SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立 被引量：12

1

作者 熊文婕 谢芝勋 +5 位作者 唐熠 谢丽基 刘加波 庞耀姗 邓显文 谢志勤 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第4期366-370,共5页

为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选... 为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线。结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异。可见,SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 δC基因 δNS基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量rt—PCR 相对定量

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实时荧光定量RT-PCR法检测手足口病患儿大便标本中肠道病毒71型 被引量：15

2

作者 刘丽艳 叶颖子 +2 位作者 王建设 俞蕙 朱启镕 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期142-145,共4页

目的了解2008年手足口病流行期间住院手足口病患儿是否存在EV71病毒感染,并探讨实时荧光定量RT-PCR法对手足口病患儿大便标本中EV71病毒载量进行定量检测的可行性。方法采用RT-PCR荧光探针体外扩增法对47例住院的手足口病患儿大便标本... 目的了解2008年手足口病流行期间住院手足口病患儿是否存在EV71病毒感染,并探讨实时荧光定量RT-PCR法对手足口病患儿大便标本中EV71病毒载量进行定量检测的可行性。方法采用RT-PCR荧光探针体外扩增法对47例住院的手足口病患儿大便标本中抽提的RNA进行抽样检测。结果22例(46.81%)手足口病患儿大便标本中EV71的病毒载量大于103copies/ml,最高者达1.03×107copies/ml。实时荧光定量RT-PCR法其标准曲线显示,Ct值与病毒拷贝数的对数(log10)之间的相关系数为1.000,相关性较好。结论2008年手足口病流行期间入住儿科医院的手足口病患儿近半数为EV71病毒感染。实时荧光定量RT-PCR法对大便标本中的EV71RNA定量检测较方便快捷,结果直观,为进一步研究病毒载量与临床表现之间的关系打下了基础。 展开更多

关键词 手足口病 肠道病毒71型 实时荧光定量rt—PCR 病毒载量

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小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：14

3

作者 赵文华 杨仕标 +1 位作者 高华峰 王金萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期65-71,共7页

为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测... 为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测。试验结果显示,所建立的N-ITR二联探针实时荧光定量RT-PCR方法可同步检测PPRV和GTPV,产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)等相关病毒无荧光信号检出。以PPRV-N和GTPVITR的pMD18-T载体质粒为标准品,构建了二联标准曲线,N-ITR探针对PPRV和GTPV的检测敏感度可分别达102和103拷贝/μL。本研究初步建立了可同步快速特异性检测PPRV和GTPV的二联实时荧光定量RT-PCR方法。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 山羊痘病毒 二联实时荧光定量rt—PCR 探针

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西安市景观水体肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测与健康风险评价 被引量：9

4

作者 张崇淼 王晓昌 彭党聪 《安全与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期85-88,共4页

根据肠道病毒基因非编码区保守序列的同源性设计肠道病毒通用引物,建立环境水体中肠道病毒的实时定量RT-PCR检测方法,对西安市的主要景观水体进行1 a的连续监测。通过统计分析数据,对肠道病毒感染的健康风险进行评价。结果表明,兴庆湖... 根据肠道病毒基因非编码区保守序列的同源性设计肠道病毒通用引物,建立环境水体中肠道病毒的实时定量RT-PCR检测方法,对西安市的主要景观水体进行1 a的连续监测。通过统计分析数据,对肠道病毒感染的健康风险进行评价。结果表明,兴庆湖和北湖的肠道病毒检出浓度符合对数正态分布,浓度随季节变化波动明显,全年浓度几何平均值分别为16.05 copy/L和5.06 copy/L。肠道病毒与细菌总数、大肠菌群、粪大肠菌群等指标均无显著的相关性。根据景观用水的暴露评价和脊髓灰质炎病毒1型、柯萨奇病毒A21和B4型,埃可病毒12型的剂量-反应关系,计算得出兴庆湖和北湖中的各种肠道病毒感染的年风险分别为1.05×10^(-2),1.66×10^(-2),1.47×10^(-2);3.27×10^(-3),5.20×10^(-3),4.59×10^(-3)。结果表明这些景观水体已受到肠道病毒的污染,进一步加强城市景观水体肠道病毒的监测是十分必要的。 展开更多

关键词 环境工程学 肠道病毒 实时荧光定量rt—PCR 景观水体

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运用实时荧光定量RT-PCR法检测乳腺癌组织中ERα、PR和Her2mR-NA表达 被引量：2

5

作者 陆慧琦 何金 +3 位作者 陈佳 徐毅 祝丽双 韩焕兴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期453-457,共5页

目的评价实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)在测定乳腺癌组织中雌激素受体α(ERα)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her2)基因表达的临床价值。方法选择2010年3月至10月在我院接受手术治疗的乳腺癌患者48例和乳腺良性病变患者28例,用... 目的评价实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)在测定乳腺癌组织中雌激素受体α(ERα)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her2)基因表达的临床价值。方法选择2010年3月至10月在我院接受手术治疗的乳腺癌患者48例和乳腺良性病变患者28例,用免疫组化染色(IHC)法检测乳腺癌组织中ERα、PR、Her2蛋白的表达,用实时qRT-PCR法检测乳腺癌组织及良性乳腺肿瘤组织中ERα、PR、Her2mRNA的表达,并评价这两种检测方法在乳腺癌诊断中的价值。结果用实时qRT-PCR测得的ERα、Her2mRNA在乳腺癌组织中的表达均高于对照组织(P<0.05,P<0.01),而PRmRNA的表达在乳腺癌组织与对照组织之间差异无统计学意义。乳腺癌组织中ERα、PR、Her2的蛋白表达与临床TNM分期有关,ERα和PR的阳性表达率随临床TNM分期的升高而下降(P<0.05),Her2的阳性表达率随临床TNM分期的升高而升高(P<0.05)。乳腺癌淋巴结转移组乳腺组织中ERα、Her2mRNA表达均高于无淋巴结转移组(P<0.05),而PR mRNA表达与无淋巴结转移组比较差异无统计学意义。实时qRT-PCR检测ERα、PR、Her2mRNA在评价乳腺癌对内分泌治疗的敏感性、特异性以及病理学诊断的符合率均与IHC相符。结论 ERα、PR和Her2是预测乳腺癌内分泌治疗或靶向治疗的重要基因,本研究建立的实时qRT-PCR检测方法可用于ERα、PR和Her2mRNA表达的临床检测和研究。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 雌激素受体Α 孕激素受体 人表皮生长因子受体2 实时荧光定量rt—PCR 预后

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儿童急性髓系白血病WT1基因的实时荧光定量RT-PCR检测及其临床意义 被引量：3

6

作者 张熔 孙怀强 +5 位作者 李戈 白峰岩 杨阳 景清 石毓君 杨季云 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期959-963,共5页

本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法检测儿童急性髓系白血病WT1基因(AML)mRNA的表达并探讨其临床意义。采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法,检测30例初治AML患儿、12例缓解期患儿(30份)、18例复发患儿,30例细胞形态学正常人的骨髓... 本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法检测儿童急性髓系白血病WT1基因(AML)mRNA的表达并探讨其临床意义。采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法,检测30例初治AML患儿、12例缓解期患儿(30份)、18例复发患儿,30例细胞形态学正常人的骨髓标本中的WT1基因的表达水平,并动态检测20例初治患儿WT1基因的表达。以ABL为内参照,采用2-△△ct法计算其相对表达量。结果表明:①初治AML患儿WT1基因的表达高于正常对照组和缓解组(p<0.001);缓解AML患儿WT1基因的表达与正常对照组的差异无统计学意义(p>0.05);复发AML患儿WT1基因的表达与初治组的差异无统计学意义(p>0.05);②动态监测儿童AML20例显示,初治时W T1高表达,完全缓解后W T1表达水平下降,复发时W T1表达水平明显升高。20例中5例在临床复发前3-7个月表达水平开始上升。③动态检测的20例患儿初治时W T1阳性组和阴性组完全缓解率(CR)、3年总生存率(O S)无显著差异(p>0.05),治疗后第22-30天的W T1阳性组3年O S显著低于阴性组(p<0.05)。结论:SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法是一种快速有效,灵敏度高,特异性好的方法。WT1基因在儿童急性AML中表现为促癌基因的作用,WT1基因表达水平的变化有助于疗效评价,微小残留病的检测和预后判断。 展开更多

关键词 WT1基因 实时荧光定量rt—PCR 急性髓系白血病

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鸭IFN-γ mRNA实时荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：7

7

作者 谢秀兰 汤承 +1 位作者 杨发龙 岳华 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期17-20,共4页

为建立检测鸭IFN-γ mRNA表达的实时荧光定量RT—PCR方法，根据GenBank中鸭IFN-γ基因序列，在保守区域设计并合成一对引物，采用SYBR Green Ⅰ染料，建立检测鸭IFN-γ mRNA的实时荧光定量RT-PCR方法（real-time RT-PCR）。试验以PCR产... 为建立检测鸭IFN-γ mRNA表达的实时荧光定量RT—PCR方法，根据GenBank中鸭IFN-γ基因序列，在保守区域设计并合成一对引物，采用SYBR Green Ⅰ染料，建立检测鸭IFN-γ mRNA的实时荧光定量RT-PCR方法（real-time RT-PCR）。试验以PCR产物为标准品，建立标准曲线，随后进行熔解曲线分析和稳定性研究。结果Ct值线性范围为12．0～33．0，相关系数为0．997；熔解曲线显示产物为单特异峰，Tm为82．5±0℃；组内变异系数（CV％）为4．26％；纽间试验无显著差异（P〉0．05）。建立的检测鸭IFN-γ mRNA的Real—time RT—PCR方法具有检测范围广、扩增效率高、特异性好、重复性和稳定性良好等特点。 展开更多

关键词 鸭 Γ干扰素 实时荧光定量rt—PCR SYBR Green Ⅰ

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牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR方法的建立及应用 被引量：6

8

作者 王荣 李文文 +3 位作者 王研 刘亚刚 余琼 任永刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期35-39,共5页

持续性感染和免疫耐受是牛病毒性腹泻病的重要特征,这一特征给该病的诊断、检疫及防控造成很大困难,为此,建立快速实用、高效敏感的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)检测方法具有重要意义。据GenBank中登录的BVDV 5... 持续性感染和免疫耐受是牛病毒性腹泻病的重要特征,这一特征给该病的诊断、检疫及防控造成很大困难,为此,建立快速实用、高效敏感的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)检测方法具有重要意义。据GenBank中登录的BVDV 5′UTR保守区域设计并合成1对特异性引物,以SYBR GreenⅠ染料为扩增指示剂,建立了BVDV实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异、重复性好等优点。该方法的建立为牛病毒性腹泻病的早期快速诊断和有效检出持续性感染动物提供了手段,是该病检疫和诊断方法的补充和完善。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 实时荧光定量rt—PCR 5′UTR 检测方法

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检测微囊藻毒素合成酶基因mcyH的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：3

9

作者 方志慧 许敏 +1 位作者 程凯 赵以军 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第3期452-455,共4页

利用RT-PCR方法从铜绿微囊藻PCC7806 mcy基因中扩增出目的基因片段,用TA克隆方法将基因片段插入pGEMT-T Easy中来制备质粒标准品.通过不同连续稀释倍数的质粒标准品成功构建了16srRNA和mcyH两基因的标准曲线,该法构建的两基因标准曲线r... 利用RT-PCR方法从铜绿微囊藻PCC7806 mcy基因中扩增出目的基因片段,用TA克隆方法将基因片段插入pGEMT-T Easy中来制备质粒标准品.通过不同连续稀释倍数的质粒标准品成功构建了16srRNA和mcyH两基因的标准曲线,该法构建的两基因标准曲线r2分别为0.9916和0.9938,且质粒标准品具有较好的重复性,满足实时荧光定量RT-PCR的要求. 展开更多

关键词 mcyH 实时荧光定量rt—PCR SYBR Green Ⅰ

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鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：3

10

作者 孔刚锐 吴志明 +7 位作者 闫若潜 赵明军 王东方 赵雪丽 闫志玲 程俊贞 陈慧娟 靳利粉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页

据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条... 据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。 展开更多

关键词 高 低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重实时荧光定量rt—PCR TAQMAN MGB荧光探针 检测 应用

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血清3型鸭甲型肝炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：5

11

作者 孙庆歌 薛霜 +7 位作者 肖爱芳 马慧慧 朱薇 漆世华 温文生 舒银辉 谢红玲 苏敬良 《中国兽药杂志》 2013年第4期1-5,共5页

通过对GenBank公布的鸭甲型肝炎病毒全序列比对,在3型鸭甲肝炎病毒(DHVA-3)5’非编码区的保守区,设计了一对检测引物和一条特异性TaqMan探针,以构建的阳性重组质粒经体外转录合成的RNA作为标准品绘制标准曲线,建立了一种快速检测DHAV-3... 通过对GenBank公布的鸭甲型肝炎病毒全序列比对,在3型鸭甲肝炎病毒(DHVA-3)5’非编码区的保守区,设计了一对检测引物和一条特异性TaqMan探针,以构建的阳性重组质粒经体外转录合成的RNA作为标准品绘制标准曲线,建立了一种快速检测DHAV-3的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法能特异性地检测出DHAV-3,而与血清1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)、鸭瘟病毒、新城疫病毒、禽流感病毒(H9)、呼肠孤病毒、传染性支气管炎病毒无交叉反应。在1.8×103～1.8×108copies/μL的检测范围内标准曲线线性关系较好,R2为0.992。敏感性试验表明,最低检测限为36拷贝数RNA。用该方法和胚半数致死量法对尿囊液中病毒含量进行检测,表明二种方法检测结果呈正相关。本研究所建立的检测方法特异性好,灵敏度高,且操作方便,可为该病毒的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。 展开更多

关键词 血清3型鸭甲型肝炎病毒 实时荧光定量rt—PCR

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应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β1诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞中PAI-1mRNA表达 被引量：2

12

作者 何淑芳 杨林 +6 位作者 黄维娟 杨雁 周伏圣 方巧云 张安平 杨森 张学军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期64-67,共4页

目的应用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测转化生长因子-β1（transforming growth factor betal，TGF-β1）诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFS）中纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor1，PAI-1）mRN... 目的应用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测转化生长因子-β1（transforming growth factor betal，TGF-β1）诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFS）中纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor1，PAI-1）mRNA的表达。方法体外分离培养KFs，应用不同浓度（1．25～20pmol·L-1）TGF-β1刺激KFs3h或TGF-β1（10pmol·L-1）刺激KFs不同时间（0．5～6h），采用SYBRGreenI荧光实时定量RT—PCR法检测，以B—actin基因作为内参，计算各组PAI-1mRNA的相对表达量。结果与空白对照组相比，TGF-β1能明显诱导KFs中PAI-1mRNA的表达，10、20pmol·L-1浓度组表达比值分别增至4．19及4．44倍（P〈0．01）；TGF-β1（10pmol·L。）的1、2h时问组表达比值分别增至2．29及2．41倍（P〈0．05），3、6h时间组分别增至4．19及5．83倍（P〈0．01）。提示，TGF-β1诱导KFs中PAI=1mRNA表达的最适浓度为10pmol·L-1、最适时间为3h。结论利用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测TGF-β1诱导KFs中PAI-1mRNA的表达，为进一步研究瘢痕疙瘩中TGF-β1信号通路的靶基因调控机制，以及开发治疗瘢痕疙瘩的新药提供了基础。 展开更多

关键词 瘢痕疙瘩 转化生长因子-β1 纤溶酶原激活物抑制剂-1 荧光实时定量rt—PCR

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实时荧光定量PCR及RT-PCR与常规PCR及RT-PCR检测对虾病毒效果的比较 被引量：3

13

作者 沈飚 王忠发 +1 位作者 胡兴娟 顾松叶 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期30-36,共7页

常规PCR及RT-PCR已用于对虾DNA及RNA病毒检测,但存在费时、灵敏度较低、不能定量等问题。建立了TaqMan实时荧光定量PCR及RT-PCR方法,分别用于检测白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)及桃拉综合征病毒(TSV)、黄... 常规PCR及RT-PCR已用于对虾DNA及RNA病毒检测,但存在费时、灵敏度较低、不能定量等问题。建立了TaqMan实时荧光定量PCR及RT-PCR方法,分别用于检测白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)及桃拉综合征病毒(TSV)、黄头病毒(YHV)4种对虾病毒。与常规PCR及RT-PCR比较,所建立的TaqMan实时荧光定量PCR及RT-PCR检测上述4种对虾病毒不仅有很高的特异性,检测灵敏度也提高了10～100倍,同时还具有快速、简便、不污染环境、重复性好、实时定量等优点,可明显提高对虾病毒检验检疫工作质量及效率。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR/rt—PCR 常规PCR/rt—PCR 对虾病毒 检测效果 比较

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猪传染性胃肠炎病毒S基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测 被引量：3

14

作者 张云 王亚宾 +4 位作者 陈丽颖 张红英 侯贝贝 崔保安 胡慧 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期521-525,共5页

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重... 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量RT-PCR检测的标准模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR扩增,并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:该方法检测灵敏度可达30拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有重复性好、特异性强、灵敏度高等优点,可用于临床TGEV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 实时荧光定量rt—PCR技术

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比格犬IFN-α和IFN-β mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：3

15

作者 潘福星 王冬冬 +6 位作者 曹志伟 冯培祥 刘宏 齐娟 孙忠晟 王祖荣 尹燕博 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期297-300,共4页

为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增IFN... 为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段,并克隆于pMD19-T载体中制备标准品,建立荧光定量RT-PCR标准曲线。结果表明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL^1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994。组内组间变异系数均小于3%,特异性和重复性较好。同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测,结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别为96.43%和96.55%。本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA的定量分析提供了有效手段。 展开更多

关键词 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量rt—PCR 比格犬 α-干扰素 Β-干扰素

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定量RT-PCR检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达 被引量：1

16

作者 徐栋 李旭芬 +2 位作者 蒋文智 曹江 郑树 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2004年第5期403-406,共4页

目的 :检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 ) m RNA的表达水平 ,并探讨其临床价值。方法 :采用实时荧光定量 RT- PCR法检测 5 1例经病理学确诊的结直肠癌患者和 30例健康对照者外周血 CK2 0 m RNA的表达水平。结果 :结直肠... 目的 :检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 ) m RNA的表达水平 ,并探讨其临床价值。方法 :采用实时荧光定量 RT- PCR法检测 5 1例经病理学确诊的结直肠癌患者和 30例健康对照者外周血 CK2 0 m RNA的表达水平。结果 :结直肠癌患者中 CK2 0 m RNA阳性率为 2 7.4 5 % ,而健康对照组阳性率为 6 .6 7% ,两者相比差异有统计学意义 (P<0 .0 2 5 )。随着临床分期的提高 ,患者外周血中 CK2 0 m RNA的表达率随之提高 ,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义 (P>0 .0 5 )。Dukes'C期与 D期患者中 >10拷贝 / ml者高于 A期与 B期患者。结论 :检测结直肠癌患者外周血 CK2 0 m RNA的表达水平可发现早期脱落的肿瘤细胞 。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 诊断 细胞角蛋白20 血液 实时荧光定量rt—PCR

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大黄素对乏氧鼻咽癌细胞的放射增敏性与DNA修复基因的关系 被引量：15

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作者 刘瑛 侯华新 +2 位作者 黎丹戎 程道海 罗艳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期348-352,共5页

目的研究广西何首乌中大黄素(emodin)对乏氧状态鼻咽癌CNE-1细胞KU70/80表达的影响,探讨其放射增敏作用与DNA修复基因的关系。方法通氮乏氧条件下,应用实时荧光定量PCR技术检测放射增敏实验组和对照组鼻咽癌细胞中乏氧诱导因子(HIF-1α)... 目的研究广西何首乌中大黄素(emodin)对乏氧状态鼻咽癌CNE-1细胞KU70/80表达的影响,探讨其放射增敏作用与DNA修复基因的关系。方法通氮乏氧条件下,应用实时荧光定量PCR技术检测放射增敏实验组和对照组鼻咽癌细胞中乏氧诱导因子(HIF-1α)和DNA双链断裂修复基因(KU70/KU80)mRNA的表达水平。结果乏氧作用不同时间后HIF-1αmRNA表达都明显升高,而单独药物组HIF-1α表达无明显变化;单纯放疗组能诱导KU70/KU80 mRNA表达上调,放疗联合乏氧组对KU70/KU80的上调作用比单纯放疗组更明显;而在乏氧情况下进行加药和照射处理后KU70/KU80 mRNA表达明显降低。结论在乏氧环境下,大黄素联合放疗能有效下调HIF-1α和DNA双链断裂修复基因(KU70/KU80)mRNA的表达水平,这可能是其增敏作用的分子机制。 展开更多

关键词 大黄素 乏氧 修复基因 实时荧光定量rt—PCR 鼻咽癌

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非小细胞肺癌化疗药物敏感基因表达及其临床病理特征分析 被引量：14

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作者 罗春英 王璇 +3 位作者 时姗姗 周晓军 马恒辉 王建东 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期481-484,共4页

目的肺癌是全球癌症死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌总数的85%。目前化疗是晚期NSCLC常规治疗方案。文中分析几种常见化疗药物敏感性相关基因mRNA在中国人群中表达情况及其与临床病理特征... 目的肺癌是全球癌症死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌总数的85%。目前化疗是晚期NSCLC常规治疗方案。文中分析几种常见化疗药物敏感性相关基因mRNA在中国人群中表达情况及其与临床病理特征的相关性以便进行个体化治疗。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative re-verse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测49例NSCLC石蜡组织标本中编码3型β微管蛋白的TUBB3基因、核苷酸切除修复交叉互补组1基因(excision repair cross complementation group1,ERCC1)、胸苷酸合成酶基因(thymidylate syn-thetase,TYMS)、核糖核苷酸还原酶亚单位M1基因(ribonucleotide reductase M1,RRM1)mRNA表达水平。结果 TUBB3mRNA在53.33%NSCLC组织中高表达;ERCC1 mRNA在40.00%NSCLC组织中高表达,其中肺腺癌高表达率为53.33%、肺鳞状细胞癌为8.33%,两者之间的表达差异有统计学意义,P=0.019;TYMS mRNA在76.19%NSCLC组织中低表达;RRM1mRNA在78.57%NSCLC组织中低表达。TUBB3、ERCC1、TYMS、RRM1基因mRNA表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无显著相关性。结论多数中国人NSCLC肿瘤组织中TYMS、RRM1 mRNA低表达;肺腺癌ERCC1 mRNA表达明显高于肺鳞状细胞癌。研究结果提示,多数NSCLC患者对化疗药物吉西他滨、培美曲塞敏感,肺鳞癌患者较腺癌患者应用铂类抗癌药物更有效。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 药物敏感性 实时荧光定量rt—PCR 基因表达

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检测LUNX mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的可行性及其临床意义 被引量：8

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作者 张鹏 刘毅梅 +2 位作者 陈洁 宋世辉 商忠良 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第6期506-510,共5页

背景与目的微转移的检测对非小细胞肺癌的个体化治疗和指示预后具有重要意义。LUNX为近年新发现的人类肺组织特异性基因。本研究的目的是检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者LUNXmRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法... 背景与目的微转移的检测对非小细胞肺癌的个体化治疗和指示预后具有重要意义。LUNX为近年新发现的人类肺组织特异性基因。本研究的目的是检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者LUNXmRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法选择初治的NSCLC患者62例,以肺部良性疾病10例与健康人10例作为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和普通RT-PCR技术,检测肺癌、良性病变肺组织、骨髓和外周血LUNXmRNA的表达。结果肺癌和良性病变肺组织中LUNXmRNA阳性表达率均为100%。肺良性病变组骨髓及外周血标本和健康对照组外周血标本中LUNXmRNA表达皆为阴性。62例NSCLC患者骨髓LUNXmRNA阳性表达率为38.7%(24/62),外周血LUNXmRNA阳性表达率为29.0%(18/62),至少一项阳性表达者占45.2%(28/62);骨髓LUNXmRNA阳性表达率随分期升高且有统计学意义(P=0.02),与病理类型、肿瘤分化程度无明显关系;外周血LUNXmRNA表达与病理分期、病理类型、肿瘤分化程度均无明显关系。NSCLC患者骨髓和外周血LUNXmRNA表达有相关性(P<0.001)。结论LUNXmRNA可作为检测NSCLC患者微转移的特异、敏感的分子标志物,可能有助于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 微转移LUNX MRNA 实时荧光定量rt—PCR

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在水稻纹枯病菌菌核形成中5个基因的表达差异分析 被引量：7

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作者 王伟 杨惠 +1 位作者 王政逸 陈卫良 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-25,共8页

以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed seq... 以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)设计引物,采用实时定量RT-PCR检测A、B、C、E、F基因(分别为双组分反应调节子、激活巨噬细胞糖蛋白、胞外金属弹力蛋白酶、亲环蛋白、内质网囊泡蛋白ERV29)的表达,以期找到水稻纹枯病菌菌核形成中的差异表达基因。结果表明:从菌核开始形成到菌核成熟的过程中,这5个基因的表达量逐渐降低,且菌核在成熟时表达量最低,但成熟后这些基因的表达量迅速恢复到之前的水平,之后表达量基本保持不变。提示这5个基因在水稻纹枯病菌菌核形成的不同时期的表达有显著差异,说明这5个基因可能受菌核形成过程中胁迫条件的诱导表达。 展开更多

关键词 水稻纹枯病菌 菌核形成 实时荧光定量rt PCR 基因差异表达

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