鲤春病毒血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)和传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)是严重危害水产养殖业的3种鱼类弹状病毒。为建立这3种鱼类弹状病毒的快速检测方法,本研究设计合成针对这3种病毒系列引物,并在扩增反应体系中...鲤春病毒血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)和传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)是严重危害水产养殖业的3种鱼类弹状病毒。为建立这3种鱼类弹状病毒的快速检测方法,本研究设计合成针对这3种病毒系列引物,并在扩增反应体系中加入荧光染料SYBR Green I,通过恒温荧光检测仪Deaou-308C扩增检测,分别建立了这3种病毒的荧光定量环介导等温RNA扩增(RT-LAMP)方法。经反应条件的优化,检测结果显示,这3种方法分别对SVCV、VHSV和IHNV 3种弹状病毒具有特异性的扩增反应,对传染性胰坏死病毒、狗鱼弹状病毒和牙鲆弹状病毒核酸的扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。灵敏度试验最低检测限分别为4.0×104拷贝/μL、5.4×104拷贝/μL、4.3×104拷贝/μL。该方法在63℃下保温40 min可以完成检测,操作简单、灵敏度高、特异性强,通过恒温实时荧光检测仪可实时检测及自动判读检测结果,适合现场检测和口岸快速检测。展开更多
复合调味料食用方便、口味多样,具有巨大的市场发展潜力,但相关食品安全问题也时有发生。该研究建立了实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescence-saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)熔解曲线法检测复合调味料...复合调味料食用方便、口味多样,具有巨大的市场发展潜力,但相关食品安全问题也时有发生。该研究建立了实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescence-saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)熔解曲线法检测复合调味料中沙门氏菌的方法。RF-SRCA反应完成后,通过熔解曲线法检测沙门氏菌,可排除引物二聚体或非特异产物对检测结果的影响,准确直观地判定检测结果。进行引物特异性验证,并对灵敏度和人工污染样品的检出限进行分析。结果表明,该方法能有效检测沙门氏菌,14株沙门氏菌均为阳性结果,熔解峰形一致,且Tm值范围稳定,25株非沙门氏菌均为阴性结果。RF-SRCA熔解曲线方法的灵敏度为6 fg/μL,较实时荧光PCR(real-time fluorescence-PCR,RF-PCR)灵敏度高出100倍。检出限为4.6×10^(0) CFU/g,比RF-PCR低100倍。与RF-PCR方法相比,RF-SRCA检测方法灵敏度更高,检出限更低。因此,该研究建立的RF-SRCA熔解曲线方法可对复合调味料中沙门氏菌实现快速、准确、特异、灵敏的检测。展开更多
文摘鲤春病毒血症病毒(SVCV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)和传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)是严重危害水产养殖业的3种鱼类弹状病毒。为建立这3种鱼类弹状病毒的快速检测方法,本研究设计合成针对这3种病毒系列引物,并在扩增反应体系中加入荧光染料SYBR Green I,通过恒温荧光检测仪Deaou-308C扩增检测,分别建立了这3种病毒的荧光定量环介导等温RNA扩增(RT-LAMP)方法。经反应条件的优化,检测结果显示,这3种方法分别对SVCV、VHSV和IHNV 3种弹状病毒具有特异性的扩增反应,对传染性胰坏死病毒、狗鱼弹状病毒和牙鲆弹状病毒核酸的扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。灵敏度试验最低检测限分别为4.0×104拷贝/μL、5.4×104拷贝/μL、4.3×104拷贝/μL。该方法在63℃下保温40 min可以完成检测,操作简单、灵敏度高、特异性强,通过恒温实时荧光检测仪可实时检测及自动判读检测结果,适合现场检测和口岸快速检测。
文摘复合调味料食用方便、口味多样,具有巨大的市场发展潜力,但相关食品安全问题也时有发生。该研究建立了实时荧光跨越式滚环等温扩增(real-time fluorescence-saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)熔解曲线法检测复合调味料中沙门氏菌的方法。RF-SRCA反应完成后,通过熔解曲线法检测沙门氏菌,可排除引物二聚体或非特异产物对检测结果的影响,准确直观地判定检测结果。进行引物特异性验证,并对灵敏度和人工污染样品的检出限进行分析。结果表明,该方法能有效检测沙门氏菌,14株沙门氏菌均为阳性结果,熔解峰形一致,且Tm值范围稳定,25株非沙门氏菌均为阴性结果。RF-SRCA熔解曲线方法的灵敏度为6 fg/μL,较实时荧光PCR(real-time fluorescence-PCR,RF-PCR)灵敏度高出100倍。检出限为4.6×10^(0) CFU/g,比RF-PCR低100倍。与RF-PCR方法相比,RF-SRCA检测方法灵敏度更高,检出限更低。因此,该研究建立的RF-SRCA熔解曲线方法可对复合调味料中沙门氏菌实现快速、准确、特异、灵敏的检测。
