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生物质谱在生物制品宿主细胞蛋白残留分析中的应用 被引量:2
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作者 谢力琦 王静 +3 位作者 朱添怡 王佳馨 黄懿 乔亮 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第2期193-200,共8页
宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)残留影响生物制品的质量和安全,是生物制品生产的关键质控要素。目前,HCPs残留的主要质控方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),但该方法的准确性高度依赖于抗体的特异性,且无法获得HCPs的种类及其含量... 宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCPs)残留影响生物制品的质量和安全,是生物制品生产的关键质控要素。目前,HCPs残留的主要质控方法是酶联免疫吸附试验(ELISA),但该方法的准确性高度依赖于抗体的特异性,且无法获得HCPs的种类及其含量分布信息,需要使用正交方法全面监测。而生物质谱技术无需依赖抗体即可实现HCPs的定性和定量分析,已逐渐成为除ELISA法外的主要分析表征方法,但质谱技术存在缺乏统一的操作流程和验证标准、高丰度药物信号抑制以及高昂的仪器成本等问题。本文总结了质谱法在生物制品HCPs分析中的工作流程及其应用进展,详细阐述了流程中涉及的样品准备、液相色谱分离、质谱数据采集、质谱数据分析和报告的开发原则和关键方法参数,并对未来的研究方向及挑战进行展望。 展开更多
关键词 宿主细胞蛋白 生物质谱 生物制品 质量控制
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传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白与宿主CEF细胞相互作用蛋白的筛选 被引量:1
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作者 陈玉明 高立 +11 位作者 王念 张礼洲 卢珍 高玉龙 王永强 高宏雷 李凯 刘长军 崔红玉 张艳萍 王笑梅 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2015年第7期16-19,共4页
为筛选与传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2相互作用的宿主细胞蛋白,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)为宿主细胞模型,VP2蛋白为诱饵,采用MatchmakerTMGold系统,进行酵母双杂交试验。结果显示杂交效率为15%,所筛选的酵母总数为7.5×... 为筛选与传染性法氏囊病病毒(IBDV)衣壳蛋白VP2相互作用的宿主细胞蛋白,本研究以鸡胚成纤维细胞(CEF)为宿主细胞模型,VP2蛋白为诱饵,采用MatchmakerTMGold系统,进行酵母双杂交试验。结果显示杂交效率为15%,所筛选的酵母总数为7.5×106个。回转验证等试验表明,有4种宿主细胞蛋白可以与VP2蛋白发生相互作用,本研究为深入研究IBDV的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 衣壳蛋白 宿主细胞蛋白 酵母双杂交 相互作用
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NDRVσC蛋白互作的宿主因子筛选及生物信息学分析 被引量:5
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作者 肖容 杜夏夏 +5 位作者 李传峰 马文戈 米晓云 刘光清 周海龙 陈宗艳 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期1-9,共9页
研究鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)σC蛋白与宿主因子之间的相互作用,对揭示σC蛋白在病毒复制过程中的功能及该病毒的致病机理具有重要作用。本研究采用免疫共沉淀法及质谱分析技术,筛选出与σC蛋白可能发生互作的宿主相关蛋白,并... 研究鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)σC蛋白与宿主因子之间的相互作用,对揭示σC蛋白在病毒复制过程中的功能及该病毒的致病机理具有重要作用。本研究采用免疫共沉淀法及质谱分析技术,筛选出与σC蛋白可能发生互作的宿主相关蛋白,并对所筛选出的宿主细胞蛋白进行了GO注释和KEGG代谢通路注释。结果表明,与空白对照组比较,获得与σC蛋白相互作用的宿主细胞蛋白有100个;筛选出的这些宿主细胞蛋白中,在病毒感染后不同时间点差异表达量均上升3倍以上的蛋白有6个,分别与病原致病性、蛋白质代谢途径、细胞信号通路转导有关。该研究结果为进一步探讨σC蛋白的生物学功能奠定了基础,也为揭示σC蛋白与宿主因子相互作用进而调控DRV复制等机制研究提供线索。 展开更多
关键词 鸭呼肠孤病毒 σC蛋白 宿主细胞蛋白 质谱分析 生物信息学分析
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Shotgun质谱筛选与猪瘟病毒囊膜蛋白E^rns相互作用的候选宿主蛋白
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作者 尹凝 蒋大良 +5 位作者 龚文杰 郭焕成 谢金鑫 夏乐乐 余兴龙 涂长春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期799-803,共5页
猪瘟病毒(CSFV)Erns蛋白是瘟病毒属成员特有的囊膜糖蛋白,在病毒吸附和侵入靶细胞过程中发挥重要作用。本研究利用Erns特异性抗体对CSFV石门强毒株感染的PK-15细胞进行免疫共沉淀(Co-IP),对获得的蛋白复合物进行Shotgun质谱鉴定。结果显... 猪瘟病毒(CSFV)Erns蛋白是瘟病毒属成员特有的囊膜糖蛋白,在病毒吸附和侵入靶细胞过程中发挥重要作用。本研究利用Erns特异性抗体对CSFV石门强毒株感染的PK-15细胞进行免疫共沉淀(Co-IP),对获得的蛋白复合物进行Shotgun质谱鉴定。结果显示,与阴性对照相比,病毒感染细胞样品中含有199种差异蛋白,其中可能包含与Erns作用的宿主细胞蛋白。同时,实验还对Co-IP蛋白样品进行SDS-PAGE,切取差异条带进行质谱分析以进一步验证Shotgun技术的蛋白筛选结果。通过Co-IP和Shotgun质谱分析,本研究筛选出一些可能在CSFV生命周期中与Erns互作用的宿主蛋白,为进一步研究CSFV在宿主细胞中的感染和复制的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 蛋白质相互作用 SHOTGUN Erns 宿主细胞蛋白
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副溶血弧菌与Hela细胞表面蛋白结合相关外膜蛋白的筛选和鉴定
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作者 王婧婷 陈萌 +2 位作者 李卓昱 袁增智 孙金生 《天津师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第1期29-34,共6页
为了从副溶血弧菌(VP)中筛选出可与宿主细胞表面蛋白互作的外膜蛋白,并研究其与宿主细胞的黏附作用,以Hela细胞株为宿主,将其表面蛋白生物素化后作为靶蛋白,利用层析技术从VP中垂钓到可与之结合的外膜蛋白,对重组蛋白进行质谱鉴定、纯化... 为了从副溶血弧菌(VP)中筛选出可与宿主细胞表面蛋白互作的外膜蛋白,并研究其与宿主细胞的黏附作用,以Hela细胞株为宿主,将其表面蛋白生物素化后作为靶蛋白,利用层析技术从VP中垂钓到可与之结合的外膜蛋白,对重组蛋白进行质谱鉴定、纯化和Western Blot检测,并采用间接免疫荧光法考察重组蛋白对Hela细胞的黏附能力.从VP中共筛选出5种可与Hela表面蛋白相结合的外膜蛋白,质谱鉴定结果表明:5种蛋白分别为Peptidase、PLP、Omp W、Omp N和Chaperonin,均为胞外蛋白.Omp W、Chaperonin和Peptidase对Hela细胞的黏附作用很强,Omp N的黏附能力次之,PLP的黏附能力最弱. 展开更多
关键词 副溶血弧菌 宿主细胞表面蛋白 外膜蛋白 黏附因子
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Viperin在抗病毒免疫中的作用研究进展 被引量:3
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作者 芦冬 黄金海 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期90-95,共6页
病毒感染激活宿主细胞先天性免疫信号通路级联反应,通过产生干扰素、抗病毒蛋白等来限制病毒复制和防止感染。Viperin是一种在物种间相对保守、参与先天性免疫的内质网相关抗病毒蛋白,通过与病毒蛋白、某些细胞内蛋白的相互作用调节信... 病毒感染激活宿主细胞先天性免疫信号通路级联反应,通过产生干扰素、抗病毒蛋白等来限制病毒复制和防止感染。Viperin是一种在物种间相对保守、参与先天性免疫的内质网相关抗病毒蛋白,通过与病毒蛋白、某些细胞内蛋白的相互作用调节信号转导过程,发挥抑制多种病毒增殖的广谱抗病毒作用。目前,对Viperin蛋白发挥抗病毒和免疫调节作用的功能域、作为自由基SAM酶家族成员发挥作用的机制有了新的认识,但对Viperin能够在不同病毒感染细胞内发挥广泛作用的确切机制仍不是很清楚。论文就Viperin的基本生物学特性、发挥不同抗病毒机制的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 抗病毒蛋白 Viperin 宿主细胞蛋白 相互作用
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