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重金属铅暴露对家蚕组织GSTs和GSH-Px酶活力及基因表达的影响 被引量:11
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作者 李艳梅 袁红霞 +4 位作者 徐旭 束梅影 卓微伟 司马杨虎 徐世清 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期425-434,共10页
谷胱甘肽S-转移酶(GST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是生物体内重要的解毒酶。为了研究重金属铅对鳞翅目昆虫的影响机制,给家蚕添食Pb(NO3)2进行Pb2+暴露,用酶活测定和real-time PCR方法,调查家蚕5龄6 d幼虫不同组织中酶活性及相关基因... 谷胱甘肽S-转移酶(GST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是生物体内重要的解毒酶。为了研究重金属铅对鳞翅目昆虫的影响机制,给家蚕添食Pb(NO3)2进行Pb2+暴露,用酶活测定和real-time PCR方法,调查家蚕5龄6 d幼虫不同组织中酶活性及相关基因mRNA转录水平的变化。正常家蚕5龄6 d幼虫生殖腺中的GST酶活性分别是脂肪体和中肠中的20.0倍、34.6倍,GSH-Px酶活性分别是脂肪体和中肠中的57.7倍、46.6倍。幼虫食下含10 mg/kg Pb2+以上的人工饲料时,生殖腺中2种解毒酶的活性成倍下降;人工饲料含20~80 mg/kg Pb2+时,生殖腺中的Gstd1和Gsh-Px基因mRNA转录水平也显著下调,且雄性比雌性更加显著。幼虫食下含10~160 mg/kg Pb2+的人工饲料时,脂肪体中2种解毒酶活性显著升高,Pb2+对2种酶的影响浓度分别为10~160 mg/kg和20~80 mg/kg,但在20~80 mg/kg Pb2+范围内,Gsh-Px和Gstd1基因mRNA的转录却受到抑制,并且雌性幼虫脂肪体中的GSH-Px酶活性及其基因mRNA转录水平、雄性幼虫脂肪体中的GST酶活性及基因mRNA转录水平对Pb2+暴露更加敏感。幼虫食下含20 mg/kg Pb2+以上的人工饲料时,中肠的GST酶活性显著上升,而GSH-Px酶活性变化较小,性别间差异不明显;Gstd1基因mRNA转录水平有上调趋势,Gsh-Px基因mRNA转录水平则受到显著抑制。结果显示,家蚕幼虫生殖腺虽然有比脂肪体和中肠更强的GST酶和GSH-Px酶活性,但对Pb2+的毒害敏感,雄性比雌性受影响更大,生殖腺通过抗氧化防御系统抵御Pb2+毒害的作用很弱。 展开更多
关键词 铅离子 家蚕组织 谷胱甘肽S-转移酶 谷胱甘肽过氧化物酶 酶活力 基因表达
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家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)的诱导表达定量分析 被引量:9
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作者 赵国栋 卫正国 +1 位作者 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期46-51,共6页
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为探究家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)在家蚕体内的解毒和抗性功能,采用实时荧光定量PCR方法,对BmGSTd1基因在正常饲养及添食NaF家蚕5龄幼虫不同组织中的转录水平进... 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为探究家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)在家蚕体内的解毒和抗性功能,采用实时荧光定量PCR方法,对BmGSTd1基因在正常饲养及添食NaF家蚕5龄幼虫不同组织中的转录水平进行检测,并采用家蚕Actin3、GAPDH、28S rRNA 3种内参照基因对检测结果进行归一化处理。BmGSTd1基因在家蚕5龄幼虫各组织的转录水平存在差异,且采用不同内参照基因结果不一致:分别以家蚕Actin3、GAPDH、28S rRNA基因为内参照,该基因转录水平最高的组织分别为中肠、丝腺、脂肪体。5龄第2天幼虫添食NaF对体内各组织中BmGSTd1基因的转录水平具有诱导作用,且在不同组织中诱导表达的情况不同,采用以上3种内参照基因进行归一化处理的结果数据表明,中肠和脂肪体组织中的诱导转录水平最高,可能与这2种组织是家蚕主要的解毒器官有关。研究认为,检测基因在不同组织中的转录水平,采用合适的内参照基因对保证检测结果的可靠性非常重要。 展开更多
关键词 谷胱甘肽-S-转移酶基因 家蚕组织 诱导表达 实时荧光定量PCR 内参照基因
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家蚕微孢子虫水通道蛋白基因NbAQP的克隆及表达特征分析 被引量:1
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作者 王玮 陈功 +4 位作者 彭祥然 李孝良 唐旭东 徐莉 沈中元 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期662-667,共6页
水通道蛋白(aquaporin,AQP)是在动物、植物、微生物细胞膜上发现的能够高选择性透过水分的一类通道蛋白。通过克隆家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的AQP基因,并分析其表达特征,为研究AQP在Nb孢子侵染宿主细胞时调节孢子内渗透压的作... 水通道蛋白(aquaporin,AQP)是在动物、植物、微生物细胞膜上发现的能够高选择性透过水分的一类通道蛋白。通过克隆家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的AQP基因,并分析其表达特征,为研究AQP在Nb孢子侵染宿主细胞时调节孢子内渗透压的作用积累基础信息。依据从Microsporidia DB和MIPModDB数据库比对获得的序列设计引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆了NbAQP基因,该基因大小为750 bp,编码蛋白质分子质量为26.66 k D,具有MIP超家族水通道蛋白的保守跨膜结构域。用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法,在Nb孢子感染宿主家蚕的7 d内,家蚕中肠组织中都能检测到NbAQP基因的表达,自感染后2 d开始,NbAQP基因的表达水平开始明显上升,直至感染后7 d达到最高水平。NbAQP基因的高水平表达时相与家蚕添食Nb孢子后中肠组织中成熟Nb孢子大量出现的时间相一致,初步推测NbAQP可能在家蚕微孢子虫成熟孢子发芽时的孢子内渗透压调节中起到重要作用。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 水通道蛋白 基因克隆 表达特征 家蚕中肠组织 实时荧光定量PCR
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家蚕感染BmCPV后中肠自噬相关蛋白ATG8的表达变化
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作者 吴永鹏 刘立群 +4 位作者 朱大鹏 杨晓冰 张敏娟 钱永华 焦锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期475-481,共7页
家蚕质型多角体病毒(BmCPV)感染家蚕幼虫中肠上皮细胞而引起中肠型脓病,对病毒致病机理的研究有助于制定科学的预防策略。细胞自噬作为机体的一种免疫机制在抵抗微生物的感染中发挥作用。利用免疫组织化学法,检测BmCPV感染家蚕4龄幼... 家蚕质型多角体病毒(BmCPV)感染家蚕幼虫中肠上皮细胞而引起中肠型脓病,对病毒致病机理的研究有助于制定科学的预防策略。细胞自噬作为机体的一种免疫机制在抵抗微生物的感染中发挥作用。利用免疫组织化学法,检测BmCPV感染家蚕4龄幼虫中肠组织中的细胞自噬相关蛋白ATG8(autophagy-related gene 8)的表达变化:家蚕幼虫在感染BmCPV1-8 h内,中肠ATG8蛋白的表达显著高于正常水平;感染8-35 h,中肠ATP8蛋白的表达下降至正常水平;感染51 h,该蛋白质在中肠的表达又显著升高,至99 h达到高峰,且感染后62 h可以观察到中肠上皮层柱状细胞内有病毒多角体的产生。研究结果显示BmCPV感染家蚕幼虫的过程与中肠细胞自噬存在一定的关系。 展开更多
关键词 家蚕质型多角体病毒 家蚕中肠组织 细胞自噬 ATG8蛋白 免疫组织化学法
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