<0.05);而空白对照组和SON组培养上清中,TNF-α、IL-8和NO的含量却无统计学意义(P>0.05)。结论:STAT1ASON和DEX能使AM分泌TNF-α、IL-8和NO的能力下降,且STAT1ASON的作用强于DEX。STAT1可作为肺纤维化治疗的靶目标。 展开更多
关键词 STAT1 肺泡巨噬细胞 反义寡核苷酸 肺纤维化
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c-sis反义寡核苷酸对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：7
2
作者 刘瀚旻 熊英 +2 位作者 袁粒星 李谧 罗春华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1227-1230,共4页
目的 :探讨从血小板源生长因子 -B链 (PDGF -B)的基因水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :给肺动脉平滑肌细胞 (VSMC)分别施加不同剂量的c -sis癌基因反义寡核苷酸 (ASON) ,通过四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察细胞不同时相的增... 目的 :探讨从血小板源生长因子 -B链 (PDGF -B)的基因水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :给肺动脉平滑肌细胞 (VSMC)分别施加不同剂量的c -sis癌基因反义寡核苷酸 (ASON) ,通过四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线 ;采用流式细胞术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果 :中、大浓度ASON对细胞增殖有明显抑制作用。在中浓度的ASON作用下 ,加入PDGF -BB能促进VSMC的增殖。ASON干预前后 ,VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化 ,以G0 +G1期细胞增多、S +G2 +M期细胞减少为特征。各组的G0 +G1期细胞均显著多于对照组 (P <0 0 5 )。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G0 +G1期细胞有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :中、大剂量ASON能明显抑制肺VSMC的增殖 ,可使G0 +G1期细胞数明显增多 。 展开更多
关键词 原癌基因蛋白质c—sis 寡核苷酸类 反义 肌 平滑 血管 细胞周期
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碳纳米管-树形分子载体递送Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖的作用 被引量：7
3
作者 潘碧峰 崔大祥 +5 位作者 徐萍 高峰 贺蓉 尤晓刚 邵君 杨浩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第3期176-180,共5页
目的:探讨碳纳米管(CNT)-树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。方法:制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳... 目的:探讨碳纳米管(CNT)-树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。方法:制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物的形态结构;然后将复合物与人肝癌HepG2细胞共培养,同时设立对照,采用透射电镜观察碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物在细胞中的定位,采用MTT法检测复合物对癌细胞生长的抑制作用。结果:AFM与凝胶电泳分析证实碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物被成功制备。透射电镜观察证实碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物位于细胞质。MTT法检测表明,CNT-PAMAM-ASODN浓度为1.0μmol/L时,即可抑制(45.97±4.28)%的HepG2细胞增殖,而ASODN组和CNT-PAMAM组在此浓度条件下对HepG2细胞的抑制率则分别为(9.33±0.85)%和(6.37±0.69)%;当CNT-PAMAM-ASODN达到1.50μmol/L时,细胞抑制率为(70.22±7.25)%,而且抑制作用随培养时间的延长与浓度的增加而增强,实验组与对照组之间细胞抑制率存在显著性差异(P<0.01)。结论:碳纳米管-树形分子复合物是一种高效的基因递送载体,能够携带Survivin反义寡核苷酸进入肝癌细胞,并高效抑制HepG2细胞的增殖,显著增强反义寡核苷酸的作用效果。 展开更多
关键词 碳纳米管 树形分子 SURVIVIN基因 反义寡核苷酸 肝癌
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ClC-3反义寡核苷酸对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响 被引量：9
4
作者 钱艳 关永源 +3 位作者 王冠蕾 杨晓茹 贺华 丘钦英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期314-317,共4页
目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷... 目的　研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法　采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果　①ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的ClC 3蛋白的表达 ;②ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖。结论　ClC 展开更多
关键词 CLC-3 T淋巴细胞 反义寡核苷酸 增殖
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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响 被引量：5
5
作者 于建斌 张岚 +4 位作者 李琳 陈燕辉 张江安 陈奎生 张云汉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第6期1067-1070,共4页
目的观察乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响。方法以空白组和无关序列(N-ODN)组为对照,设计、合成4条ASODN链(ASODN-t1,t2,t3和t4),脂质体包埋后分别以10μmol/L、20μmol/L、30μmol... 目的观察乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响。方法以空白组和无关序列(N-ODN)组为对照,设计、合成4条ASODN链(ASODN-t1,t2,t3和t4),脂质体包埋后分别以10μmol/L、20μmol/L、30μmol/LN-ODN和ASODN转染A375细胞,台盼蓝排斥试验检测细胞增殖情况,免疫组织化学法检测乙酰肝素酶蛋白表达的变化。结果转染72h后,各ASODN组A375细胞计数较对照组、N-ODN组均减少(P均=0.000);每条链的10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L3个浓度组相比,差异均有统计学意义(P均=0.000);30μmol/LASODN-t2组与其他各组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。转染48h后,30μmol/LASODN-t2组乙酰肝素酶蛋白的表达较对照组、N-ODN组下调(P均=0.000)。结论乙酰肝素酶ASODN可抑制A375细胞增殖,下调乙酰肝素酶蛋白的表达。 展开更多
关键词 恶性黑素瘤 乙酰肝素酶 寡核苷酸 反义 A375细胞
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用 被引量：8
6
作者 孙玲 王峰 +4 位作者 孙慧 乐晓萍 葛秀峰 姜中兴 张钦宪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期649-653,共5页
为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细... 为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性。结果发现反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性。端粒酶活性检测显示反义寡核苷酸10、20和30μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);正义寡核苷酸20μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0·65)与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。TRAP-PAGE检测表明hTERTASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmol/L作用组条带最少。结论hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性。 展开更多
关键词 HL-60细胞 HTERT 反义寡核苷酸 端粒酶活性
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Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响 被引量：6
7
作者 方艳秋 齐亚灵 +2 位作者 白晓 芦小单 谭岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期278-281,428,共4页
目的:应用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的影响。方法:根据Survivin序列合成其反义寡核苷酸序列(Survivin-ASODN)。培养肝癌细胞株SMMC-7721,用荧光素标记的Survivin-ASODN转染,并设立空白对照... 目的:应用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制蛋白Survivin反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的影响。方法:根据Survivin序列合成其反义寡核苷酸序列(Survivin-ASODN)。培养肝癌细胞株SMMC-7721,用荧光素标记的Survivin-ASODN转染,并设立空白对照、空脂质体对照及正义寡核苷酸(SODN)对照组;用PCR方法检测Survivin基因表达水平;通过MTT方法分析Survivin-ASODN转染对肝癌细胞增殖的影响。结果:荧光素标记的Survivin-ASODN在SMMC-7721细胞中的转染率达到60%以上。SMMC-7721细胞分别用100、200、300、400和600nmol.L-1 ASODN转染后,Survivin基因表达水平下降,细胞增殖抑制率24h时分别为(3.87±1.67)%、(9.21±2.21)%、(15.21±3.18)%、(21.32±3.43)%和(32.62±3.74)%,而300nmol.L-1ASODN组48h时细胞生长抑制率为(29.21±4.12)%,72h时抑制率为(44.21±3.32)%;ASODN转染组细胞增殖抑制率与空白对照组、空脂质体组及SODN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Survivin-ASODN对细胞增殖有抑制作用,且呈现剂量依赖性;并且随着作用时间的延长,其抑制效果增强。 展开更多
关键词 SURVIVIN 反义寡核苷酸 原发性肝癌 转染 增殖抑制率
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以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用 被引量：11
8
作者 郭敏 李育敏 +1 位作者 费嘉 张洹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1127-1131,共5页
目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在Lipo-fectamineTM2000介导下,转染K562细胞。采用四甲... 目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在Lipo-fectamineTM2000介导下,转染K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变。结果:MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异(P<0.05),反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.6μmol/L。台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24 h后,可在细胞中见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平。结论:以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 microRNA 寡核苷酸类 反义 K562细胞 细胞凋亡
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TNF-α反义寡核苷酸对马桑内酯刺激的星形胶质细胞的影响 被引量：7
9
作者 刘子建 朱长庚 +2 位作者 刘庆莹 魏瑛 蔡秋云 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期475-478,599,共5页
为进一步探讨 TNF- α在星形胶质细胞激活中的作用 ,用 TNF- α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯 (coriaria lac-tone,CL )诱导的星形胶质细胞 TNF-α的产生 ,观察 NFκBp6 5核转位和 IκBα降解的变化。在应用 TNF-α反义寡核苷酸后 ,由 CL... 为进一步探讨 TNF- α在星形胶质细胞激活中的作用 ,用 TNF- α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯 (coriaria lac-tone,CL )诱导的星形胶质细胞 TNF-α的产生 ,观察 NFκBp6 5核转位和 IκBα降解的变化。在应用 TNF-α反义寡核苷酸后 ,由 CL 刺激引起的 TNFα生成在 2、 4、 12、 2 4 h均显著减少 ,NFκBp6 5核转位在相同的 4个时间点也均受到明显抑制 ,相应胞浆蛋白的 IκBα降解也低于对照组。实验结果表明 :由 CL诱导产生的 展开更多
关键词 癫痫 星形胶质细胞 反义寡核苷酸 肿瘤坏死因子
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CTGF反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成的抑制效应 被引量：9
10
作者 陈敏生 区彩文 +3 位作者 张立建 刘启才 刘世明 黄少华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期266-270,共5页
目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用。方法 :差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)。反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介... 目的 :研究结缔组织生长因子 (CTGF)反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用。方法 :差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)。反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介导转染CFs,并与血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 10 -6mol/L共培养 4 8h ,采用MTT法测CFs生长数目 ,羟脯氨酸法测胶原蛋白含量 ,RT -PCR法及Westernblotting法分别测CTGFmRNA及蛋白水平的表达。结果 :AngⅡ可以在mRNA及蛋白水平明显促进CFsCTGF的表达 (P <0 . 0 1) ,且呈浓度 -时间依赖性。CTGF反义链组的MTT反应A值、胶原蛋白含量、CTGFmRNA及蛋白水平的表达量均明显低于AngⅡ组 (P <0. 0 1) ,而CTGF正义链组和错义链组与AngⅡ组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :AngⅡ刺激下产生的CFsCTGFmRNA和蛋白水平的表达上调 ,可能是心肌纤维化传导通路中的关键环节 ,CTGF反义寡核苷酸可以序列特异性地阻断CTGF的介导 ,从而抑制AngⅡ对心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的诱导作用 ,进一步证实CTGF可能是拮抗心肌纤维化的特异性靶位。 展开更多
关键词 心肌 纤维化 结缔组织生长因子 寡核苷酸类 反义
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靶向Survivin的反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖的抑制作用 被引量：8
11
作者 王治 梅柱中 +3 位作者 童新 董燕 李青山 孙志贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期795-799,共5页
Survivin是新近克隆的一种凋亡抑制蛋白 (IAP)家族成员 ,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达 ,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达 .采用四唑盐 (MTT)比色实验法比较 2 0条抗人survivin反义寡核苷酸对HeLa细胞增殖的抑制效果 ,并... Survivin是新近克隆的一种凋亡抑制蛋白 (IAP)家族成员 ,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达 ,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达 .采用四唑盐 (MTT)比色实验法比较 2 0条抗人survivin反义寡核苷酸对HeLa细胞增殖的抑制效果 ,并从中筛选效果显著的反义寡核苷酸 ,在体外水平进一步验证其抑制survivin表达的能力 .在用 4 0 0nmol L反义寡核苷酸转染HeLa细胞 4 8h后 ,有 4条反义寡核苷酸对细胞增殖的抑制率超过 4 0 %,其中 4 5号反义寡核苷酸的抑制率可达5 9%,而阳性对照序列ISIS2 372 2的抑制率仅达 30 %.Northern和Western印迹分析证明 :4 5号反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量和蛋白水平 .4 5号反义寡核苷酸还可在较低浓度 (2 0 0nmol L)显著增强HeLa细胞对化疗药三尖杉酯碱的敏感性 .因此 ,4 展开更多
关键词 靶向SURVIVIN 反义寡核苷酸 肿瘤细胞增殖 抑制作用 IAP 凋亡抑制蛋白
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树形分子递送survivin反义寡核苷酸对HepG2细胞的抑制效应 被引量：5
12
作者 徐萍 崔大祥 +7 位作者 潘碧峰 李清 黄拓 刘凤涛 陈浩 鲍晨晨 贺蓉 高峰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第5期411-416,共6页
目的:研究利用聚酰胺(polyamidoamine,PAMAM)树形分子递送survivin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy- nucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的效应。方法:采用第1至第5代的聚酰胺树形分子室温下与反义survivin寡核苷... 目的:研究利用聚酰胺(polyamidoamine,PAMAM)树形分子递送survivin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy- nucleotide,asODN)抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的效应。方法:采用第1至第5代的聚酰胺树形分子室温下与反义survivin寡核苷酸混合制备树形分子与反义寡核苷酸的复合物(PAMAM-asODN),应用琼脂糖凝胶电泳及原子力学显微镜观察复合物的形态结构。PAMAM-asODN复合物转染HepG2细胞,同时设survivin反义寡核苷酸转染细胞作对照。共聚焦荧光显微镜检测复合物细胞转染效果;RT-PCR分析转染后细胞survivin mRNA的表达水平;MTT法检测复合物对HepG2细胞增殖的抑制效应。结果:琼脂糖凝胶电泳分析表明,树形分子与survivin反义寡核苷酸具有高效络合作用,形成了大小为25 nm左右的复合物;共聚焦荧光显微镜检测显示,与对照相比,PAMAM-asODN复合物转染细胞的效率显著提高;RT-PCR的结果表明,转染PAMAM-asODN复合物的肿瘤细胞中survivin mRNA表达显著降低;MTT结果表明,树形分子递送survivin反义寡核苷酸进入细胞后,HepG2细胞增殖明显受抑制,增殖抑制率随培养时间、复合物浓度、树形分子代数的增加而增加,6.0μmol/L G4.0 PAMAM-asODN与细胞培养96h可使抑制率达55%以上。结论:PAMAM树形分子能高效递送survivin asODN进入细胞,并抑制HepG2肿瘤细胞的增殖。树形分子可能是一种高效基因药物递送载体,在肿瘤治疗中具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 纳米材料 树形分子 SURVIVIN基因 反义寡核苷酸 肝癌细胞 基因治疗
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小寡核苷酸对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响 被引量：6
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作者 申玉芹 孙新华 +4 位作者 于丽 王学菊 冯志远 王丽颖 于永利 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期336-339,共4页
目的:筛选具有促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化作用的小寡核苷酸(ODN),探讨ODN对BMSCs向成骨细胞分化的影响。方法:取第3代BMSCs孵育24h后进行成骨诱导,双盲法加入12条不同的ODN,PBS作为溶媒对照组,应用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒... 目的:筛选具有促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化作用的小寡核苷酸(ODN),探讨ODN对BMSCs向成骨细胞分化的影响。方法:取第3代BMSCs孵育24h后进行成骨诱导,双盲法加入12条不同的ODN,PBS作为溶媒对照组,应用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测ODN于不同工作浓度(4.0、2.0、1.0和0.5mg.L-1)、不同时间点(24、72和120h)刺激经成骨诱导后的BMSCs内ALP的表达水平,筛选出具有促成骨分化作用的ODN。结果:与PBS溶媒对照组比较,ODN工作浓度为4.0和0.5mg.L-1时,实验组与对照组ALP表达水平差异无显著性(P>0.05),ODN工作浓度为2.0和1.0mg.L-1时,有2条ODN在不同时间点(24、72和120h)均可促进BMSCs内ALP的表达(P<0.01)。结论:在12条不同的ODN中共筛选出2条具有促进BMSCs成骨分化作用的ODN,表明特定序列的ODN能够影响大鼠BMSCs向成骨细胞的分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 分化 小寡核苷酸 成骨细胞
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TNF-α反义寡核苷酸对颅脑爆炸伤后脑组织含水量的影响 被引量：5
14
作者 侯立军 卢亦成 +7 位作者 张光霁 朱诚 江基尧 白如林 丁学华 刘荫秋 李兵仓 赖西南 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期767-769,共3页
目的 :探讨 TNF-α反义寡核苷酸对颅脑爆炸伤后脑组织含水量的影响。 方法 :1 8条犬随机分为人工脑脊液组( ACSF)、正义链组和反义链组 ,利用已建成的颅脑爆炸伤模型装置致伤 ,伤前经小脑 -延髓池分别注入 ACSF、TNF-α正义寡核苷酸和 T... 目的 :探讨 TNF-α反义寡核苷酸对颅脑爆炸伤后脑组织含水量的影响。 方法 :1 8条犬随机分为人工脑脊液组( ACSF)、正义链组和反义链组 ,利用已建成的颅脑爆炸伤模型装置致伤 ,伤前经小脑 -延髓池分别注入 ACSF、TNF-α正义寡核苷酸和 TNF-α反义寡核苷酸 ,比较 3组动物脑组织含水量的变化。结果 :伤前经小脑 -延髓池脑内局部应用 TNF-α反义寡核苷酸组 ,颅脑爆炸伤后脑组织内含水量较 ACSF组和正义链组明显减少 ( P<0 .0 5)。 结论 :TNF-α反义寡核苷酸可以减轻颅脑爆炸伤后脑水肿。 展开更多
关键词 爆炸伤 肿瘤坏死因子α 反义寡核苷酸类 脑水肿 颅脑损伤
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miR-92a反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量：6
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作者 仲飞 郝吉庆 +3 位作者 王芳 马泰 范璐璐 孙国平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第2期137-141,共5页
目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检... 目的探讨miR-92a反义寡核苷酸(ASO)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901和MKN-45分为反义寡核苷酸处理组和无义寡核苷酸对照组,分别转染miR-92a ASO和无义寡核苷酸,同时设未转染空白对照组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测处理前以及处理48 h后胃癌细胞中miR-92a的表达变化;MTT法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 Anti-miR-92a作用48 h后,miR-92a在两种胃癌细胞中的表达均显著下降(P<0.05);细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);细胞凋亡率明显增加(P<0.05),荧光染色显示其细胞核呈凋亡细胞的特征样改变。结论以miR-92a为靶标的ASO可以有效抑制胃癌细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多
关键词 胃肿瘤 微小RNA 反义寡核苷酸 增殖 凋亡
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bcl-2 mRNA反义寡核苷酸对胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性的影响 被引量：4
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作者 范钰 林庚金 +3 位作者 钱立平 许祖德 李华 徐康 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期483-485,489,共4页
目的　探讨bcl 2反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性的影响。方法　应用脂质体瞬时转染法介导bcl 2反义寡核苷酸 ,处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,分别采用Northernblot... 目的　探讨bcl 2反义寡核苷酸 (antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASODN)对胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性的影响。方法　应用脂质体瞬时转染法介导bcl 2反义寡核苷酸 ,处理人胃癌细胞系SGC 790 1后 ,分别采用Northernblot、Westernblot检测bcl 2mRNA、蛋白表达 ,用端粒微孔板杂交法检测端粒酶活性。结果　bcl 2ASODN处理的胃癌SGC 790 1细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论　bcl 展开更多
关键词 反义寡核苷酸类 癌基因 细胞 端粒酶 bcl-2 胃癌
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c-myc反义寡核苷酸对肾癌细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响 被引量：9
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作者 王子明 种铁 张鹏 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期611-612,623,共3页
目的　观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法　用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果　①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制... 目的　观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法　用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果　①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制肾癌细胞生长的作用 ,12 μmol·L-1c mycASODN组作用 4 8h ,对瘤细胞的生长抑制率为 4 7% ;该生长抑制作用随反义药物剂量的增加而增强 ,同时随作用时间的变化而变化。②流式细胞仪检测证明 ,c mycASODN对肾癌细胞周期的抑制作用在G1期到S期。结论　c 展开更多
关键词 C-MYC 反义寡核苷酸 肾癌 生长抑制 细胞周期 ASODN 细胞培养
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经小脑延髓池局部应用反义寡核苷酸对脑组织TNF-α表达的影响 被引量：4
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作者 侯立军 张光霁 +6 位作者 卢亦成 朱诚 江基尧 白如林 刘荫秋 李薇 蔡文琴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期655-657,共3页
目的 :观察 TNF-α反义寡核苷酸对 TNF-α的阻断作用。方法 :用 DNA合成仪合成 17聚体的 TNF-α正义寡核苷酸和反义寡核苷酸。 2 4只犬随机分为对照组和实验组 (包括人工脑脊液组、正义链组和反义链组 )。实验组动物用已建成的颅脑爆炸... 目的 :观察 TNF-α反义寡核苷酸对 TNF-α的阻断作用。方法 :用 DNA合成仪合成 17聚体的 TNF-α正义寡核苷酸和反义寡核苷酸。 2 4只犬随机分为对照组和实验组 (包括人工脑脊液组、正义链组和反义链组 )。实验组动物用已建成的颅脑爆炸伤模型装置致伤 ,伤前经小脑 -延髓池分别注入人工脑脊液、TNF-α正义寡核苷酸和 TNF-α反义寡核苷酸 ,比较 3组动物脑组织 TNF-α m RNA表达的变化。结果 :与人工脑脊液组和正义链组相比 ,伤前经小脑 -延髓池脑内局部应用 TNF-α反义寡核苷酸组 ,颅脑爆炸伤后脑组织内 TNF- α m RNA表达量明显减少 (P<0 .0 1)。结论 :经小脑延髓池局部应用反义寡核苷酸可有效阻断颅脑爆炸伤后脑组织 TNF- α的表达。 展开更多
关键词 脑损伤 爆炸伤 原位杂交 肿瘤坏死因子 寡核苷酸类 ODN
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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白表达的影响 被引量：5
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作者 陈奎生 郭克民 +3 位作者 高冬玲 张岚 张云汉 温洪涛 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第4期621-623,共3页
目的:探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:用4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸及1条无关寡聚核苷酸(N-ODN)分别体外培养、转染食管癌EC9706细胞。用上述细胞注射到模型左前腿腹... 目的:探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:用4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸及1条无关寡聚核苷酸(N-ODN)分别体外培养、转染食管癌EC9706细胞。用上述细胞注射到模型左前腿腹侧皮下,构建裸鼠食管癌动物模型,饲养5周后采用免疫组化SP法对裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白的表达进行了检测。结果:4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸(20mol/L)影响裸鼠体内食管癌移植瘤中VEGF蛋白表达表现出不同程度的抑制作用,实验组中VEGF蛋白表达与N-ODN转染组、未经转染的空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶反义寡核苷酸通过影响裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白表达,从而抑制肿瘤的浸润转移。 展开更多
关键词 乙酰肝素酶 反义寡核苷酸 裸鼠 食管癌 VEGF
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survivin反义寡核苷酸对肝癌耐药细胞的作用及与化疗的关系 被引量：5
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作者 高鹏 方驰华 +1 位作者 张刚庆 颜政 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1644-1647,共4页
目的研究survivin反义寡核苷酸对人肝癌耐药细胞株的增殖和凋亡情况,以及对阿霉素化疗敏感性的影响。方法将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM分为脂质体转染组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染组、正义寡核苷酸转染+阿霉素组、反义寡核苷酸... 目的研究survivin反义寡核苷酸对人肝癌耐药细胞株的增殖和凋亡情况,以及对阿霉素化疗敏感性的影响。方法将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM分为脂质体转染组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染组、正义寡核苷酸转染+阿霉素组、反义寡核苷酸转染组、反义寡核苷酸转染+阿霉素组共6组。MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡率变化,RT-PCR和Westernblot印迹法检测细胞survivinmRNA和蛋白表达。结果survivin-ASODN作用后的人肝癌耐药细胞SMMC-7721/ADM的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。survivinmRNA和survivin蛋白表达:脂质体转染对照组、阿霉素组、正义寡核苷酸转染对照组、正义寡核苷酸转染对照+阿霉素组之间survivin蛋白表达无明显差异(P>0.05)。400ng/mlsurvivingASODN组和400ng/mlASODN+阿霉素组survivinmRNA较其他4组显著降低(P<0.05),但其两组之间表达无明显差异(P>0.05)。结论survivin反义寡核苷酸能降低肝癌耐药细胞survivin表达,增强人肝癌耐药细胞对阿霉素的化疗敏感性。 展开更多
关键词 肝肿瘤 SURVIVIN基因 反义寡核苷酸 阿霉素 凋亡
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