基于实时荧光PCR技术检测葛根粉中植物源性成分

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作者 张伊动 刘艳 +6 位作者 李诗瑶 朱必婷 张涛 林津 陈曦 朱力杰 张莉 《中南农业科技》 2024年第9期29-35,共7页

基于实时荧光PCR技术(Real-time fluorescence PCR,RT-PCR),利用不同种属植物之间基因组序列的差异,设计葛根、甘薯、马铃薯、玉米、薯蓣、木薯和豌豆7种典型含淀粉植物的特异性引物及探针,建立葛根粉中植物源性成分检测的RT-PCR检测方... 基于实时荧光PCR技术(Real-time fluorescence PCR,RT-PCR),利用不同种属植物之间基因组序列的差异,设计葛根、甘薯、马铃薯、玉米、薯蓣、木薯和豌豆7种典型含淀粉植物的特异性引物及探针,建立葛根粉中植物源性成分检测的RT-PCR检测方法。通过对豆薯、甘薯、大麦、小麦、黑麦、荞麦、菜豆等27种产品进行引物探针的特异性扩增,验证该方法的特异性,并检测7种引物探针的绝对灵敏度和相对灵敏度。结果表明,葛根、甘薯、木薯、玉米、豌豆成分检出的绝对灵敏度最低可达0.010 ng/μL,薯蓣和马铃薯的绝对灵敏度为0.001 ng/μL;7种引物探针的相对灵敏度低至0.1%(质量分数)。针对葛根粉掺假严重的状况,对市面上流通的40种葛根粉产品进行植物源性成分检测,其中25份样品不含葛根源性成分,占样品总数的62.5%;含葛根的15份样品中有5份样品掺有其他非葛根源性成分,占样品总数的12.5%。所检测到的非葛根源性成分以木薯和玉米居多,豌豆、薯蓣等也有检出。 展开更多

关键词 实时荧光pcr技术 葛根粉 植物源性成分 特异性 灵敏度

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EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究 被引量：8

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作者 张俊彦 梅玲玲 +6 位作者 徐昌平 占利 陈鸿鹄 张云怡 陈建才 张政 杨勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1007-1012,共6页

目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌... 目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 活菌 叠氮溴化乙锭(EMA) 实时荧光pcr技术

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实时荧光PCR技术在动物疫病诊断中的运用 被引量：2

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作者 韩笑 《中国畜禽种业》 2019年第5期40-40,共1页

实时荧光PCR技术不再局限于一般的动物疫病诊断,还逐步推广到病毒性、寄生虫性疫病中,不仅能发挥常规的PCR技术技术优势,还能实现定量分析,这是以往PCR技术诊断所无法达到的效果。且随着荧光PCR试剂盒的开发与推广,实施荧光技术在动物... 实时荧光PCR技术不再局限于一般的动物疫病诊断,还逐步推广到病毒性、寄生虫性疫病中,不仅能发挥常规的PCR技术技术优势,还能实现定量分析,这是以往PCR技术诊断所无法达到的效果。且随着荧光PCR试剂盒的开发与推广,实施荧光技术在动物疫病诊断中的应用,不需要再进行PCR后期处理,提高结果诊断的可靠性及重复性,对整个实验过程进行实时监测,缩减了以往的检测时间,备受动物疫病诊断者的青睐和关注。 展开更多

关键词 实时荧光pcr技术 动物疫病诊断 应用

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实时荧光定量PCR技术在水产养殖研究中的应用 被引量：1

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作者 陈向红 何瑜 +2 位作者 郑姣妹 耿相昌 奉佳 《当代水产》 2024年第10期70-72,共3页

实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实现PCR进程的实时监测,进而对未知模板进行定量分析的一种检测技术。qPCR是在普通PCR定性检测基础上发展而来的核酸定量技术。在q... 实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实现PCR进程的实时监测,进而对未知模板进行定量分析的一种检测技术。qPCR是在普通PCR定性检测基础上发展而来的核酸定量技术。在qPCR技术发展的过程中,两项重要发现起到了关键作用:一是TaqDNA聚合酶的5’端核酸外切酶活性被发现,它能降解特异性荧光标记的探针,使得间接定量检测PCR产物成为可能;二是荧光双标记探针被使用在密闭的反应管中,能实时地监测PCR反应的全过程。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 核酸外切酶 定性检测 水产养殖 荧光基团 TAQDNA聚合酶 荧光信号 荧光标记

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实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立 被引量：55

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作者 陈颖 徐宝梁 +3 位作者 苏宁 王媛 王丙武 葛毅强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期65-69,共5页

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <... 采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 检测 转基因大豆 内源基因Lectin 外源基因NEPSPS

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实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究 被引量：43

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作者 陈颖 徐宝梁 +2 位作者 苏宁 葛毅强 王曙光 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期602-607,共6页

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法... 采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于 0 .0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 转基因玉米 定量检测 食品安全

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实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用 被引量：86

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作者 袁亚男 刘文忠 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期27-30,共4页

实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用... 实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 荧光共振能量转移 荧光探针 淬灭探针

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实时荧光定量PCR技术在植物中的应用 被引量：10

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作者 崔颖 王秀娟 +1 位作者 高山 王国泽 《湖北农业科学》 2015年第13期3073-3077,共5页

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术实现了PCR从定性到定量的转变。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分... 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术实现了PCR从定性到定量的转变。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分类及优缺点,综述了近年来实时荧光定量PCR技术在植物中的应用概况及其研究进展,旨在为该技术的进一步开发应用提供理论参考。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 原理 内参基因 植物抗逆性 转基因产品

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实时荧光定量PCR技术在植物检疫中应用的研究进展 被引量：12

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作者 黄海泉 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第1期5-8,共4页

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。近年来,实时荧光定量PCR技术在植... 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。近年来,实时荧光定量PCR技术在植物检疫研究上不断深入,大大提高了植物疫情的检测效率和监测防治水平。综合论述了实时荧光定量PCR技术在由真菌、细菌、病毒和线虫引发的植物疫情的检测与应用。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 植物检疫 植物病害

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实时荧光定量PCR技术的应用及研究进展 被引量：10

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作者 李萌 李雪 郑志强 《饲料博览》 2018年第7期94-94,共1页

实时荧光定量简称PCR。该技术以PCR技术为基础进行改进得到的更加快速、灵敏、特异的核算定量技术,有着光谱高敏感性以及定量精确等特点,可以对PCR中荧光信号变化进行直接探测,从而得到定量结果。为进一步加强对该技术研究及应用,本文... 实时荧光定量简称PCR。该技术以PCR技术为基础进行改进得到的更加快速、灵敏、特异的核算定量技术,有着光谱高敏感性以及定量精确等特点,可以对PCR中荧光信号变化进行直接探测,从而得到定量结果。为进一步加强对该技术研究及应用,本文将针对其原理、特点及应用前景进行探讨。1原理Ct是荧光定量PCR技术中重要的一个值,代表着每个反应管内荧光信号在达到设定阈值过程中所需要经历循环数。在进行荧光定量PCR反应中需要加入特定波长的荧光染料或者基团,然后通过仪器对荧光物质进行监测,得到其积累信号即为PCR反应进程,从而定量定性分析起始模板。PCR反应产物随着PCR反应的进行而不断积累,同时荧光信号强度也会不断呈正比增加。荧光强度信号随着每个循环的完成而不断收集,从而通过荧光强度变化对产物量的变化进行监测,进而将结果绘制成扩增曲线图。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 应用 pcr反应 荧光信号 反应产物 直接探测 荧光染料 荧光物质

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实时荧光定量PCR技术的应用 被引量：4

11

作者 韩惠瑛 石丽瑞 张艳红 《中国畜禽种业》 2014年第3期37-39,共3页

1985年Mullis等发明了聚合酶链反应（PCR）技术，成为20世纪生物医学领域革命性创举，使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。1992年，Higuchi最早提出了实时PCR的设想。

关键词 实时荧光定量pcr技术 应用 聚合酶链反应 实时pcr 医学领域 革命性 生物 核酸

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实时荧光定量PCR技术及其在植物中的应用 被引量：2

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作者 衡静 梁芳芳 于晓莹 《河南农业》 2013年第16期55-56,共2页

阐述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及方法,综述了近几年实时荧光定量PCR技术在转基因植物、植物病害及与植物表皮气孔变化相关激酶检测过程中的运用情况;展望了实时荧光定量PCR反应在植物核酸定性、定量检测及分析其在植物中的应用... 阐述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及方法,综述了近几年实时荧光定量PCR技术在转基因植物、植物病害及与植物表皮气孔变化相关激酶检测过程中的运用情况;展望了实时荧光定量PCR反应在植物核酸定性、定量检测及分析其在植物中的应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 植物 应用

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荧光定量PCR技术在猪病防治中的应用 被引量：1

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作者 刘彩云 王冬娟 《中国畜牧业》 2024年第7期47-48,共2页

生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和... 生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和防治现状猪病预防成效能直接影响养殖效益,在我国农村有大量的个体户进行生猪养殖,但个体农户往往缺乏足够的养殖经验,文化水平普遍偏低. 展开更多

关键词 疾病预防工作 实时荧光定量pcr技术 猪病防治 养殖经验 个体农户 生猪养殖 养殖效益

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应用实时荧光定量PCR技术对一例猪瘟的诊断报告 被引量：2

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作者 李霞 《中国动物保健》 2012年第10期61-61,共1页

猪瘟（HogCholera，HC），又称古典猪瘟（Classi—calSwineFever，CSF）是一种高度接触性传染的病毒病，由黄病毒科，瘟病毒属的猪瘟病毒（HCV或CSFV）引起，于1833年首先发现于美国的俄亥俄州。中国是獬攫彩新刊蓟亚重的国家之一，近... 猪瘟（HogCholera，HC），又称古典猪瘟（Classi—calSwineFever，CSF）是一种高度接触性传染的病毒病，由黄病毒科，瘟病毒属的猪瘟病毒（HCV或CSFV）引起，于1833年首先发现于美国的俄亥俄州。中国是獬攫彩新刊蓟亚重的国家之一，近些年因多科疾病歹巴亡生猪占养猪总数的8％～10％，其中1／3由HC致死，每年的直接经济陨失在20亿元人民币左右。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 古典猪瘟 诊断报告 应用 猪瘟病毒 黄病毒科 俄亥俄州 病毒病

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实时荧光PCR定量检测加工产品中转基因玉米Mon810成分 被引量：9

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作者 覃文 曹际娟 朱水芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第8期132-134,共3页

采用实时荧光PCR技术,建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性,特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成... 采用实时荧光PCR技术,建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性,特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成分。某些检测样品不仅检出转基因玉米Mon810成分,还同时检出其它转基因玉米品系或其它转基因品种。本研究实验建立的转基因玉米Mon810品系鉴定检测方法,即可以用于加工产品中转基因成分的定量检测(检测低限为0.1%),也可以用于定性检测,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。 展开更多

关键词 转基因玉米 实时荧光pcr技术 定量检测 食品 饲料 Mon810成分

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实时荧光PCR法特异性检测棉花曲叶病毒 被引量：2

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作者 张卫东 王岚 +6 位作者 冯宇梅 廖力 权永兵 水克娟 徐淼锋 迟远丽 黄永辉 《广东农业科学》 CAS 2015年第2期126-130,136,共6页

根据棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)运动蛋白基因序列特征,设计并合成了特异性Taqman探针和检测引物,建立该病毒的实时荧光PCR快速检测方法。结果表明:该方法可以特异性地从5个不同CLCuV分离物中扩增到荧光信号,而其他6种... 根据棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)运动蛋白基因序列特征,设计并合成了特异性Taqman探针和检测引物,建立该病毒的实时荧光PCR快速检测方法。结果表明:该方法可以特异性地从5个不同CLCuV分离物中扩增到荧光信号,而其他6种病毒均无扩增。建立的方法具有快速、准确、灵敏及简便等特点,可为进出境植物检疫和农业安全生产提供可靠的技术支持。 展开更多

关键词 棉花曲叶病毒(CLCuV) 运动蛋白基因 实时荧光pcr技术

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实时荧光定量PCR技术及应用 被引量：12

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作者 葛忠源 熊东艳 张启勇 《中国牧业通讯》 2008年第13期12-14,共3页

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上发展起来的核酸定量技术，于1996年由美国Applied Biosystems公司推出。当前，实时荧光定量PCR技术应用范围很广，例如，能从粪便材料中分离出的细菌DNA来精确定量检测肠道菌，使我们能详细地分析... 实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上发展起来的核酸定量技术，于1996年由美国Applied Biosystems公司推出。当前，实时荧光定量PCR技术应用范围很广，例如，能从粪便材料中分离出的细菌DNA来精确定量检测肠道菌，使我们能详细地分析肠道中优势菌与荧光原位杂交（FISH）及培养方法检测不到的非优势菌，为理解肠道菌群与机体状况关系提供重要线索。该技术从原理上分为荧光染料检测模式和荧光探针检测模式两方面。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 systems公司 定量检测 荧光原位杂交 肠道菌群 常规pcr 细菌DNA

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基于TaqMan实时荧光PCR检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分 被引量：12

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作者 海小 刘国强 +1 位作者 罗建兴 郭梁 《肉类研究》 北大核心 2018年第4期62-67,共6页

根据出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法?第4部分:驴成分检测?实时荧光PCR法》合成引物和探针,利用Taq Man实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测鲜肉及加工肉制... 根据出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法?第4部分:驴成分检测?实时荧光PCR法》合成引物和探针,利用Taq Man实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行驴源性成分特异性检测,然后对驴源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工肉制品中检测方法的适用性。结果表明:本研究建立的方法特异性强,除驴肉外,牛、羊、猪、马、骆驼、鹿、狗、兔、鸡、鸭、鸽子、鹌鹑12种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,驴组分DNA的检出限可达100 fg/μL,灵敏度可达0.01%;方法的适用性较广,可以用于加工肉制品中驴源性成分的检测。 展开更多

关键词 TaqMan实时荧光pcr技术 鲜肉及加工肉制品 驴源性成分 特异性 灵敏度

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实时荧光定量PCR及其在微生物生态学中的应用 被引量：44

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作者 张晶 张惠文 张成刚 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1445-1450,共6页

定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的。然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情。最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰... 定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的。然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情。最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰度等有了进一步的了解。实时荧光定量PCR技术作为核酸定量检测技术,自从发明以来在微生物生态学研究中逐渐得到了广泛的应用。从微生物生态学角度,综述了实时荧光定量PCR技术的原理、发展、优缺点及其在微生物生态学研究中的应用与研究进展,并探讨了实时荧光定量PCR技术的发展和应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 SYBR Green I 荧光探针 微生物生态学

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荧光定量PCR技术在植物研究中的应用 被引量：29

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作者 马月萍 戴思兰 马艳蓉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期37-45,共9页

荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自问世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛。在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的... 荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自问世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛。在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的研究。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点和试验中潜在问题和条件的优化,并对其在植物研究中的应用及前景作了探讨。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 植物 基因表达

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