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小麦中转基因成分PCR与实时荧光PCR的定性检测低限 被引量:1
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作者 白月 栾凤侠 王珣 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期199-205,共7页
为了确定小麦转基因成分PCR和实时荧光PCR方法的定性检测低限,将转基因小麦B73与非转基因小麦(检测外源基因)、小麦与大米(检测内源基因)分别进行质量分数配比后提取DNA用于测定相对检测低限,再将100%转基因小麦B73的DNA进行浓度稀释用... 为了确定小麦转基因成分PCR和实时荧光PCR方法的定性检测低限,将转基因小麦B73与非转基因小麦(检测外源基因)、小麦与大米(检测内源基因)分别进行质量分数配比后提取DNA用于测定相对检测低限,再将100%转基因小麦B73的DNA进行浓度稀释用于测定绝对检测低限,并应用已知的NOS、bar、ubiquitin,ui-dA(GUS)外源基因和Wx012、GAG56 D内源基因的引物和探针对模板DNA分别进行PCR与实时荧光PCR扩增。结果表明,最终确定PCR方法检测小麦转基因成分的相对检测低限为0.1%(质量分数),绝对检测低限为0.5 ng/μL;实时荧光PCR方法的相对检测低限为0.1%(质量分数),绝对检测低限为0.01 ng/μL。所确定的检测低限可满足国家对转基因产品的最低标识要求。 展开更多
关键词 转基因小麦 pcr 实时荧光pcr绝对检测低限 相对检测
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鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 孔刚锐 吴志明 +7 位作者 闫若潜 赵明军 王东方 赵雪丽 闫志玲 程俊贞 陈慧娟 靳利粉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页
据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条... 据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。 展开更多
关键词 致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重实时荧光定量RT—pcr TAQMAN MGB荧光探针 检测 应用
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生理状态下外周血白细胞IL-2基因表达的荧光定量PCR检测 被引量:3
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作者 王茹 陈佩杰 董强刚 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期457-459,475,共4页
目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相... 目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。 展开更多
关键词 外周血白细胞 荧光定量pcr检测 基因表达 生理状态 实时定量pcr方法 IL-2MRNA pcr检测技术 mRNA表达 白细胞介素 健康受试者 绝对定量 定量分析 相关系数 运动员 自发性
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基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum)
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作者 谭英 赵玲敏 +5 位作者 翁齐彪 黄力行 鄢庆枇 黄将远 白月 郑江 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期942-950,共9页
鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配... 鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配体为模板,进行SYBR Green I实时荧光定量PCR(qPCR)扩增,通过Ct值来定量检测鳗弧菌的浓度,从而建立了鳗弧菌的适配体-qPCR定量检测方法。从特异性、标准曲线、灵敏度、重复性和应用效果对该方法进行分析,表明该方法具有很强的特异性,能特异性地扩增鳗弧菌,且对哈维氏弧菌、溶藻弧菌、变形假单胞菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌均无扩增;在10^(3)~10^(11) CFU/L的检测范围内有较好的线性关系,可用于鳗弧菌的定量检测;同时,该方法有较高的灵敏度和稳定性,其最低检测限为10^(3) CFU/L,组内和组间变异系数分别小于0.17%和1.98%;最后采用该方法对鱼体组织样品进行了应用检测,证明了该方法具有较好的可行性和应用性,可用于水产品或食品中鳗弧菌的定量检测。 展开更多
关键词 鳗弧菌 核酸适配体 实时荧光定量pcr 检测
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慢性乙型肝炎低病毒血症相关研究进展 被引量:4
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作者 盛梦娇 刘敏 +1 位作者 张玉亭 耿嘉蔚 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期501-503,共3页
乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行,中国作为流行区之一,目前约有7000万~8000万慢性HBV感染者,更加值得注意的是,我国85%以上的肝细胞癌是由慢性HBV感染所致,严重威胁国民健康。随着国家层面的调控,药物可及性增加,越来越多的慢性乙型... 乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行,中国作为流行区之一,目前约有7000万~8000万慢性HBV感染者,更加值得注意的是,我国85%以上的肝细胞癌是由慢性HBV感染所致,严重威胁国民健康。随着国家层面的调控,药物可及性增加,越来越多的慢性乙型肝炎(CHB)患者开始启动抗病毒治疗,然而通过临床实践发现,即使是服用一线核苷(酸)类似物(NA)抗病毒治疗,仍有约20%的患者无法实现完全病毒学应答,维持在低病毒血症状态。 展开更多
关键词 乙型肝炎 慢性 病毒血症 实时荧光pcr检测 抗病毒治疗
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