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阳离子卟啉对宫颈癌细胞株Caski的光动力学杀伤效应 被引量:5
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作者 吕昌帅 丁佰娟 +2 位作者 刘洪丽 姜侃 张友忠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期981-985,共5页
目的探讨阳离子卟啉(TMPyP4)对宫颈癌细胞株Caski的光动力学杀伤效果和可能作用机制,为光动力学治疗(PDT)在宫颈癌动物荷瘤模型以及临床应用中提供理论依据。方法以宫颈癌细胞株Caski为研究对象,以TMPyP4为光敏剂,按照不同处理因素分为... 目的探讨阳离子卟啉(TMPyP4)对宫颈癌细胞株Caski的光动力学杀伤效果和可能作用机制,为光动力学治疗(PDT)在宫颈癌动物荷瘤模型以及临床应用中提供理论依据。方法以宫颈癌细胞株Caski为研究对象,以TMPyP4为光敏剂,按照不同处理因素分为正常对照组、单纯PDT组、单纯TMPyP4组和TMPyP4-PDT组。采用四甲基偶氮唑蓝法检测TMPyP4-PDT对宫颈癌细胞株Caski体外生长的抑制作用,光镜下观察细胞形态变化。采用Annexin V-PI双标记法检测细胞凋亡率。采用实时荧光定量PCR检测TMPyP4-PDT对Caski细胞Ki-67、MCM2、P16、CA-Ⅸ和NF-κB mRNA表达水平的影响。结果单纯TMPyP4组和TMPyP4-PDT组对细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性;单纯PDT组对细胞增殖的抑制作用不明显(P>0.05)。光镜下可观察到单纯PDT组贴壁细胞多,无核固缩及核碎裂样改变;单纯TMPyP4组及TMPyP4-PDT组细胞出现胞质空泡化、细胞体积缩小、细胞核碎裂及凋亡小体形成等。流式细胞术检测结果显示,TMPyP4-PDT可诱导Caski细胞凋亡,且随着药物浓度的增加,细胞凋亡百分比增加。实时荧光定量PCR检测发现,随着药物浓度的增加,Caski细胞Ki-67、MCM2、CA-Ⅸ和NF-κB mRNA表达水平明显降低,P16 mRNA表达水平升高,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 TMPyP4-PDT对宫颈癌细胞株Caski有明显的杀伤作用,其机制可能与正性调节P16以及负性调节Ki-67、MCM2、CA-Ⅸ和NF-κB mRNA表达量有关。 展开更多
关键词 宫颈癌细胞株caski 阳离子卟啉 光动力疗法 KI-67 MCM2 P16 CA-Ⅸ NF-κB
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南赤瓟醇提物通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡 被引量:7
2
作者 周琴 杨小姣 +5 位作者 石孟琼 刘英 覃慧林 冯天艳 张永峰 尉小琴 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第1期42-49,共8页
目的:研究南赤瓟醇提物影响PI3K/Akt/m TOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制。方法:用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/m L)作用Caski细胞24 h后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25... 目的:研究南赤瓟醇提物影响PI3K/Akt/m TOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制。方法:用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/m L)作用Caski细胞24 h后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00 mg/m L)作用Caski细胞24 h后,流式细胞术测定细胞周期DNA含量及亚G_1凋亡峰,ELISA试剂盒检测Caski细胞中Caspase-9和Caspase-3活性及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)含量,Real-time PCR测定P53、Bcl-2和Bax m RNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值,Western blot测定PI3K、Akt、m TOR磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt、p-m TOR),并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-m TOR/m TOR比值。结果:南赤瓟醇提物对Caski细胞生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00 mg/m L)能显著抑制Caski细胞增殖,并将其阻滞于G_2/M期;可抑制pPI3K、p-Akt和p-m TOR蛋白表达水平,降低pPI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-m TOR/m TOR比值;上调P53和Bax m RNA表达,下调Bcl-2 m RNA及Bcl-2与Bax比值;降低线粒体中Cyt C含量,升高胞浆中Cyt C含量;增强Caspase-9和Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)。结论:南赤瓟醇提物诱导Caski细胞凋亡的作用机制与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路磷酸化有关。 展开更多
关键词 南赤瓟 宫颈癌 caski细胞 PI3K/Akt/mTOR信号通路
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CXCR4-siRNA逆转录病毒载体对宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用 被引量:3
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作者 康楷 胡丽娜 +1 位作者 董晓静 朱元方 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期1244-1248,共5页
对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用。方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering摘要目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧... 对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用。方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering摘要目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体质粒pSOS,测序正确后进行重组,转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清用其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测其对Caski细胞CXCR4表达的抑制作用。结果:成功构建pSOS-siCXCR4逆转录病毒载体,筛选出高效抑制序列,与对照组比较,在Caski细胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h对CXCR4mRNA表达的抑制率分别为29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平对CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%、49.6%和62.9%。结论:pSOS-HUS-siCXCR4干扰载体可以有效抑制Caski细胞中CXCR4表达。 展开更多
关键词 RNA干扰 CXCR4 逆转录病毒 宫颈癌 caski细胞
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宫颈癌组织和细胞株中PD-1的表达及意义 被引量:5
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作者 石海燕 李巧稚 +2 位作者 吕晋 杨秀媚 胡维维 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1263-1266,共4页
目的探讨程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)在人宫颈鳞状细胞癌、腺癌组织及宫颈癌细胞株中的内源性表达,分析PD-1表达与宫颈癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测PD-1在宫颈癌组织中的表达,分析其与宫颈癌临床病理... 目的探讨程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)在人宫颈鳞状细胞癌、腺癌组织及宫颈癌细胞株中的内源性表达,分析PD-1表达与宫颈癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测PD-1在宫颈癌组织中的表达,分析其与宫颈癌临床病理特征的关系;培养HPV阳性宫颈腺癌Hela细胞和HPV阴性宫颈鳞状细胞癌C33a细胞,并用Western blot法检测PD-1的表达。结果宫颈癌组织中PD-1主要表达于肿瘤间质淋巴细胞及癌细胞,PD-1在宫颈癌组织中的阳性率为93. 6%。PD-1表达与肿瘤分化程度和病灶大小均密切相关(P <0. 001),与淋巴结转移相关(P <0. 05);与患者年龄、FIGO分期、脉管浸润、神经浸润及HPV感染均无关(P> 0. 05)。宫颈鳞状细胞癌和腺癌组织中PD-1的表达差异无显著性(P> 0. 05)。在宫颈鳞状细胞癌组织中PD-1表达与患者年龄、淋巴结转移(P <0. 05)相关;在宫颈腺癌组织中,PD-1表达与组织学分级密切相关(P <0. 001),与肿瘤直径相关(P <0. 05)。在宫颈癌HPV+Hela细胞和HPV-C33a细胞中均有PD-1蛋白的表达,但差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论人宫颈癌组织中PD-1阳性率较高,宫颈癌细胞株亦表达PD-1,该基因与肿瘤的多个临床指标密切相关,PD-1可能参与了肿瘤的发生及恶性转化过程。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 鳞状细胞 腺癌 宫颈癌细胞株 PD-1 临床病理特征
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特异性核酶对宫颈癌细胞系CaSKi增殖与凋亡的影响 被引量:4
5
作者 郑燕芳 饶智国 张积仁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期496-498,502,共4页
目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。方法设计特异性切割HPV16E6基因的核酶,构建抗HPV16E6核酶的真核表达质粒。以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交... 目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。方法设计特异性切割HPV16E6基因的核酶,构建抗HPV16E6核酶的真核表达质粒。以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern blotting检测CaSKi、CaSKi-R、CaSKi-P 3种细胞中E6基因的表达。测定3种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,并以皮下接种法检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力。流式细胞仪检测3种细胞的凋亡率,并测定c-myc、bcl-2、p53、fas、PCNA、C-erbB-2等基因的表达。结果点杂交证实该核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern blotting证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低。与CaSKi细胞相比,CaSKi-R细胞生长速度、软琼脂克隆形成率明显降低,在裸鼠体内的致癌能力下降,凋亡率明显增高,出现凋亡峰,S期、G2M期细胞百分率下降;而CaSKi-P细胞无此改变。CaSKi-R细胞表达HPV16E6、C-myc、Bcl-2、PCNAC-erbB-2蛋白明显减少,而p53表达明显增高;CaSKi和CaSKi-R细胞中Fas 蛋白的表达相近。CaSKi-P细胞中各基因的表达与CaSKi细胞无显著差异。结论抗HPV16E6核酶的导入能阻碍宫颈癌细胞增殖,诱导其凋亡,其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低,以及由此而引起? 展开更多
关键词 特异性核酶 宫颈癌细胞 caski 影响 脱噬作用 细胞分裂 细胞增殖 细胞凋亡
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三氧化二砷体外诱导宫颈癌细胞株凋亡及其机制的研究 被引量:11
6
作者 徐波 王洁 卞度宏 《实用医学杂志》 CAS 2006年第3期245-247,共3页
目的:研究三氧化二砷体外能否诱导宫颈癌细胞株(H eLa细胞)发生凋亡及其相关机制。方法:采用透射电镜、D N A Ladder、TU N E L的方法进行凋亡检测,用E C L W esternblot的方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果:三氧化二砷体外... 目的:研究三氧化二砷体外能否诱导宫颈癌细胞株(H eLa细胞)发生凋亡及其相关机制。方法:采用透射电镜、D N A Ladder、TU N E L的方法进行凋亡检测,用E C L W esternblot的方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果:三氧化二砷体外作用于H eLa细胞后,透射电镜观察到了凋亡小体;D N A Ladder法检测到了凋亡时D N A降解形成的梯带;TU N E L法也检测到H eLa细胞有D N A的断裂。在凋亡过程中,凋亡相关基因bcl-2的表达下调,而p53基因的表达没有明显改变。结论:三氧化二砷体外能诱导H eLa细胞发生凋亡,其机制与bcl-2基因的表达下调有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 细胞凋亡 HeLa细胞 三氧化二砷 bcl-2基因 宫颈癌细胞株 凋亡检测 体外诱导 WESTERNBLOT DNA降解
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海带硫酸多糖对人宫颈癌细胞株增殖和凋亡的影响 被引量:16
7
作者 孙冬岩 林虹 史玉霞 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1241-1243,共3页
目的:探讨海带硫酸多糖(LPS)对人宫颈癌细胞株HeLa的体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法:以不同浓度的LPS处理HeLacell,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况,细胞染色法观察细胞凋亡的形态,用流式细胞仪记录细胞周期改变、b... 目的:探讨海带硫酸多糖(LPS)对人宫颈癌细胞株HeLa的体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法:以不同浓度的LPS处理HeLacell,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况,细胞染色法观察细胞凋亡的形态,用流式细胞仪记录细胞周期改变、bcl-2及NF-κBp65基因表达情况。结果:LPS使细胞增殖能力下降,细胞出现凋亡的形态学改变,细胞周期受到阻滞,bcl-2蛋白与NF-κBp65的表达随着LPS浓度的增加与作用时间的延长而降低。结论:LPS明显抑制人宫颈癌细胞株的生长,并通过影响bcl-2、NF-κBp65基因蛋白的表达促进宫颈癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 海带硫酸多糖 细胞株增殖 宫颈癌 四甲基偶氮唑蓝比色法 NF-KBP65 宫颈癌细胞株 bcl-2蛋白 细胞周期 细胞增殖情况 细胞增殖能力 HeLa 细胞染色法 流式细胞 BEL-2 P65基因 形态学改变 细胞凋亡 LPS 体外生长 不同浓度
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常春藤皂苷元(hederagenin)通过抑制STAT3通路降低CaSki宫颈癌细胞增殖能力并促进其凋亡 被引量:12
8
作者 方丽文 刘明明 蔡琳玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期140-145,共6页
目的探讨常春藤皂苷元(hederagenin)对宫颈癌细胞活性及凋亡的影响及机制。方法培养CaSki宫颈癌细胞,采用(0、 10、 20、 40、 80)μg/mL常春藤皂苷元处理,噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性,确定其半数抑制剂量约40μg/mL。采用40μg/mL常春... 目的探讨常春藤皂苷元(hederagenin)对宫颈癌细胞活性及凋亡的影响及机制。方法培养CaSki宫颈癌细胞,采用(0、 10、 20、 40、 80)μg/mL常春藤皂苷元处理,噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性,确定其半数抑制剂量约40μg/mL。采用40μg/mL常春藤皂苷元处理宫颈癌细胞,流式细胞术测定宫颈癌细胞凋亡、 Western blot法测定宫颈癌细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-9、信号转导子和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平。用STAT3信号通路抑制剂AG490和常春藤皂苷元共同处理宫颈癌细胞,用上述方法检测细胞活性和凋亡水平。结果与对照组细胞相比, 40μg/mL常春藤皂苷元处理后的宫颈癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡水平升高, c-caspase-3和c-caspase-9水平增加, p-STAT3蛋白水平降低。与常春藤皂苷元处理细胞相比, AG490和常春藤皂苷元共同处理的宫颈癌细胞活性进一步降低,细胞凋亡率增加,细胞中c-caspase-3和c-caspase-9的蛋白水平升高。结论常春藤皂苷元抑制宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡,与抑制STAT3信号通路有关。 展开更多
关键词 常春藤皂苷元(hederagenin) 宫颈癌 细胞凋亡 STAT3 caski细胞
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钙结合蛋白S100A8/A9对宫颈癌细胞系CasKi细胞F-肌动蛋白的影响 被引量:5
9
作者 王希涛 孙全梅 +3 位作者 张幼怡 陈嵘 韩东 耿力 《中国微创外科杂志》 CSCD 2009年第6期556-559,共4页
目的探讨钙结合蛋白S100A8/A9复合物对人宫颈癌上皮细胞癌细胞系CasKi细胞骨架及表面超微结构的影响。方法应用20μg/ml S100A8/A9复合物作用于CasKi细胞,对细胞骨架F-肌动蛋白进行染色,应用快速共聚焦荧光显微镜观察细胞骨架的改变。... 目的探讨钙结合蛋白S100A8/A9复合物对人宫颈癌上皮细胞癌细胞系CasKi细胞骨架及表面超微结构的影响。方法应用20μg/ml S100A8/A9复合物作用于CasKi细胞,对细胞骨架F-肌动蛋白进行染色,应用快速共聚焦荧光显微镜观察细胞骨架的改变。在生理条件下,应用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)对活体细胞进行高分辨成像,观察细胞表面超微结构及应力纤维。结果S100A8/A9复合物作用24 h后宫颈癌细胞系CasKi细胞的F-肌动蛋白排列出现紊乱,主要分布于细胞的周边,细胞中央F-肌动蛋白含量明显减少。CasKi细胞经过20μg/ml S100A8/A9蛋白复合物处理前细胞核部位F-肌动蛋白光密度为92.42±5.16,经过S100A8/A9 72 h处理后,F-肌动蛋白的光密度降为57.67±3.70,两者相比较差异具有显著的统计学意义(t=5.268,P=0.000)。AFM成像显示S100A8/A9复合物作用后细胞边缘卷曲,高度增加,伪足减少,细胞膜下应力纤维结构遭到破坏。结论S100A8/A9蛋白复合物可以对宫颈癌细胞系CasKi细胞表面的超微结构及应力纤维产生影响,并且这种影响主要是通过肌动蛋白的重新分布实现的。 展开更多
关键词 原子力显微镜 钙结合蛋白S100A8/A9 caski细胞 宫颈癌 F-肌动蛋白
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抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响 被引量:2
10
作者 刘柯 王丽莉 +1 位作者 郑燕芳 张积仁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期529-532,共4页
目的探讨特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P。测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P 3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率... 目的探讨特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P。测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P 3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率和裸鼠体内成瘤性,RT-PCR检测3种细胞中VEGF的表达。结果CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率和软琼脂克隆形成率相近,CaSKi-R细胞的生长速度和软琼脂克隆形成率明显降低。CaSKi 、CaSKi-P致瘤性无显著差异,而CaSKi-R致瘤性显著低于CaSKi(P<0.05)。RT-PCR检测CaSKi-R细胞的VEGF mRNA的表达水平明显低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达,而后者的VEGF mRNA的表达水平相近。结论特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内VEGF的表达下降有关。 展开更多
关键词 抗HPV16E6核酶 宫颈癌 caski细胞侵袭表型 VEGF 表达
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miR-140靶向抑制PD-L1表达增强宫颈癌HeLa和Caski细胞对奥沙利铂的敏感性 被引量:2
11
作者 黄翀 刘智慧 +2 位作者 罗素坤 蔡晓楠 宋晓婕 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期159-165,共7页
目的:探究miR-140能否通过靶向抑制程序性细胞死亡蛋白-1(programmed death-1, PD-L1)表达增强宫颈癌(cervical cancer, CC)细胞对奥沙利铂的敏感性。方法:采用qPCR检测miR-140在人正常宫颈细胞、CC细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株中的表... 目的:探究miR-140能否通过靶向抑制程序性细胞死亡蛋白-1(programmed death-1, PD-L1)表达增强宫颈癌(cervical cancer, CC)细胞对奥沙利铂的敏感性。方法:采用qPCR检测miR-140在人正常宫颈细胞、CC细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株中的表达情况;采用miR-140模拟物转染细胞,CCK-8法检测CC正常细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株的增殖情况、克隆形成实验检测细胞的克隆形成率。通过Starbase及TargetScan在线分析软件预测miR-140与PD-L1的靶向结合位点,并通过双荧光素酶报告基因验证miR-140与PD-L1的靶向结合关系。采用Annexin V FITC/PI双染色法和Wb法分别检测过表达miR-140或同时过表达PD-L1,且在使用奥沙利铂处理后CC细胞的凋亡、迁移及凋亡相关蛋白的表达情况。建立裸鼠CC移植瘤模型,检测miR-140加强肿瘤对奥沙利铂处理敏感性的效果。结果:miR-140在奥沙利铂耐药性CC细胞中表达显著下调(P<0.01),过表达miR-140能够明显上调奥沙利铂耐药CC细胞对奥沙利铂的敏感性(P<0.05),抑制CC细胞的增殖及克隆形成(均P<0.01)。miR-140与PD-L1 3'-UTR靶向结合并抑制其表达。过表达miR-140显著促进CC细胞的迁移及凋亡(P<0.01),过表达miR-140的同时过表达PD-L1明显减弱了miR-140对CC细胞迁移的抑制及细胞凋亡的促进作用(均P<0.05)。小鼠异体移植瘤模型验证了miR-140促进肿瘤对奥沙利铂的敏感性。结论:miR-140通过靶向抑制PD-L1表达增加CC细胞对奥沙利铂的敏感性,上调miR-140或抑制PD-L1的表达再与奥沙利铂联合处理有可能作为奥沙利铂耐药CC治疗的新策略。 展开更多
关键词 miR-140 PD-L1 宫颈癌 HeLa细胞 caski细胞 奥沙利铂
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LINC00958通过上调VEGF-C表达促进宫颈癌细胞的恶性生物学行为及小鼠模型的淋巴结转移 被引量:1
12
作者 靖爽 和晓利 +1 位作者 井佳雨 王悦 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期161-168,共8页
目的:探讨LINC00958/血管内皮生长因子C(VEGF-C)信号通路在宫颈癌的淋巴管生成和淋巴转移中的作用。方法:从2020年9月至2022年9月期间在河南省人民医院接受手术的患者中收集了42例宫颈癌组织标本,通过qPCR检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞(H... 目的:探讨LINC00958/血管内皮生长因子C(VEGF-C)信号通路在宫颈癌的淋巴管生成和淋巴转移中的作用。方法:从2020年9月至2022年9月期间在河南省人民医院接受手术的患者中收集了42例宫颈癌组织标本,通过qPCR检测宫颈癌组织和宫颈癌细胞(Hela、C33A、SiHa、Caski)中LINC00958的表达情况。将LINC00958过表达载体(LINC00958组)或对照载体(CMV组)转染Caski细胞,敲减LINC00958(shLINC00958组)、VEGF-C(shVEGF-C组)的shRNA序列或阴性对照shRNA(shNC组)转染SiHa细胞。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测过表达或敲减LINC00958对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。观察转染后细胞的培养上清液对人淋巴管内皮细胞(HLEC)淋巴管形成能力的影响。建立小鼠腘淋巴结转移模型,观察过表达LINC00958或同时敲减VEGF-C对宫颈癌淋巴结转移的影响。结果:LINC00958在宫颈癌组织中呈高表达(P<0.001),高水平的LINC00958与大肿瘤、晚期肿瘤分级、浸润深度和淋巴转移有关联(P<0.05或P<0.01)。与正常人宫颈上皮细胞ende1617相比,宫颈癌细胞中LINC00958水平均显著升高(P<0.01或P<0.001)。shLINC00958组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力均显著低于shNC组(P<0.05、P<0.01或P<0.001),LINC00958组Caski细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促HLEC淋巴管形成能力显著高于CMV组(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。通过RNA下拉、RNA免疫沉淀实验发现宫颈癌细胞中LINC00958能够特异性结合VEGF-C。LINC00958+shVEGF-C组Caski细胞的增殖、迁移、侵袭能力及其培养上清液的促淋巴管形成能力显著低于LINC00958组(P<0.01或P<0.001);在小鼠腘淋巴结转移模型中,LINC00958+shVEGF-C组中小鼠腘窝淋巴结的体积和VEGF-C蛋白、N-cadherin蛋白以及LYVE-1的阳性细胞比例均显著低于LINC00958组(均P<0.001)。结论:LINC00958通过直接与VEGF-C蛋白相互作用增强宫颈癌细胞的增殖、侵袭、淋巴管生成能力,促进小鼠腘淋巴结转移模型的淋巴结转移。 展开更多
关键词 LINC00958 血管内皮生长因子C 宫颈癌 caski细胞 SIHA细胞 淋巴管形成 淋巴结转移
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C-藻蓝蛋白抑制TGF-β1诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化 被引量:5
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作者 姬欢欢 董晓雷 +5 位作者 朱峰 刘国祥 韩晶晶 杨方浩 杨一凡 李冰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期129-134,共6页
目的:探究C-藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)对转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法:根据处理方法不同将Caski细胞分... 目的:探究C-藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)对转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法:根据处理方法不同将Caski细胞分为3组即10 ng/ml TGF-β1处理组、10 ng/ml TGF-β1+300μg/ml C-PC共处理组和对照组(未加药处理),处理24 h后观察细胞的形态变化;采用划痕实验及Transwell实验分别检测TGF-β1和C-PC对Caski细胞迁移和侵袭的影响;Western blotting方法检测C-PC对TGF-β1诱导的Caski细胞上皮表型标志蛋白E-cadherin、间质表型标志蛋白N-cadherin表达水平的影响;qPCR法检测间质表型相关锌指转录因子Snail、Zeb1、Twist m RNA的表达。结果:TGF-β1处理组Caski细胞失去原有的上皮表型的特征,而TGF-β1+C-PC共处理组细胞保持正常的上皮表型的特征;TGF-β1处理组Caski细胞的迁移率[(60.0±1.4)%vs(33.5±2.2)%、(40.0±2.8)%,均P<0.05]和侵袭穿膜细胞数[(108.2±6.2)vs(25.2±3.1)、(39.8±5.4)个,均P<0.01]较共处理组和对照组显著升高;与对照组相比,TGF-β1处理组Caski细胞中E-cadherin表达显著降低(P<0.05),Twist、Snail、Zeb1的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),而加入C-PC共处理可逆转上述改变(P<0.05或P<0.01),同时显著降低N-cadherin的蛋白表达水平(均P<0.05)。结论:C-PC处理能够抑制TGF-β1诱导的Caski细胞侵袭转移能力进而影响EMT过程,其机制可能与C-PC处理降低Twist、Snail、Zeb1的mRNA表达有关。 展开更多
关键词 C-藻蓝蛋白 TGF-Β1 宫颈癌 迁移 侵袭 caski细胞
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人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在Caski宫颈癌细胞的表达和定位 被引量:8
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作者 孙美涛 张成桂 +4 位作者 梅雯 杨勇琴 杨泽芳 张晓娟 熊伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期783-788,共6页
目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-1... 目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-14载体中,利用PCR和DNA测序鉴定重组子正确性;并用脂质体法转染至Caski细胞,转染24、32、48 h,采用Western blot法检测MTERF2蛋白水平,通过免疫荧光细胞化学染色观察其亚细胞定位情况。结果经过PCR和DNA测序鉴定,人MTERF2基因可读框正确地插入到真核表达质粒中,大小为1158 bp,表达的蛋白相对分子质量(Mr)为44 000,与预计大小相符。转染p3×FLAG-MTERF2质粒的Caski细胞培养24 h,可检测到目的蛋白表达,该蛋白主要定位于线粒体中。结论在Caski细胞成功表达了MTERF2蛋白并证实其定位于线粒体。 展开更多
关键词 线粒体转录终止因子2(MTERF2) caski宫颈癌细胞 真核表达 蛋白定位
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醌茜素抑制PI3K通路的磷酸化对宫颈癌CaSki细胞凋亡和自噬的影响 被引量:5
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作者 王华斌 干晓琴 +3 位作者 丁勇利 李永文 刘智涛 李玥桦 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第12期1893-1900,共8页
目的探究醌茜素对宫颈癌Caski细胞的作用。方法体外培养人宫颈癌Caski细胞,用不同浓度醌茜素(0、1、4、12μmol/L)的醌茜素培养液对其进行预处理,以5-氟尿嘧啶组(5μmol/L)作为阳性对照。通过BrdU染色检测Cas-ki细胞增殖能力的变化;流... 目的探究醌茜素对宫颈癌Caski细胞的作用。方法体外培养人宫颈癌Caski细胞,用不同浓度醌茜素(0、1、4、12μmol/L)的醌茜素培养液对其进行预处理,以5-氟尿嘧啶组(5μmol/L)作为阳性对照。通过BrdU染色检测Cas-ki细胞增殖能力的变化;流式细胞技术检测Caski细胞凋亡;免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)含量;West-ernblot检测增殖、凋亡、自噬以及PI3K通路磷酸化相关蛋白的表达;注射CaSki细胞构建移植瘤裸鼠模型并进行体内验证。结果与对照组(0μmol/L)相比,4μmol/L和12μmol/L醌茜素处理后的宫颈癌CaSki细胞增殖能力明显减弱,BrdU阳性细胞率明显降低,Ki67蛋白的表达量也显著下降。随着醌茜素浓度增大,宫颈癌CaSki细胞凋亡率和Cleavedcaspase-3的表达量逐渐升高,12μmol/L醌茜素处理组效果最为明显。ATG5的表达量随醌茜素浓度增加而逐渐降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值和p62的表达量逐渐增加,而且4μmol/L和12μmol/L醌茜素处理组与对照相比均具有显著差异。与单独使用自噬抑制剂3-MA处理相比,3-MA和高浓度(12μmol/L)醌茜素联合处理后能明显的逆转3-MA对自噬的抑制作用以及PI3K通路磷酸化的促进作用。体内实验表明,与对照组相比,加药组的瘤体型和重量明显减小,而且其Ki67、ATG5的表达量显著减少,Caspase-3的表达量显著升高,PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化水平明显降低,与体外实验结果一致。结论醌茜素能抑制宫颈癌CaSki细胞增殖、促进其自噬和凋亡,作用机制可能是通过抑制PI3K通路蛋白磷酸化。 展开更多
关键词 醌茜素 宫颈癌caski细胞 自噬 凋亡 PI3K通路的磷酸化
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lncRNA CCAT2对宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响 被引量:3
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作者 王霞 姚玉君 +1 位作者 汤静 李开慧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期640-645,共6页
目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)CCAT2对宫颈癌细胞增殖、周期的影响。方法:采用qPCR法检测3种宫颈癌细胞(HeLa、C-33A和CaSki)中CCAT2的表达水平,选择表达水平最高的细胞进行后续实验。设计合成CCAT2过表达及干扰... 目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)CCAT2对宫颈癌细胞增殖、周期的影响。方法:采用qPCR法检测3种宫颈癌细胞(HeLa、C-33A和CaSki)中CCAT2的表达水平,选择表达水平最高的细胞进行后续实验。设计合成CCAT2过表达及干扰载体,转染细胞后,qPCR检测转染效率。细胞分为5组:对照组、干扰空载(sh-EV)组、过表达空载(overExpEV)组、CCAT2干扰(sh-CCAT2)组和CCAT2过表达(overExp-CCAT2)组,MTT法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,WB法检测细胞中Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)表达水平。结果:在HeLa、C-33A和CaSki 3种细胞系中,选择CCAT2表达水平最高的CaSki细胞为研究对象。CCAT2过表达及干扰载体均成功转入细胞,转染效果明显。与对照组比较,sh-CCAT2组细胞增殖活力显著降低(P<0.01)、G1期细胞比例显著升高(P<0.01),Ki67、Cyclin D1及CDK4表达水平显著降低(均P<0.01);而overExp-CCAT2组与之相反,细胞增殖能力增强,且Ki67、Cyclin D1及CDK4表达水平显著升高(均P<0.01)。结论:CCAT2通过调控细胞增殖及周期相关蛋白的表达,进而影响宫颈癌CaSki细胞的增殖和周期。 展开更多
关键词 长链非编码RNA CCAT2 宫颈癌 caski细胞 细胞增殖 细胞周期
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柞蚕杀菌肽D对宫颈癌细胞株生长的抑制作用 被引量:2
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作者 韩献萍 彭朝晖 +2 位作者 涂冰 杨光彩 吴小兵 《第一军医大学学报》 CSCD 1996年第4期289-291,共3页
用大肠杆菌(Kl2D3l)诱导柞蚕,取其血淋巴,分离纯化出杀菌肽D。研究了不同浓度、不同作用时间的杀菌肽D对3H-TdR参入SiHa细胞的影响。结果显示:在24h内具有促进作用,48h后参入受抑制。由此可见杀菌肽D对... 用大肠杆菌(Kl2D3l)诱导柞蚕,取其血淋巴,分离纯化出杀菌肽D。研究了不同浓度、不同作用时间的杀菌肽D对3H-TdR参入SiHa细胞的影响。结果显示:在24h内具有促进作用,48h后参入受抑制。由此可见杀菌肽D对肿瘤细胞DNA合成具有一种调控抑制作用,而非一般抗肿瘤药物的单纯抑制作用。 展开更多
关键词 杀菌肽D 宫颈癌细胞株 柞蚕 DNA
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野生型p53基因的表达及其对子宫颈癌细胞株的生长抑制作用
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作者 赵健 徐钤 +2 位作者 彭朝晖 吴小兵 杨光彩 《第一军医大学学报》 CSCD 1994年第4期252-256,共5页
构建了可在哺乳动物细胞中表达人p53蛋白的重组质粒p53─pSV2neo,分别转染猴肾细胞株CV─1及人子宫颈癌细胞株SiHa。用PCR法检测出转染细胞中的p53cDNA;用免疫组化ABC法检测出p53蛋白的表达定位... 构建了可在哺乳动物细胞中表达人p53蛋白的重组质粒p53─pSV2neo,分别转染猴肾细胞株CV─1及人子宫颈癌细胞株SiHa。用PCR法检测出转染细胞中的p53cDNA;用免疫组化ABC法检测出p53蛋白的表达定位于细胞核内,用Westernblot检测出转染细胞中存在p53蛋白。结果表明,外源性野生型p53基因的表达可以使SiHa细胞的细胞克隆形成效减少50%,使细胞生长速度降低,但对SiHa细胞的软琼脂克隆形成效无明显影响。提示p53基因的肿瘤抑制作用与野生型p53蛋白的量有关,并且是细胞类型特异性的。 展开更多
关键词 P53基因 宫颈癌 基因表达 野生型 细胞株
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掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用 被引量:8
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作者 李桂玲 归绥琪 +2 位作者 朱德厚 陈松华 叶阳 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期869-872,共4页
目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观... 目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 掌叶半夏 宫颈癌 HELA细胞株 生长抑制 凋亡
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宫颈癌细胞通过分泌TSLP促进自身细胞活力 被引量:4
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作者 谢锋 孟玉菡 +1 位作者 李明清 李大金 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期918-921,共4页
目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSL... 目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSLP受体(TSLPR)的表达水平;再用MTT法分别检测HeLa和CasKi细胞经人重组细胞因子TSLP(1、10和100 ng/ml)处理24、48和72小时后细胞活力的水平变化。结果:HeLa和CasKi细胞均呈时间依赖性分泌TSLP(P<0.01),且HeLa细胞在24和48小时分泌TSLP的水平高于CasKi细胞(P<0.01或P<0.05);HeLa和CasKi细胞TSLPR阳性表达率分别为23.61±1.30和27.07±2.13,前者低于后者(P<0.05);此外,10或100 ng/ml TSLP作用HeLa和CasKi细胞48小时或72小时均能上调其细胞活力(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞可能通过TSLP自分泌作用促进自身的活力,进而利于宫颈癌细胞的生长,因而参与宫颈癌的发病和进展。 展开更多
关键词 胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP) 宫颈癌 HELA caski 细胞活力
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