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荞麦源性成分实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：1
1
作者 王哲贤 张颖 +3 位作者 亢春雨 曹丽霞 檀建新 赵世峰 《粮食与油脂》 北大核心 2024年第2期155-158,162,共5页
为检测荞麦类食品及原料中的荞麦源性成分,根据荞麦品种DW-1核酸序列信息(KY945277.1)设计了荞麦品种特异性引物;以苦荞和甜荞品种基因组为模板,建立了荞麦源性成分的实时荧光PCR(qPCR)的检测方法,并对购自市场的多个粮食产品进行检测,... 为检测荞麦类食品及原料中的荞麦源性成分,根据荞麦品种DW-1核酸序列信息(KY945277.1)设计了荞麦品种特异性引物;以苦荞和甜荞品种基因组为模板,建立了荞麦源性成分的实时荧光PCR(qPCR)的检测方法,并对购自市场的多个粮食产品进行检测,检测结果与商品标识相符方法特异性强、灵敏度高,为食品中荞麦源性成分的检测提供了新思路。 展开更多
关键词 荞麦 实时荧光pcr 真实性 过敏原 检测方法
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鸽腺病毒通用型实时荧光PCR检测方法的建立与应用
2
作者 陈璐 朱明慧 +8 位作者 丁雨 李阳 亓丽红 房立春 蒋文明 王静静 刘华雷 李建亮 于晓慧 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期89-95,共7页
鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAdV)是影响鸽产业健康发展的重要病原之一。为实现PiAdV的高通量快速检测,根据GeneBank登录的PiAdV-A种和PiAdV-B种病毒pⅧ基因序列的共同保守区域设计特异性检测引物和探针,经反应条件优化,建立了一种Pi... 鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAdV)是影响鸽产业健康发展的重要病原之一。为实现PiAdV的高通量快速检测,根据GeneBank登录的PiAdV-A种和PiAdV-B种病毒pⅧ基因序列的共同保守区域设计特异性检测引物和探针,经反应条件优化,建立了一种PiAdV通用型实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验。结果显示:该方法的最佳探针浓度为0.2μmol/L,与鸽群其他常见病毒无交叉反应,对PiAdV的最低检测限为56.9 copies/μL,比常规PCR敏感性高100倍,组内和组间重复变异系数均小于1.8%。利用该方法和常规PCR方法对20份疑似PiAdV感染样品进行检测,发现PiAdV通用型实时荧光PCR检测方法的病毒阳性检出率高于常规PCR方法。结果表明,本研究建立的PiAdV通用型实时荧光PCR检测方法特异性强、敏感性高、可靠性好,可用于PiAdV感染的临床检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 鸽腺病毒 通用型 实时荧光pcr 检测方法
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食品和饲料中火鸡源性成分的实时荧光PCR检测方法 被引量：12
3
作者 张舒亚 谌鸿超 +5 位作者 宋青 高琴 吕蓉 李想 刘月明 李富威 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期207-211,共5页
为对产品真实性提供技术支撑,作者建立了食品和饲料中火鸡源性成分的检测方法。采用TaqMan探针实时荧光PCR方法,对火鸡源性成分特异性、灵敏度进行检测并进行实际应用。实验表明,建立的检测方法具有特异性和高灵敏度,检测限为0.001%。... 为对产品真实性提供技术支撑,作者建立了食品和饲料中火鸡源性成分的检测方法。采用TaqMan探针实时荧光PCR方法,对火鸡源性成分特异性、灵敏度进行检测并进行实际应用。实验表明,建立的检测方法具有特异性和高灵敏度,检测限为0.001%。通过对市售食品和饲料样品的检测,建立的方法适用于食品和饲料中火鸡源性成分的检测。 展开更多
关键词 食品 饲料 火鸡 实时荧光pcr方法 检测
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鸡传染性喉气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：9
4
作者 王楷宬 王素春 +5 位作者 孙亚伟 樊擎莹 康京丽 汪洋 刘华雷 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 2020年第3期98-102,共5页
为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引... 为探索适合临床高通量鸡传染性喉气管炎检测的方法,针对鸡传染性喉气管炎病毒gB基因序列保守区域,筛选1对特异性引物和1条特异性探针,建立了实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性、敏感性评估和临床应用检测。结果显示:筛选出的引物和探针与其他禽类常见病毒无交叉反应,检测下限达到100拷贝/反应;对来自13个场的480份临床样本进行检测,检测出17个阳性样品,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,此方法特异性强,灵敏度高、耗时少,可用于鸡传染性喉气管炎的快速检测。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 实时荧光pcr检测 方法建立 应用
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转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：8
5
作者 刘欣 张国丛 +2 位作者 周兴虎 祝长青 黄明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第4期193-197,共5页
为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和Taq Man探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进... 为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和Taq Man探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果显示:建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法能扩增出127 bp的产物,特异性强,灵敏度达到0.1%,约为40个单倍体基因组拷贝,检测重复性好,可成功应用于实际样品检测。因此,建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法可以应用于转基因大豆MON89788大豆及其制品的检测。 展开更多
关键词 转基因大豆 MON89788品系 实时荧光pcr 品系特异性检测 转基因标识
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植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法 被引量：1
6
作者 孙凯 魏霜 +5 位作者 刘玉莉 许如苏 刘中勇 鄞杰平 袁俊杰 吴希阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期178-183,共6页
根据已报道的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的23S rRNA基因保守序列,设计用于检测植物乳杆菌的特异性DPO（dual priming oligonucleotide）引物,结合SYBR GreenⅠ实时荧光PCR技术,建立植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法... 根据已报道的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的23S rRNA基因保守序列,设计用于检测植物乳杆菌的特异性DPO（dual priming oligonucleotide）引物,结合SYBR GreenⅠ实时荧光PCR技术,建立植物乳杆菌的DPO引物实时荧光PCR检测方法,对其特异性和灵敏度进行了评价,并将建立的检测方法用于实际样品的检测中。结果显示,该方法对2株植物乳杆菌能得到阳性扩增,其余11株乳酸菌及阴性对照没有扩增曲线,灵敏度高达0.001 ng/μL,而且在退火温度为50~60℃范围内不影响其特异性,表明该方法对退火温度不敏感;用微生物菌制剂和酸奶共13种益生菌产品进行了验证,检出情况与产品标识一致。因此,该研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR能够快速、准确、高效地检测微生物菌制剂及其他益生菌产品中的植物乳杆菌。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 实时荧光pcr DPO引物 检测
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NDM-1基因新型染料EverGreen实时荧光PCR检测方法的建立
7
作者 吴兴海 赵立青 +4 位作者 魏晓棠 魏秋月 肖西志 封立平 厉艳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第3期-,共5页
研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据超级细菌NDM-1序列,设计并合成了检测引物(ND-E-F和ND-E-R),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了EVERGREEN实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板... 研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据超级细菌NDM-1序列,设计并合成了检测引物(ND-E-F和ND-E-R),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了EVERGREEN实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出10fg/μL质粒DNA模板。研究表明,EverGreen实时荧光PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。 展开更多
关键词 NDM-1 EverGreen实时荧光pcr 检测
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NDM-1基因TaqMAN实时荧光PCR检测方法的建立
8
作者 吴兴海 张云霞 +4 位作者 姜英辉 邓明俊 孟怡 雷质文 蒋丹 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第3期-,共5页
研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据NDM-1序列,设计并合成了PCR检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA... 研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法。研究根据NDM-1序列,设计并合成了PCR检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光PCR检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出10fg/μL质粒DNA模板。研究表明,TaqMAN实时荧光PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。 展开更多
关键词 NDM-1 TaqMAN实时荧光pcr 检测
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抗CMV转基因辣椒实时荧光PCR检测方法研究
9
作者 罗阿东 王丽平 +2 位作者 任艳玲 蔡秋 王艳 《现代农业科技》 2019年第5期67-69,共3页
针对辣椒中转基因成分建立快速、高效、准确的实时荧光PCR检测方法,以缩短检测周期,提高检出率。结果表明,针对转基因辣椒的内源基因CaATL1和外源基因CMV建立的检测方法,具有很好的特异性,二者检测灵敏度均可达0.01%。本研究建立的检测... 针对辣椒中转基因成分建立快速、高效、准确的实时荧光PCR检测方法,以缩短检测周期,提高检出率。结果表明,针对转基因辣椒的内源基因CaATL1和外源基因CMV建立的检测方法,具有很好的特异性,二者检测灵敏度均可达0.01%。本研究建立的检测方法特异性、灵敏度和准确度高,也比较方便快速,同时使用的是全部闭管操作,大大降低了普通PCR带来的污染,为转基因辣椒的检测提供了新的检验方法。 展开更多
关键词 转基因辣椒 实时荧光pcr检测方法 CaATL1基因 CMV基因
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粮食中主要霉菌实时荧光PCR检测方法建立 被引量：4
10
作者 冯优妍 杨爱馥 +2 位作者 郑秋月 万超 曹际娟 《粮食与饲料工业》 CAS 2020年第4期1-3,9,共4页
建立TaqMan实时荧光PCR快速检测粮食霉变主要霉菌的方法。根据引发粮食霉变的霉菌属5.8S rDNA的ITS序列来设计通用引物和探针,一次实时荧光PCR扩增同时检测黄曲霉和寄生曲霉,与SN/T 2582-2010中普通PCR方法进行比较,验证方法的特异性和... 建立TaqMan实时荧光PCR快速检测粮食霉变主要霉菌的方法。根据引发粮食霉变的霉菌属5.8S rDNA的ITS序列来设计通用引物和探针,一次实时荧光PCR扩增同时检测黄曲霉和寄生曲霉,与SN/T 2582-2010中普通PCR方法进行比较,验证方法的特异性和灵敏度;通过建立粮食霉变模型并进行霉菌检测,进一步验证方法的准确性。结果表明,所设计的实时荧光PCR引物探针具有良好的特异性和灵敏性,灵敏度达到10-2 ng/μl。所建立的实时荧光PCR快速检测粮食主要霉菌的方法,快速简便准确,适用于引发粮食霉变的黄曲霉和寄生曲霉的检测。 展开更多
关键词 实时荧光pcr 粮食霉变 检测 黄曲霉 寄生曲霉 特异性 灵敏度
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低温乳制品中沙门氏菌实时荧光PCR检测方法体系的建立 被引量：3
11
作者 陶文靖 赵婷婷 +5 位作者 王琦 董彬 王玉花 王维嘉 刘赫东 曲连海 《食品安全导刊》 2022年第19期71-76,共6页
低温乳制品保质期短,对运输、储存条件要求较高,如果储存温度未达到要求,就会增加微生物增殖的风险。沙门氏菌作为乳制品必检项目需要重点关注,但现有国家标准检测方法操作较烦琐,耗时长,无法满足快速检测需求;国内现行有效的沙门氏菌... 低温乳制品保质期短,对运输、储存条件要求较高,如果储存温度未达到要求,就会增加微生物增殖的风险。沙门氏菌作为乳制品必检项目需要重点关注,但现有国家标准检测方法操作较烦琐,耗时长,无法满足快速检测需求;国内现行有效的沙门氏菌实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)行业标准方法,操作环节复杂,对人员操作要求较高。本研究通过优化增菌培养基以及实时荧光PCR方法,建立了一套更严格、简单、适合企业操作的沙门氏菌实时荧光PCR方法体系,并经过科学的验证评价,以满足低温乳制品生产加工过程及终产品快速放行、及时纠偏的需求,提高致病菌检测技术能力,降低食品安全风险。 展开更多
关键词 低温乳制品 沙门氏菌 实时荧光pcr 方法评价
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显微镜与实时荧光PCR检测方法在马蹄淀粉鉴定中的应用 被引量：3
12
作者 陈展册 杜智欣 +2 位作者 高佳 刘军义 罗兆飞 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期90-95,共6页
采用光学生物显微镜观测结合实时荧光PCR检测方法对马蹄淀粉中掺杂行为进行定性鉴别,以期为鉴别淀粉掺杂成分提供更客观、更准确的检测手段。结果显示:32个随意掺杂的马蹄淀粉样品中8个是纯马蹄淀粉,5个是纯木薯淀粉,1个是纯玉米淀粉,3... 采用光学生物显微镜观测结合实时荧光PCR检测方法对马蹄淀粉中掺杂行为进行定性鉴别,以期为鉴别淀粉掺杂成分提供更客观、更准确的检测手段。结果显示:32个随意掺杂的马蹄淀粉样品中8个是纯马蹄淀粉,5个是纯木薯淀粉,1个是纯玉米淀粉,3个是纯马铃薯淀粉,3个是马蹄淀粉和马铃薯淀粉的混合物,1个是马蹄淀粉和木薯淀粉的混合物,1个是马蹄淀粉和玉米淀粉的混合物,5个是木薯和玉米淀粉的混合物,3个是木薯淀粉和马铃薯淀粉的混合物,2个是木薯淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉的混合物。32个样品显微镜镜检结果和PCR检测结果基本吻合。两种方法可为国内淀粉市场质量监督提供有效的检测方法。 展开更多
关键词 镜检法 实时荧光pcr检测法 马蹄淀粉 检测 掺杂
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肉制品中鸭源性成分TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：2
13
作者 刘立兵 陈敏娜 +6 位作者 付琦 项佳林 王金凤 苗丽 孙晓霞 艾连峰 王建昌 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第8期3048-3054,共7页
目的建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法。方法以鸭生长激素(growthhormone,GH)基因为靶基因,基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针,优化反应体系和反应条件,建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-timeP... 目的建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法。方法以鸭生长激素(growthhormone,GH)基因为靶基因,基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针,优化反应体系和反应条件,建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-timePCR)检测方法。结果所建立的real-timePCR方法特异性强,仅对鸭基因组DNA出现特异性扩增曲线,对牛、羊、猪等其他异源性动物基因组DNA均无扩增曲线;灵敏性高,以鸭基因组DNA为模板,检出限为1.0 pg;重复性好,不同浓度基因组DNA测定的Ct值变异系数小于4%。使用建立的real-time PCR方法对200份市售肉制品进行检测,在11份肉制品中检出鸭源性成分,同现行行业标准SN/T3731.5—2013检测结果一致。结论本研究所建立的real-timePCR方法检测具有特异性强、敏感性高、快速高效等特点,适用于肉制品中鸭源性成分快速检测。 展开更多
关键词 鸭源性成分 生长激素基因 实时荧光pcr 快速检测
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恙虫病东方体与莫氏立克次体双重实时荧光PCR检测方法建立及其在鼠类检测中的应用 被引量：3
14
作者 高玉峰 孔文 +3 位作者 罗佳 程晓兰 王萍 米伟惠 《口岸卫生控制》 2019年第1期55-60,共6页
目的建立一种基于TaqMan-MGB探针技术的双重实时荧光PCR检测方法,用于鼠类携带恙虫病东方体和莫氏立克次体的检测工作开展。方法依据恙虫病东方体56-kDa蛋白基因序列设计恙虫病东方体引物及Taqman-MGB探针,参照文献合成莫氏立克次体引物... 目的建立一种基于TaqMan-MGB探针技术的双重实时荧光PCR检测方法,用于鼠类携带恙虫病东方体和莫氏立克次体的检测工作开展。方法依据恙虫病东方体56-kDa蛋白基因序列设计恙虫病东方体引物及Taqman-MGB探针,参照文献合成莫氏立克次体引物及Taqman-MGB探针,建立恙虫病东方体及莫氏立克次体双重实时荧光PCR检测方法。结果利用本文建立的双重实时荧光PCR检测方法对288份鼠肺脏组织样品进行检测,检测结果与普通PCR检测结果一致。结论本文建立的双重实时荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、敏感性及重复性,满足国境口岸鼠类携带恙虫病东方体及莫氏立克次体的监测检测工作需要。 展开更多
关键词 双重实时荧光pcr 恙虫病东方体莫氏立克次体检测
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基于ITS序列的菊花花枯病实时荧光PCR检测方法 被引量：1
15
作者 陈吴健 张明哲 +5 位作者 林晓佳 吴蓉 吴志毅 陈曦 武扬 吴旭耀 《浙江农业科学》 2014年第11期1695-1698,共4页
根据菊花花枯病菌与其近似种在ITS序列上的差异,构建特异性引物和探针,并用菊花上常见的病害及其近似种进行验证。结果表明,供试菌株中仅菊花花枯病菌表现出阳性扩增信号,其他菌株和空白对照均未检测到荧光信号。该法可检测到100 fg的阳... 根据菊花花枯病菌与其近似种在ITS序列上的差异,构建特异性引物和探针,并用菊花上常见的病害及其近似种进行验证。结果表明,供试菌株中仅菊花花枯病菌表现出阳性扩增信号,其他菌株和空白对照均未检测到荧光信号。该法可检测到100 fg的阳性DNA,完成整个检测只需约2 h,可快速、灵敏地完成进出境菊花产品中菊花花枯病菌的检测。 展开更多
关键词 菊花花枯病 实时荧光pcr 特异性检测
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茶叶中掺杂大米成分实时荧光PCR检测方法的建立和应用
16
作者 黄迎波 黄才新 +2 位作者 江杰 袁小雅 朱金国 《安徽农业科学》 CAS 2022年第20期174-176,共3页
为探索茶叶中掺杂大米的快速检测方法,根据大米内源PLD基因建立茶叶掺杂大米成分的实时荧光PCR检测方法。通过对样品前处理、方法特异性、方法灵敏度、污染因素的分析,认为该方法用于检测茶叶中掺杂大米成分可以达到理想效果,操作简便,... 为探索茶叶中掺杂大米的快速检测方法,根据大米内源PLD基因建立茶叶掺杂大米成分的实时荧光PCR检测方法。通过对样品前处理、方法特异性、方法灵敏度、污染因素的分析,认为该方法用于检测茶叶中掺杂大米成分可以达到理想效果,操作简便,检测结果可靠性高,重复性好,结果判读直观无污染。利用所建立的方法对36份茶叶样品进行分析,发现6批次产品一定程度上掺杂了大米成分。 展开更多
关键词 茶叶 大米 PLD基因 实时荧光pcr 检测方法
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肉制品中大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光PCR检测方法的研究
17
作者 杨滴 《食品安全导刊》 2023年第19期95-98,共4页
以大肠埃希氏菌O157:H7菌体抗原基因rfbE基因为靶标,设计特异性引物和探针,建立大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光PCR检测方法。对方法的特异性与灵敏性研究,并选取市售的10种肉类制品验证方法可行性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和... 以大肠埃希氏菌O157:H7菌体抗原基因rfbE基因为靶标,设计特异性引物和探针,建立大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光PCR检测方法。对方法的特异性与灵敏性研究,并选取市售的10种肉类制品验证方法可行性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和灵敏性,具有很好的研究价值和应用前景。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌O157:H7 实时荧光pcr 检测
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基于实时荧光PCR的鱼肉制品中帝王鲑、银鲑、粉鲑源成分的快速检测及定量研究
18
作者 李杰 赵玉强 +3 位作者 刘艳飞 沙玉彪 刘应炜 钱云开 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第4期319-326,共8页
建立一种利用实时荧光PCR技术快速检测帝王鲑、银鲑和粉鲑源性成分的方法。根据帝王鲑和银鲑的线粒体cytb基因序列以及粉鲑的COI基因序列设计Taq Man引物和探针组合,通过优化扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增,达到快速检测帝王鲑、银鲑... 建立一种利用实时荧光PCR技术快速检测帝王鲑、银鲑和粉鲑源性成分的方法。根据帝王鲑和银鲑的线粒体cytb基因序列以及粉鲑的COI基因序列设计Taq Man引物和探针组合,通过优化扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增,达到快速检测帝王鲑、银鲑和粉鲑源性成分的目的。该方法特异性良好,耗时短,反应只需1 h;帝王鲑的基因组DNA灵敏度可达到10-1 ng;在与罗非鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到0.1%,质量分数误差≤±5.0%;银鲑的基因组DNA灵敏度可达到1 ng;在与罗非鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到1%,质量分数误差≤±7.7%;粉鲑的基因组DNA灵敏度可达到1 ng;在与罗非鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到1%,质量分数误差≤±2.8%。该方法检测特异性强、所需时间短、灵敏度高、质量分数误差小,可满足帝王鲑、银鲑和粉鲑真伪鉴别和定量分析的要求。 展开更多
关键词 三文鱼 帝王鲑 银鲑 粉鲑 实时荧光pcr 检测 真伪鉴别
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帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：1
19
作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量RT-pcr 检测方法
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副结核分支杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
20
作者 平宇明 张宏莉 +8 位作者 班亚星 刘建奇 任希恩 邬彩丽 刘东霞 徐丽媛 杨雪娇 常华 李劼 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期1-6,共6页
为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏... 为加强副结核分支杆菌(MAP)的检测、监测与防控,建立MAP荧光定量PCR(qPCR)检测方法,根据国内MAP流行菌株特异性插入序列IS900设计1对特异性引物和探针,构建重组阳性质粒用作建立qPCR的模板,优化反应体系和条件,验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最低检测限为5拷贝/μL;重复试验中批内和批间变异系数均小于4%;与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛支原体、肺炎克雷伯菌和曼氏杆菌等病原检测无交叉反应,能特异性检出MAP。应用建立的qPCR开展了内蒙古自治区6个市的MAP临床样品检测和流行情况分析,结果显示MAP平均阳性率为0.85%(6/704)。结果表明,成功建立了MAP的实时荧光定量PCR检测方法,可用于临床中MAP的监测和调查,为MAP疾病诊断与监控提供了快捷的方法。 展开更多
关键词 副结核分支杆菌 实时荧光定量pcr 检测方法 感染调查
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