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转基因玉米WYN17132转化体特异性实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：1
1
作者 咸若彤 缪青梅 +7 位作者 彭城 陈笑芸 杨蕾 徐晓丽 魏巍 徐俊锋 李玥莹 汪小福 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第7期1397-1406,共10页
WYN17132是我国自主研发的转am79-epsps基因耐草甘膦转基因玉米品种,已获得全国生产应用安全证书,但目前缺少相应的检测方法。为进一步落实我国转基因产品监测工作,本研究建立了针对该转化体特异性的实时荧光PCR检测方法。以转基因玉米W... WYN17132是我国自主研发的转am79-epsps基因耐草甘膦转基因玉米品种,已获得全国生产应用安全证书,但目前缺少相应的检测方法。为进一步落实我国转基因产品监测工作,本研究建立了针对该转化体特异性的实时荧光PCR检测方法。以转基因玉米WYN17132的外源插入序列与玉米基因组连接区域的侧翼序列为靶序列,设计多组特异性引物探针,筛选最佳引物探针组合,并系统评价该方法的特异性、检出限(LOD)和再现性。通过筛选,确定17132RB-qF3/qR3/qP3为最佳引物探针组合,该组合扩增片段为132 bp。本研究建立的WYN17132转化体特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,仅对目标转化体产生特异性扩增;方法灵敏度高,检出限可达0.05%;再现性稳定,适用性强。该检测方法能满足转基因玉米WYN17132的检测需求,为我国转基因玉米的监测监管和标识溯源提供了技术支撑。 展开更多
关键词 转基因玉米WYN17132 转化体特异性 实时荧光pcr
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四环素耐药基因tetM实时荧光PCR检测方法的建立
2
作者 郭建峰 姜展樾 +5 位作者 王成然 马丽侠 易艳 蒋子敬 周李华 唐仁勇 《中国测试》 北大核心 2025年第S1期121-126,136,共7页
为快速准确检测四环素类抗生素耐药基因tetM,以tetM基因的保守序列为靶标序列,建立实时荧光PCR方法。筛选tetM基因特异性靶标序列,设计上下游引物和TaqMan荧光探针,优化20μL反应体系为(上下游引物和探针各终浓度为200 nmol·L^(-1)... 为快速准确检测四环素类抗生素耐药基因tetM,以tetM基因的保守序列为靶标序列,建立实时荧光PCR方法。筛选tetM基因特异性靶标序列,设计上下游引物和TaqMan荧光探针,优化20μL反应体系为(上下游引物和探针各终浓度为200 nmol·L^(-1)、MIX 10μL、ddH_(2)O 6.8μL),建立相关系数为0.9990的标准曲线,确定检出限为10 copies·μL^(-1),验证方法的特异性和重复性。结果表明,本研究所建立方法具有良好的线性关系、灵敏度高、特异性强,方法操作简便,耗时较短,可用于四环素耐药基因tetM的快速检测,也为其他抗生素耐药基因的检测提供方法参考,对耐药细菌污染治理以及保障公共卫生安全具有重要意义。 展开更多
关键词 耐药基因检测 四环素 实时荧光pcr 新污染物治理
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基于实时荧光PCR的鱼肉制品中帝王鲑、银鲑、粉鲑源成分的快速检测及定量研究 被引量：4
3
作者 李杰 赵玉强 +3 位作者 刘艳飞 沙玉彪 刘应炜 钱云开 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第4期319-326,共8页
建立一种利用实时荧光PCR技术快速检测帝王鲑、银鲑和粉鲑源性成分的方法。根据帝王鲑和银鲑的线粒体cytb基因序列以及粉鲑的COI基因序列设计Taq Man引物和探针组合,通过优化扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增,达到快速检测帝王鲑、银鲑... 建立一种利用实时荧光PCR技术快速检测帝王鲑、银鲑和粉鲑源性成分的方法。根据帝王鲑和银鲑的线粒体cytb基因序列以及粉鲑的COI基因序列设计Taq Man引物和探针组合,通过优化扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增,达到快速检测帝王鲑、银鲑和粉鲑源性成分的目的。该方法特异性良好,耗时短,反应只需1 h;帝王鲑的基因组DNA灵敏度可达到10-1 ng;在与罗非鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到0.1%,质量分数误差≤±5.0%;银鲑的基因组DNA灵敏度可达到1 ng;在与罗非鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到1%,质量分数误差≤±7.7%;粉鲑的基因组DNA灵敏度可达到1 ng;在与罗非鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到1%,质量分数误差≤±2.8%。该方法检测特异性强、所需时间短、灵敏度高、质量分数误差小,可满足帝王鲑、银鲑和粉鲑真伪鉴别和定量分析的要求。 展开更多
关键词 三文鱼 帝王鲑 银鲑 粉鲑 实时荧光pcr 检测 真伪鉴别
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基于TaqMan探针多重实时荧光PCR快速检测大豆检疫性病原菌
4
作者 李辉 付海滨 +4 位作者 李雪梅 薛腾 张学梅 薛春生 李鑫 《植物保护》 北大核心 2025年第6期245-254,共10页
为实现进口大豆中检疫性病原菌的精准、快速检测,减少外来有害生物入侵风险,本研究以大豆南方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.meridionalis、大豆北方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.caulivora和大豆茎褐腐病菌Cadophora gr... 为实现进口大豆中检疫性病原菌的精准、快速检测,减少外来有害生物入侵风险,本研究以大豆南方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.meridionalis、大豆北方茎溃疡病菌Diaporthe phaseolorum var.caulivora和大豆茎褐腐病菌Cadophora gregata 3种常见检疫性病原菌为研究对象,以翻译延长因子1α基因(TEF1α)和β-微管蛋白基因(TUB2)为靶标设计特异性引物与TaqMan探针,构建可快速检测3种病菌的TaqMan探针多重qPCR检测体系。研究结果表明,3种病原菌DNA样品等浓度混合时,TaqMan探针多重qPCR体系内各组引物探针对目标菌株均能特异性扩增,未出现交叉反应,最低检测浓度为10.0 pg/μL,在检测范围内R2均大于0.99,且重复性较好,3种病原菌的TaqMan探针多重与单重qPCR检测体系定量线性范围几乎一致。本研究构建的检测方法能够高效、精准地完成进口大豆中3种常见检疫性病原菌的检疫鉴定与疫情监测工作,可为口岸外来有害生物防控工作开展、我国生态安全保障提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 多重实时荧光pcr 检测 大豆 检疫性病原菌
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沙门氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立
5
作者 张晓倩 陈林军 +9 位作者 郝静云 焦迪 延涵 崔强 王海艳 罗小平 李军燕 靳木子 王瑞 赵治国 《中国动物检疫》 2025年第11期71-76,共6页
沙门氏菌病是一种常见的人兽共患病,对人类健康和养殖业发展造成危害。为建立一种特异、灵敏的沙门氏菌检测方法,根据沙门氏菌fimY基因保守区域设计特异性引物,通过对反应体系和条件进行优化建立了沙门氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法... 沙门氏菌病是一种常见的人兽共患病,对人类健康和养殖业发展造成危害。为建立一种特异、灵敏的沙门氏菌检测方法,根据沙门氏菌fimY基因保守区域设计特异性引物,通过对反应体系和条件进行优化建立了沙门氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证。结果显示:该方法与其他病原无交叉反应,最低检测限为4.47×10~1 copies/μL,组内和组间试验变异系数均小于1.5%,临床样品检测结果与普通PCR方法的符合率为97.78%。结果表明,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,为沙门氏菌病的流行病学调查和筛查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 沙门氏菌 fimY基因 实时荧光pcr
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骆驼痘病毒实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：1
6
作者 朱道中 梅明珠 +5 位作者 李明 佟铁铸 王莹 丁宁 徐娟 王春霞 《广东畜牧兽医科技》 2025年第1期46-51,共6页
骆驼痘(Camelpox,CML)是一种广泛流行的骆驼病毒性传染病,它主要发生于中东和东北非的大规模骆驼群,给骆驼产业造成了巨大的经济损失。该研究通过对GenBank中所公布的13个骆驼痘病毒分离株全基因组核苷酸序列进行同源性比较,选取其ATIP... 骆驼痘(Camelpox,CML)是一种广泛流行的骆驼病毒性传染病,它主要发生于中东和东北非的大规模骆驼群,给骆驼产业造成了巨大的经济损失。该研究通过对GenBank中所公布的13个骆驼痘病毒分离株全基因组核苷酸序列进行同源性比较,选取其ATIP基因保守序列,筛选出了一套特异性引物和探针,建立了相应的实时荧光PCR检测方法。结果表明,该方法特异性强、重复性好、灵敏度高,其最低检测限度为7.8 copies/μL。 展开更多
关键词 骆驼痘病毒 实时荧光pcr 方法建立
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基于Taqman-MGB多重实时荧光PCR快速鉴定抗除草剂转基因大豆品系
7
作者 王凤军 王美蓉 +1 位作者 郑如福 陈锦辉 《中国粮油学报》 北大核心 2025年第1期211-219,共9页
通过NCBI比对DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419-2、SOYA 305423转基因大豆的序列同源性,在种属特异性区域设计多重引物和特异性荧光探针,同时提取基因组DNA,对退火温度和引物探针浓度进行优化,确定最佳反应程序,建立同时检测4种转... 通过NCBI比对DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419-2、SOYA 305423转基因大豆的序列同源性,在种属特异性区域设计多重引物和特异性荧光探针,同时提取基因组DNA,对退火温度和引物探针浓度进行优化,确定最佳反应程序,建立同时检测4种转基因大豆的多重实时荧光PCR方法。并对建立的实时荧光PCR反应进行特异性,重复性、灵敏性和适用性等方法学进行验证。结果表明DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419-2、DP305423靶标序列的线性回归方程分别为y=-3.1524x+36.958,y=-3.1689x+38.828,y=-3.469x+37.933和y=-3.4839x+39.644;相关系数R 2分别为0.994、0.997、0.995和0.992;扩增效率分别为107%、106%、94.2%和93.7%,检出限可达9个拷贝,方法特异性强,重现性好,灵敏度高,是一种快速、经济、实用的检测方法,可对转基因大豆品系及其转化体成分进行大批量快速鉴定。 展开更多
关键词 转基因大豆 品系鉴定 多重 实时荧光pcr
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实时荧光PCR检测技术在非洲猪瘟(ASF)防控中的应用
8
作者 张晓玉 周美芳 《猪业科学》 2025年第9期88-89,共2页
非洲猪瘟(ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(ASFV)引发的、在猪群中具有极强传染性和高致病性的疾病。ASFV毒力极强,无论是家猪还是野猪感染后,其致死率可接近或达到100%。目前,全球范围内尚未研发出安全有效的商业化疫苗或特效治疗药物。一旦... 非洲猪瘟(ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(ASFV)引发的、在猪群中具有极强传染性和高致病性的疾病。ASFV毒力极强,无论是家猪还是野猪感染后,其致死率可接近或达到100%。目前,全球范围内尚未研发出安全有效的商业化疫苗或特效治疗药物。一旦猪场发生疫情,极易导致恐慌性清场和大规模扑杀行动,这不仅给养殖者造成重大经济损失,还会严重威胁民生“菜篮子”工程,造成猪肉供应短缺和市场价格剧烈震荡。因此,养殖场防控非洲猪瘟的核心策略在于主动实施病原监测,及时识别病毒威胁,从而实现早期预警、精准防控和风险可控的目标。 展开更多
关键词 病原监测 早期预警 ASFV 实时荧光pcr检测技术
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基于TaqMan探针的柑橘黄龙病菌亚洲种实时荧光PCR快速检测方法
9
作者 杨小龙 滕少娜 +5 位作者 何玲 周林 高文娜 王溪桥 孔德英 孙涛 《山地农业生物学报》 2025年第3期74-78,共5页
柑橘黄龙病是我国目前柑橘生产中危害最严重的病害之一。根据柑橘黄龙病菌亚洲种rplj基因的种内保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了柑橘黄龙病菌亚洲种的实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测柑橘黄龙... 柑橘黄龙病是我国目前柑橘生产中危害最严重的病害之一。根据柑橘黄龙病菌亚洲种rplj基因的种内保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了柑橘黄龙病菌亚洲种的实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测柑橘黄龙病菌亚洲种,具有良好的特异性。灵敏度试验结果表明,在20μL反应体系中,检测的最低DNA浓度为0.01 ng/μL。对实际样品检测结果表明,该方法可有效检出受柑橘黄龙病菌亚洲种侵染的柑橘。本文所建立的检测方法具有特异性强、灵敏度高的优点,可用于疑似柑橘黄龙病菌亚洲种的检测和初筛。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 柑橘黄龙病菌亚洲种 快速检测 实时荧光pcr
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阿胶中马和驴成分的实时荧光PCR检测 被引量：28
10
作者 吴亚君 王斌 +3 位作者 刘鸣畅 韩建勋 李新实 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期85-88,共4页
建立阿胶中马和驴成分高特异、高灵敏的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。选择马和驴线粒体基因tRNA-Thr及D-loop区为靶序列,设计合成特异引物,通过普通PCR和实时荧光PCR检测,结果表明,这两对引物能够... 建立阿胶中马和驴成分高特异、高灵敏的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。选择马和驴线粒体基因tRNA-Thr及D-loop区为靶序列,设计合成特异引物,通过普通PCR和实时荧光PCR检测,结果表明,这两对引物能够准确检测阿胶或动物胶中马和驴成分。 展开更多
关键词 阿胶 马 驴 实时荧光pcr
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松材线虫rDNA-ITS2的Taq Man探针实时荧光PCR检测 被引量：24
11
作者 王明旭 朱水芳 +2 位作者 罗宽 周李华 赵文军 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期82-85,共4页
以松材线虫rDNA -ITS2为靶区 ,建立松材线虫的TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。对松材线虫大量DNA和单条线虫的检测结果表明 ,探针检测松材线虫和拟松材线虫时 ,前者产生明显的荧光信号 ,后者无荧光信号 ,表明探针具有高度的特异性 ;探... 以松材线虫rDNA -ITS2为靶区 ,建立松材线虫的TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。对松材线虫大量DNA和单条线虫的检测结果表明 ,探针检测松材线虫和拟松材线虫时 ,前者产生明显的荧光信号 ,后者无荧光信号 ,表明探针具有高度的特异性 ;探针检测到最低模板浓度为 1pg·μL- 1 。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 RDNA-ITS2 实时荧光pcr检测方法 荧光信号 拟松材线虫 DNA测序 检测结果 模板浓度 特异性
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SYBR Green实时荧光PCR检测食品中鲨鱼源性成分真实性方法的建立 被引量：24
12
作者 郭云霞 张舒亚 +4 位作者 谌鸿超 任硕 黄文胜 包建强 陈颖 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1300-1306,共7页
为确保鲨鱼产品的真实性,作者研究建立了食品中鲨鱼源性成分的SYBR Green实时荧光PCR鉴定方法。运用建立的SYBR Green实时荧光PCR方法对9种鲨鱼及48种常见非鲨鱼类动植物样品进行检测,9种鲨鱼样品均出现扩增曲线,且熔解曲线在(84±1... 为确保鲨鱼产品的真实性,作者研究建立了食品中鲨鱼源性成分的SYBR Green实时荧光PCR鉴定方法。运用建立的SYBR Green实时荧光PCR方法对9种鲨鱼及48种常见非鲨鱼类动植物样品进行检测,9种鲨鱼样品均出现扩增曲线,且熔解曲线在(84±1.5)℃内出现峰值;其他非鲨鱼样品中均未出现扩增曲线,熔解曲线在(84±1.5)℃也未出现峰值。该检测方法的检测限为0.000 1 ng/μL鲨鱼DNA和质量分数0.01%狗鲨肉粉。运用建立的方法对20种常见的鲨鱼产品进行PCR检测,除仿鱼翅和鲨鱼肝油外所有产品中均能检测出鲨鱼成分。结果表明,该检测方法特异性强,灵敏度高,能够用于食品中鲨鱼源性成分的真实性鉴别。 展开更多
关键词 SYBR Green实时荧光pcr 食品 鲨鱼源性成分 真实性
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实时荧光PCR技术定量检测转基因大豆方法的研究 被引量：15
13
作者 吴影 宋丰顺 +3 位作者 陆徐忠 赵伟 杨剑波 李莉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1733-1737,共5页
以转基因大豆Roundup Ready为材料,通过特异性引物和探针,对转基因大豆中外源基因cp4-epsps进行了定量检测。研究发现Taqman荧光探针法和SYBR荧光染料法均可作为转基因大豆定量检测的方法,但前者比后者具更高的检测灵敏度和精确度,其检... 以转基因大豆Roundup Ready为材料,通过特异性引物和探针,对转基因大豆中外源基因cp4-epsps进行了定量检测。研究发现Taqman荧光探针法和SYBR荧光染料法均可作为转基因大豆定量检测的方法,但前者比后者具更高的检测灵敏度和精确度,其检测阈值可降到0.05%,变异系数为0.09%～0.53%。在此基础上,建立和优化了Taqman探针实时荧光定量PCR检测技术体系,有助于提高转基因作物及产品的生物安全性定量检测的准确度和可靠性。 展开更多
关键词 实时荧光pcr 转基因大豆 TAQMAN探针 SYBR染料 定量检测
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食品和饲料中火鸡源性成分的实时荧光PCR检测方法 被引量：12
14
作者 张舒亚 谌鸿超 +5 位作者 宋青 高琴 吕蓉 李想 刘月明 李富威 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期207-211,共5页
为对产品真实性提供技术支撑,作者建立了食品和饲料中火鸡源性成分的检测方法。采用TaqMan探针实时荧光PCR方法,对火鸡源性成分特异性、灵敏度进行检测并进行实际应用。实验表明,建立的检测方法具有特异性和高灵敏度,检测限为0.001%。... 为对产品真实性提供技术支撑,作者建立了食品和饲料中火鸡源性成分的检测方法。采用TaqMan探针实时荧光PCR方法,对火鸡源性成分特异性、灵敏度进行检测并进行实际应用。实验表明,建立的检测方法具有特异性和高灵敏度,检测限为0.001%。通过对市售食品和饲料样品的检测,建立的方法适用于食品和饲料中火鸡源性成分的检测。 展开更多
关键词 食品 饲料 火鸡 实时荧光pcr方法 检测
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免疫磁捕获-实时荧光PCR快速检测鸡肉中沙门氏菌 被引量：19
15
作者 张东方 袁飞 +3 位作者 王娉 胡玥 陈颖 葛毅强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期142-147,共6页
对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃... 对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃振荡孵育1.5 h,制备得到抗沙门氏菌免疫磁珠,与市售沙门氏菌免疫磁珠试剂盒(Dynal产品)捕获效率相当。免疫磁捕获-实时荧光PCR检测方法检测限为104 CFU/mL左右,能在16 h内检测出鸡肉中104 CFU/mL的沙门氏菌,可用于食品中沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 沙门氏菌 免疫磁捕获法 实时荧光pcr 检测
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实时荧光PCR技术快速检测食品中的牛源成分 被引量：15
16
作者 范丽丽 李培 +2 位作者 丁洪流 金萍 傅春玲 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期65-67,85,共4页
目的:建立基于实时荧光PCR技术的食品中牛源性成分快速检测方法。方法:以牛线粒体细胞色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验,及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体系进行验证。结果:该牛源荧光PCR检测体系具... 目的:建立基于实时荧光PCR技术的食品中牛源性成分快速检测方法。方法:以牛线粒体细胞色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验,及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体系进行验证。结果:该牛源荧光PCR检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可检测1pg牛源DNA的存在,对于各模拟肉类样品中掺杂的牛源性成分,其检测限低至0.5%,且经市售加工食品验证具有较好的应用能力。结论:所建立的牛引物探针体系具有特异性好、灵敏度高,快速高效等优点,可用于对食品中牛源性成分的掺假鉴别检测。 展开更多
关键词 实时荧光pcr 牛 线粒体细胞色素B基因 食品掺假
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SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术 被引量：8
17
作者 程晓甜 阿地力·沙塔尔 +2 位作者 张伟 李新泉 玛依拉 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期60-65,共6页
应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种... 应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种实蝇来验证。SYBR Green PCR实时荧光反应的灵敏度用40,20,10,1,0.1,0.01,0.001 ng·μL^-1 7个浓度枣实蝇DNA模板来检测。结果表明：SYBR Green PCR的检测限度达0.01 ng·μL^-1以下,最适模板DNA浓度为1～20 ng·μL^-1。SYBR Green实时荧光PCR的可靠性可用枣实蝇不同虫态（幼虫、蛹、成虫）的扩增曲线、熔解曲线及PCR产物的琼脂糖凝胶电泳来检验。成虫、幼虫和蛹3种不同虫态的枣实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳条带分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性;其平均熔解温度为（75.3±0.1）℃,并获得一段长为205 bp的特异性目标片段,说明在枣实蝇成虫为模板的基础上建立的SYBR Green实时荧光PCR方法同时适用于幼虫、蛹的快速鉴定,可将不同虫态的枣实蝇与近似种类区分开来。 展开更多
关键词 枣实蝇 SYBR Green 实时荧光pcr 溶解曲线 鉴定
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实时荧光PCR法与ELISA法在发热伴血小板减少综合征病例检测中的比较 被引量：13
18
作者 杜燕华 黄学勇 +4 位作者 王海峰 尤爱国 康锴 陈豪敏 许汴利 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期101-104,共4页
目的比较实时荧光PCR法与酶联免疫吸附试验(ELISA)在发热伴血小板减少综合征病例检测中的差异。方法对143例2011年河南省发热伴血小板减少综合征监测病例的急性期血清,分别应用实时荧光PCR法和ELISA-IgM方法进行检测,结果进行统计学分... 目的比较实时荧光PCR法与酶联免疫吸附试验(ELISA)在发热伴血小板减少综合征病例检测中的差异。方法对143例2011年河南省发热伴血小板减少综合征监测病例的急性期血清,分别应用实时荧光PCR法和ELISA-IgM方法进行检测,结果进行统计学分析。结果 143例病例经实时荧光PCR法检测,阳性率50.35%,经ELISA-IgM法检测,阳性率为37.76%,两种方法的检测有统计学意义(P<0.05)。对于间隔时间超过1w的病例,两种检测方法无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光PCR法更适合于发热伴血小板减少综合征病例的早期实验室诊断,ELISA方法可对发病1w以上病例的实验室诊断。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征 实时荧光pcr ELISA
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苹果锈果类病毒实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：19
19
作者 吴然 李君英 +2 位作者 邵建柱 孙建设 张鹤 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期150-155,共6页
【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能... 【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能检测至1×10-6的模板浓度,而常规RT-PCR只能检测至1×10-4,由此可知,实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR 100倍;引物特异性强,能特异检测ASSVd,对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)均不能检出;适用性广,可检测出植物不同部位的ASSVd。【结论】所建立的方法能够灵敏检测ASSVd,特异性强,适用性广。 展开更多
关键词 苹果锈果类病毒(ASSVd) 检测 实时荧光pcr
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WSSV和IHHNV二重实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：16
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作者 谢芝勋 谢丽基 +6 位作者 庞耀珊 卢兆发 谢志勤 孙建华 邓显文 刘加波 唐小飞 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期22-27,共6页
根据基因库中对虾白斑综合症病毒W SSV(AF369029)和传染性皮下及造血器官坏死病毒IHHNV(AF218226)基因序列,设计了W SSV和IHHNV的两对特异性引物和两条用不同荧光基团标记的TaqM an探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检... 根据基因库中对虾白斑综合症病毒W SSV(AF369029)和传染性皮下及造血器官坏死病毒IHHNV(AF218226)基因序列,设计了W SSV和IHHNV的两对特异性引物和两条用不同荧光基团标记的TaqM an探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测W SSV和IHHNV的二重实时荧光PCR方法。该方法特异性好,对W SSV和IHHNV的检测敏感性分别达到2和20个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对W SSV和IHHNV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这二个病毒。对保存的30份经常规PCR检测仅为W SSV或IHHNV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中1份为W SSV和IHHNV混合感染。本研究建立的二重实时荧光PCR方法用于W SSV和IHHNV的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点。 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒 多重实时荧光pcr
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