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一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测 被引量：1
1
作者 李文婷 闫恕 +6 位作者 张丹丹 贾博岩 唐艳 孔令聪 裴志花 刘树明 马红霞 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第11期11-16,共6页
利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据。根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质... 利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据。根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质粒pPIC9K-MDAP-2,将线性化的重组质粒电击转入毕赤酵母(P.pastoris)感受态GS115细胞内,将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-SDS-PGAE检测表达产物的大小,经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性。结果显示,重组质粒pPIC9K-MDAP-2获得高效表达,蛋白分子量为7.8 kD,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌与沙门氏菌均具有体外抑菌活性。MDAP-2基因的成功表达为进一步研究表达产物的生物学及免疫学活性奠定基础。 展开更多
关键词 家蝇抗菌肽(mdap-2) 毕赤酵母 分泌表达 抑菌活性
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家蝇抗菌肽Attacin-2基因的克隆、序列分析和诱导表达 被引量：12
2
作者 柳峰松 孙玲玲 +1 位作者 唐婷 王丽娜 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-33,共7页
攻击素(attacin)作为昆虫抗菌肽之一,在昆虫的先天免疫中起着重要作用。本研究通过家蝇Musca domesticaEST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇的Attacin-2基因(Mdatta2)cDNA序列。其全长819 bp,包含一个726 bp的完整开放阅读框(open read... 攻击素(attacin)作为昆虫抗菌肽之一,在昆虫的先天免疫中起着重要作用。本研究通过家蝇Musca domesticaEST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇的Attacin-2基因(Mdatta2)cDNA序列。其全长819 bp,包含一个726 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),以及42 bp的5'末端非翻译区(5'UTR)和51 bp的3'末端非翻译区(3'UTR),编码241个氨基酸残基,推导的多肽N端22个氨基酸残基为信号肽序列。同源性分析表明,其氨基酸序列与嗜凤梨果蝇Drosophila ananassae的Attacin一致性最高(46%)。以邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建的系统关系表明,家蝇的Attacin-2与其他双翅目昆虫的Attacin起源于共同的祖先,属于Attain_C超家族。应用实时荧光定量PCR的方法研究家蝇幼虫在受到外源细菌刺激时Mdatta2基因的表达,结果显示,在大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus分别刺激后3 h和6 h,家蝇幼虫Mdatta2表达量出现显著上调。Mdatta2基因在家蝇幼虫体内呈诱导型表达,表达水平随诱导时间的不同而变化,提示Mdatta2基因可能在家蝇免疫防御过程中起着重要作用。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 攻击素 基因克隆 基因表达
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家蝇幼虫抗菌肽MDL-2的电泳制备及其抗菌作用机理 被引量：8
3
作者 宫霞 胡树凯 乐国伟 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1212-1218,共7页
通过体壁损伤和感染大肠杆菌同时诱导家蝇Musca domestica幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,透析浓缩处理,然后经Tricine-SDS-PAGE得到诱导前后家蝇幼虫血淋巴中蛋白差异表达条带,将该条带电泳回收,复性,抗菌活性检测等步骤,分离纯化... 通过体壁损伤和感染大肠杆菌同时诱导家蝇Musca domestica幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,透析浓缩处理,然后经Tricine-SDS-PAGE得到诱导前后家蝇幼虫血淋巴中蛋白差异表达条带,将该条带电泳回收,复性,抗菌活性检测等步骤,分离纯化得到抗菌肽MDL-2,其分子中富含Pro,Gly和碱性氨基酸,分子量为11kD,对革兰氏阴性菌Escherichia coli和革兰氏阳性菌Staphylococcus aureus均有较强抗性,因此电泳制备抗菌肽的方法为此类生物微量活性物质的分离纯化提供一种行之有效的途径。通过MDL-2对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌通透性和透射电镜超微结构的图谱分析,MDL-2首先与细菌的外膜结合,然后抗菌肽形成柔性的两亲空间构象与细胞内膜作用,扰乱了膜脂分子的排列,改变了细胞膜的通透性,影响细胞膜的结构和功能,细胞膜上形成了许多孔道,同时造成细胞内的原生质扩散,并从孔道向胞外渗漏,影响了细菌的代谢系统,最终引起细胞膜破碎,细胞完全解体,从而起到抑菌杀菌作用。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 电泳制备 超微结构 抗菌机理
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家蝇幼虫抗菌肽MDL-2干扰细菌功能的初步研究 被引量：1
4
作者 宫霞 乐国伟 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期437-441,共5页
研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL-2对细菌细胞壁的溶解作用、细胞膜渗透性和代谢的影响.抗菌肽MDL-2在抗菌过程中首先与细菌的细胞壁相互作用,使其破裂.菌肽对革兰氏阴性细菌大肠杆菌的细胞壁的作用有浓度依赖性,而对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄... 研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL-2对细菌细胞壁的溶解作用、细胞膜渗透性和代谢的影响.抗菌肽MDL-2在抗菌过程中首先与细菌的细胞壁相互作用,使其破裂.菌肽对革兰氏阴性细菌大肠杆菌的细胞壁的作用有浓度依赖性,而对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌,MDL-2在较低的浓度时即具有破坏细胞壁的作用;抗菌肽MDL-2与金黄色葡萄球菌的细胞膜作用曲线呈现典型的S型,有较强的协同效应,并随着作用时间的延长细胞的渗透性增强;抗菌肽对细菌的代谢功能有较强的干扰作用,阻碍菌体的生命活动,加速菌体死亡. 展开更多
关键词 家蝇幼虫 抗菌肽 渗透性 Β-半乳糖苷酶 代谢
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家蝇幼虫抗菌相关蛋白/多肽的诱导及抗菌活性分析 被引量：36
5
作者 安春菊 石明 +4 位作者 郝友进 盛长忠 耿华 李德森 杜荣骞 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期545-548,共4页
对家蝇Muscadomestica 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激和超声 4种处理 ,并于处理后不同时间分别收集提取家蝇幼虫体内耐热总蛋白 ,比浊法测定其抗菌活性 ,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白 多肽。结果表明 ,4种处理均能诱导家蝇幼虫... 对家蝇Muscadomestica 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激和超声 4种处理 ,并于处理后不同时间分别收集提取家蝇幼虫体内耐热总蛋白 ,比浊法测定其抗菌活性 ,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白 多肽。结果表明 ,4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质 ,其中表观分子量为 2 2kD的蛋白对藤黄微球菌和大肠杆菌均有抗菌作用 ,5 0kD ,13kD ,2 6kD ,7kD的蛋白抗菌活性具有专一性。还发现一种 37kD的蛋白对抗菌活性有负作用 。 展开更多
关键词 家蝇 诱导 抗菌相关蛋白/多肽 抗菌活性
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家蝇抗菌肽抗菌活性及抗菌机制的初步研究 被引量：27
6
作者 周义文 尹一兵 +4 位作者 涂植光 陈辉 张雪梅 孟江平 朱旦 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期272-274,共3页
目的　研究家蝇抗菌肽的抗菌活性及抗菌机制。方法　用损伤感染的方法诱导家蝇幼虫表达抗菌肽 ,通过 Sephadex过滤层析和 HL PC技术纯化提取 ,用平板法和稀释法作抗菌活性试验 ,并用电子扫描技术研究抗菌肽的抗菌机制。结果　家蝇抗菌... 目的　研究家蝇抗菌肽的抗菌活性及抗菌机制。方法　用损伤感染的方法诱导家蝇幼虫表达抗菌肽 ,通过 Sephadex过滤层析和 HL PC技术纯化提取 ,用平板法和稀释法作抗菌活性试验 ,并用电子扫描技术研究抗菌肽的抗菌机制。结果　家蝇抗菌肽对铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA)均有明显的抗菌活性。大肠埃希氏菌与 5 0 μg/ml的纯化抗菌肽溶液一起 37℃孵育 6 0 min后 ,大肠埃希氏菌不能存活。经电镜扫描观察发现 ,细菌的细胞膜出现破损和穿孔现象。结论　家蝇抗菌肽具有明显的广谱抗菌活性 ,对阴性杆菌和阳性球菌均有杀伤作用。 展开更多
关键词 抗菌肽 抗菌活性 抗菌机制 家蝇
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家蝇幼虫分泌物抗菌肽的生化特性初步研究 被引量：18
7
作者 国果 吴建伟 +3 位作者 付萍 张勇 宋玉竹 宋智魁 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期918-923,共6页
研究了不同温度、蛋白酶及反复冻溶对家蝇Musca domestica幼虫活体浸泡法获得的分泌物抗菌肽抗菌活性的影响;并检测其凝血效应;试管稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC);SDS-PAGE分析其分子量范围。结果表明,该抗菌肽具... 研究了不同温度、蛋白酶及反复冻溶对家蝇Musca domestica幼虫活体浸泡法获得的分泌物抗菌肽抗菌活性的影响;并检测其凝血效应;试管稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC);SDS-PAGE分析其分子量范围。结果表明,该抗菌肽具有较强的热稳定性、酶稳定性及较强抗菌活性的特性,无凝血作用。对大肠埃希菌的最低抑菌浓度为37μg/mL、最低杀菌浓度为75μg/mL;分子量约10kD。 展开更多
关键词 家蝇 分泌物 抗菌肽 抗菌活性 生物学特性
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家蝇抗菌肽Diptericin基因的克隆与分析 被引量：11
8
作者 柳峰松 王丽娜 +1 位作者 唐婷 李伟 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1078-1082,共5页
Diptericin是抗菌肽家族中的一员,在昆虫先天免疫系统中起着重要作用。本研究通过EST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇Musca domestica的Diptericin基因(Md-Diptericin,MdDpt)cDNA序列,GenBank登录号为FJ794602。其全长410bp,包含一个3... Diptericin是抗菌肽家族中的一员,在昆虫先天免疫系统中起着重要作用。本研究通过EST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇Musca domestica的Diptericin基因(Md-Diptericin,MdDpt)cDNA序列,GenBank登录号为FJ794602。其全长410bp,包含一个300bp的完整开放阅读框(ORF),推导的氨基酸序列C端富含甘氨酸,N端富含脯氨酸,同源性分析表明,它与厩蝇Stomoxys calcitrans的Diptericin A mRNA相似性最高(identity=74%)。以邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建的系统关系表明,家蝇Diptericin与其他双翅目昆虫的Diptericin起源于共同的祖先,属于Attain-C超家族(Attacin_C superfamily)。基因定量分析表明,大肠杆菌刺激后6～12h,家蝇幼体MdDpt表达出现明显上调。结果提示MdDpt基因在家蝇免疫防御过程中起着重要作用。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 双翅肽 Md-Diptericin(MdDpt) 半定量RT-PCR
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不同微生物诱导家蝇幼虫表达抗菌肽的特性 被引量：11
9
作者 翟培 侯丽霞 +3 位作者 乐国伟 施用晖 韩晋辉 代卉 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期41-45,共5页
研究不同微生物诱导家蝇幼虫表达的抗菌肽特性。用3种不同的病源菌通过针刺感染的方法诱导家蝇幼虫表达抗菌肽,通过Sephadex G25分离,用Hult mark改进法和抑菌圈测定法作抑菌试验,用毛细管电泳(CE)分析不同微生物诱导得到的抗菌肽样品差... 研究不同微生物诱导家蝇幼虫表达的抗菌肽特性。用3种不同的病源菌通过针刺感染的方法诱导家蝇幼虫表达抗菌肽,通过Sephadex G25分离,用Hult mark改进法和抑菌圈测定法作抑菌试验,用毛细管电泳(CE)分析不同微生物诱导得到的抗菌肽样品差异,检测抗菌肽的热稳定性和酸碱耐受性。发现不同微生物诱导产生的家蝇抗菌肽具有广谱抑菌性,但不同样品对不同病源菌抑菌活性有差异,不同测定抑菌效果的方法对抑菌结果有影响,各种抗菌肽样品CE蛋白谱具有明显不同。抗菌肽样品都具有热稳定性和酸碱耐受性。说明不同微生物诱导产生的家蝇抗菌肽类型以及抗菌肽含量与诱导源有关,抗菌肽为家蝇幼虫体内固有成分,诱导增加了抗菌肽的表达量同时刺激新抗菌肽的产生。用志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌诱导家蝇幼虫可产生较多含量高活性好的抗菌肽。 展开更多
关键词 家蝇幼虫抗菌肽 抗菌活性 CE蛋白谱 热稳定性 酸碱耐受性
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家蝇幼虫抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌活性 被引量：10
10
作者 陈曼 胡启飞 +2 位作者 文阳安 周义文 涂植光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期91-94,共4页
通过超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,观察抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌作用。超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果表明,术后对照组小鼠相比其他两组活动减少,且3组白细胞计数... 通过超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,观察抗菌肽对铜绿假单胞菌感染小鼠创面的抗菌作用。超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果表明,术后对照组小鼠相比其他两组活动减少,且3组白细胞计数均减少。14 d后对照组存活率为30%,明显少于磺胺米隆组90%(P<0.05)和抗菌肽组80%(P<0.05)。对照组小鼠的重量在第6 d开始下降,明显少于其他两组(P<0.05)。而无菌对照组无死亡,重量持续增加。因此,超声处理能诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,其对铜绿假单胞菌感染的ICR小鼠创面有较强抗感染作用,能明显增加其存活率。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 超声诱导 铜绿假单胞菌 伤口感染
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抗菌肽对蛋鸡血清免疫指标及脾脏白细胞介素2 mRNA表达量的影响 被引量：35
11
作者 吕尊周 袁肖笑 +1 位作者 蔡兆伟 尹兆正 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2183-2189,共7页
本试验旨在研究饲粮不同水平抗菌肽对蛋鸡血清免疫指标及脾脏白细胞介素2(IL-2)mRNA表达量的影响。选用480只30周龄海赛克斯褐壳蛋鸡,随机分成4组,每组4个重复,每个重复30只鸡。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加200... 本试验旨在研究饲粮不同水平抗菌肽对蛋鸡血清免疫指标及脾脏白细胞介素2(IL-2)mRNA表达量的影响。选用480只30周龄海赛克斯褐壳蛋鸡,随机分成4组,每组4个重复,每个重复30只鸡。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加200(Ⅱ组)、400(Ⅲ组)、600 mg/kg(Ⅳ组)抗菌肽,试验期4周。结果表明,饲粮中添加不同水平抗菌肽可不同程度地提高脾脏系数,其中Ⅲ组显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,试验组血清免疫球蛋白A含量分别提高了7.69%(P>0.05)、19.40%(P<0.05)和14.38%(P>0.05),血清免疫球蛋白G含量分别提高了12.69%(P>0.05)、21.24%(P<0.05)和9.10%(P>0.05),而抗菌肽对血清免疫球蛋白M、补体3和补体4含量影响不显著(P>0.05)。Ⅱ组和Ⅲ组中脾脏IL-2 mRNA的表达量均显著高于Ⅰ组和Ⅳ组(P<0.05),Ⅳ组与Ⅰ组之间差异不显著(P>0.05)。由此可见,抗菌肽能提高蛋鸡的免疫功能,且饲粮中添加400 mg/kg抗菌肽效果最佳。 展开更多
关键词 抗菌肽 蛋鸡 免疫功能 IL-2MRNA
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家蝇新型抗菌肽Muscin的基因克隆、表达模式及抑菌活性 被引量：8
12
作者 杨雪 唐婷 +4 位作者 王一丽 刘欣 曹新茹 倪志华 柳峰松 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期617-624,共8页
【目的】鉴定家蝇Musca domestica(Linnaeus)中一种新型抗菌肽(Muscin)基因,并分析其功能。【方法】通过数字基因表达谱和生物信息学分析,在家蝇转录组中筛选得到一条抗菌肽基因,命名为muscin。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的组织... 【目的】鉴定家蝇Musca domestica(Linnaeus)中一种新型抗菌肽(Muscin)基因,并分析其功能。【方法】通过数字基因表达谱和生物信息学分析,在家蝇转录组中筛选得到一条抗菌肽基因,命名为muscin。以实时荧光定量PCR技术研究该基因的组织分布以及用大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus混合细菌刺激后的表达量变化。并对合成肽Muscin进行抑菌活性检测及溶血率测定。【结果】muscin基因c DNA序列全长379 bp,包含完整的开放阅读框153 bp。推导Muscin多肽序列由50个氨基酸残基组成,N端含有由25个氨基酸残基组成的信号肽。成熟肽中富含疏水性氨基酸残基和带正电荷的氨基酸残基,理论等电点为9.39。基因定量结果显示muscin基因在血细胞和脂肪体中表达量最高。通过细菌刺激进行免疫诱导后,幼虫体内该基因的表达水平明显上调,并在6 h达到高峰。抑菌和溶血实验显示c-Muscin对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抑菌活性,且溶血活性较低。【结论】Muscin是一种新型的广谱抗菌肽,可能参与家蝇抗菌免疫反应,且具有一定药物开发潜质。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 基因克隆 生物信息学分析 表达量 抑菌活性 溶血实验
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家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文) 被引量：6
13
作者 徐建华 朱家勇 +4 位作者 金小宝 许琴英 刘雷山 马艳 王艳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期311-318,共8页
目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为... 目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。 展开更多
关键词 家蝇 天蚕素 抗菌肽 基因克隆 融合表达
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重组家蝇抗菌肽Des-HF在酵母中的表达及对金黄色葡萄球菌的抗菌活性 被引量：7
14
作者 仇妍虹 李鹏 +5 位作者 李斐 郑其升 曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期105-109,共5页
参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152)设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因。将基因克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)... 参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152)设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因。将基因克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,相对分子质量约5 000的重组抗菌肽Des-HF获得表达。抗菌试验结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性。以小鼠为试验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,试验结果表明,240μg重组Des-HF可分别保护小鼠免受10倍最小致死浓度的金黄色葡萄球菌(ATCC26003)和CowanⅠ的攻击。 展开更多
关键词 家蝇防御素抗菌肽 Des—HF 酵母 分泌表达 金黄色葡萄球菌 抗菌活性
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少棘蜈蚣抗菌肽scolopin 2的克隆、表达与抗癌机制研究 被引量：11
15
作者 侯欢欢 卢佳 +2 位作者 章纬菁 黄芳 任文华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期172-178,共7页
旨在研究AMP-scolopin 2的抗菌活性和抗癌机理。利用SUMO融合技术对AMP-scolopin 2进行了体外表达;采用抑菌圈、MTT、流式细胞术和Western blotting等技术分析了其抗菌活性、溶血活性和对肿瘤细胞的促凋亡作用。结果表明,成功表达并纯化... 旨在研究AMP-scolopin 2的抗菌活性和抗癌机理。利用SUMO融合技术对AMP-scolopin 2进行了体外表达;采用抑菌圈、MTT、流式细胞术和Western blotting等技术分析了其抗菌活性、溶血活性和对肿瘤细胞的促凋亡作用。结果表明,成功表达并纯化了AMP-scolopin 2;AMP-scolopin 2对白血病细胞(K562)和肝细胞癌(Hep G2)具有抑制增殖和促凋亡作用,但对红细胞和正常细胞HEK293的影响很小;AMP-scolopin 2(40μmol/L)可以诱导K562(21.4%)和Hep G2(18.5%)细胞凋亡;此外,AMP-scolopin 2下调了与线粒体相关的凋亡蛋白pro-caspase-3、pro-caspase-9和pro-PARP的表达,且呈浓度依赖性。AMP-scolopin2可以通过线粒体caspase依赖性途径促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 蜈蚣 抗菌肽scolopin 2 SUMO 抗菌活性 细胞凋亡
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家蝇幼虫培养及其抗菌肽的初步研究 被引量：3
16
作者 凌庆枝 袁怀波 +3 位作者 赵帅 魏兆军 江力 姜绍通 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期112-115,共4页
通过天然家蝇幼虫的人工培养及Tricine-SDS-PAGE电泳,分离纯化出2种抗菌肽(命名为MDL-1、MDL-2),并检测了该抗菌肽的抑菌活性。MDL-1的相对分子量10772Da,MDL-2的相对分子量6091Da。实验结果表明:剩肉菜(骨头和虾皮等)对天然家蝇的产卵... 通过天然家蝇幼虫的人工培养及Tricine-SDS-PAGE电泳,分离纯化出2种抗菌肽(命名为MDL-1、MDL-2),并检测了该抗菌肽的抑菌活性。MDL-1的相对分子量10772Da,MDL-2的相对分子量6091Da。实验结果表明:剩肉菜(骨头和虾皮等)对天然家蝇的产卵引诱力最大;红糖和奶粉的最佳比例为3:1;家蝇幼虫食料最佳含水量为80%;家蝇幼虫单体平均增重最大的最佳培养基为麦麸和骨头的混合物。抑菌活性检测结果:MDL-1对枯草芽胞杆菌的抑菌效果最强,大肠杆菌次之,金黄色葡萄球菌最差;MDL-2对大肠杆菌的抗菌效果最好,金黄色葡萄球菌次之,枯草芽胞杆菌稍差。 展开更多
关键词 天然家蝇幼虫 人工培养 抗菌肽 Tricine-SDS-PAGE 电泳 抗菌活性
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日本鳗鲡肝脏表达抗菌肽2基因的克隆与表达 被引量：7
17
作者 段明珠 黄贝 +3 位作者 梁英 张芳芳 聂品 黄文树 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期252-260,共9页
为探讨鱼类抗菌肽基因的生物学功能,研究应用RACE方法克隆获得了日本鳗鲡(Anguilla japonica)肝脏表达抗菌肽2基因(Liver-Expressed Antimicrobial Peptide 2,LEAP-2),即AJLEAP-2的cDNA序列,全长为450 bp,开放阅读框编码89个氨基酸。其... 为探讨鱼类抗菌肽基因的生物学功能,研究应用RACE方法克隆获得了日本鳗鲡(Anguilla japonica)肝脏表达抗菌肽2基因(Liver-Expressed Antimicrobial Peptide 2,LEAP-2),即AJLEAP-2的cDNA序列,全长为450 bp,开放阅读框编码89个氨基酸。其成熟肽含有LEAP-2保守基序"C-X5-C-X4-C-X4-C"。AJLEAP-2基因组结构与其他脊椎动物LEAP-2相同,都包含有三个外显子。利用荧光定量PCR检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡不同组织/器官中的表达,发现其转录子在肝脏中表达量最高,是内参基因(β-acHn)的6倍;其次是肠道,但其表达量仅为肝脏的1/130。此外,还检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡玻璃鳗(Glass eel)阶段的转录表达水平,结果显示,玻璃鳗中AJLEAP-2的转录表达量仅低于黑仔期的肝脏,为黑仔鳗肠道表达量的2倍。LPS和迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)刺激能显著上调鳗鲡血液中AJLEAP-2的转录表达,刺激16h后上调倍数最高,分别为对照组的86倍和12倍。此外,LPS刺激72h和E tarda刺激8h后,肠道中AJLEAP-2显著上调表达(P<0.05),为对照组的8倍。Poly I:C刺激24h后,血液中AJLEAP-2转录表达显著下调。结果表明,AJLEAP-2在日本鳗鲡抗细菌感染过程中起重要的作用。 展开更多
关键词 抗菌肽 LEAP-2 日本鳗鲡 迟缓爱德华氏菌
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荧光光谱分析家蝇幼虫抗菌肽与大肠杆菌染色体DNA作用机理 被引量：15
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作者 宫霞 施用晖 乐国伟 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第3期420-423,共4页
利用荧光光谱方法研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL- 1与大肠杆菌染色体DNA的相互作用 ,并以溴化乙锭为荧光探针 ,考察了抗菌肽MDL- 1结合大肠杆菌DNA的作用方式 ,探讨其作用模式 ,即 :抗菌肽MDL- 1与大肠杆菌DNA骨架的磷酸基团通过静电引力结... 利用荧光光谱方法研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL- 1与大肠杆菌染色体DNA的相互作用 ,并以溴化乙锭为荧光探针 ,考察了抗菌肽MDL- 1结合大肠杆菌DNA的作用方式 ,探讨其作用模式 ,即 :抗菌肽MDL- 1与大肠杆菌DNA骨架的磷酸基团通过静电引力结合 ,使抗菌肽MDL- 1和DNA的空间结构都发生变化 ,抗菌肽MDL- 1进一步与DNA双螺旋的沟槽结合 ,然后抗菌肽MDL- 1以嵌入或部分嵌入方式与DNA相互作用 ,计算出抗菌肽MDL- 1与DNA的结合常数和成键位点数。本试验从分子水平上研究抗菌肽与细菌DNA的作用模式和结构特征 ,对深入了解抗菌肽的作用机理极为重要。 展开更多
关键词 抗菌肽 细菌DNA 大肠杆菌 家蝇幼虫 磷酸基团 作用机理 荧光光谱分析 染色体DNA DNA双螺旋 结合常数
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家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 被引量：3
19
作者 金小宝 王婷婷 +4 位作者 朱家勇 李小波 马艳 褚夫江 卢雪梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期194-197,共4页
拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至... 拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的抑制作用。结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的生长有抑制作用。说明酵母系统适合抗菌肽的表达。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 DEFENSIN 毕赤酵母 表达
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家蝇幼虫抗菌肽的超声诱导及分离纯化和活性研究 被引量：5
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作者 陈曼 文阳安 +1 位作者 周义文 涂植光 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期107-109,127,共4页
目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性。为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础。方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM... 目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性。为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础。方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM-Sepharose离子交换层析,冷冻干燥浓缩等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质。用Tricine-SDS-PAGE鉴定抗菌肽的纯度和性质,抑菌试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果:300W,50Hz超声处理60s能够诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示为一条带,相对分子量大约为5.8kD。纯化蛋白对阴沟肠杆菌,绿脓杆菌等G-杆菌的抑菌活性较强,而对金黄色葡萄球菌效果不显著。结论:诱导和纯化了一种家蝇幼虫抗菌肽,为此类活性物质的分离纯化提供了有效的方式。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 分离纯化 超声诱导
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