猪肺炎支原体实时荧光重组酶介导的等温扩增快速检测方法的建立和应用 被引量：1

1

作者 康浩然 黄雨薇 +7 位作者 宋程 高鹏 张永宁 周磊 盖新娜 韩军 郭鑫 杨汉春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期1-9,共9页

猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基... 猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基因p46,通过序列比对和系统性的引物筛选设计了exo探针及其对应的重组酶介导的等温扩增(RAA)技术引物对,建立了Mhp实时荧光(real-time)RAA快速检测方法;随后,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,并使用该方法和实时荧光定量PCR(qPCR)对比检测临床样本。结果显示,该方法与猪链球菌、肺炎克雷伯氏菌、猪格拉瑟氏菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌均无交叉反应,特异性好;Mhp real-time RAA及其可视化方法的检测敏感性分别为18和29 copies/μL(95%置信区间),敏感性强;组内和组间重复性试验变异系数均小于8.0%,重复性好;对108份猪临床样本的检测结果显示,该方法及其可视化方法与Mhp qPCR方法的符合率分别为98.15%和99.07%。本试验所建立Mhp real-time RAA方法可以通过便捷式蓝光仪器实现结果的可视化,更适用于资源匮乏的诊断实验室和基层现场,为MPS的防控提供了技术手段。 展开更多

关键词 重组酶介导的等温扩增技术 猪肺炎支原体 实时荧光定量PCR 快速检测

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核酸提取方法、操作人员和扩增仪器对RT-qPCR检测结果的影响

2

作者 马玥 高维明 +5 位作者 王江璐 史楠 王思文 邢文萍 武嘉男 王秀荣 《中国动物检疫》 2025年第9期84-89,共6页

为探讨方法、人员和仪器对实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测结果的影响,以灭活的H5亚型禽流感病毒Re-12株鸡胚尿囊液作为核酸提取和扩增样品,在固定其他变量的条件下,分别用3种核酸提取试剂盒,由3位操作人员使用7种品牌的扩增仪器进行RT... 为探讨方法、人员和仪器对实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测结果的影响,以灭活的H5亚型禽流感病毒Re-12株鸡胚尿囊液作为核酸提取和扩增样品,在固定其他变量的条件下,分别用3种核酸提取试剂盒,由3位操作人员使用7种品牌的扩增仪器进行RT-qPCR检测,并对检测结果进行对比分析。结果显示:3种核酸提取试剂盒获取RNA进行RT-qPCR检测的平均Ct值极差为3.69,3位操作人员测试的Ct值变异系数为2.82%~4.84%,7种品牌仪器测试的Ct值变异系数为4.36%~10.28%。结果说明:不同核酸提取试剂盒、不同操作人员和不同检测仪器都会引起检测结果差异,对检测结果产生影响。因此,在进行核酸检测时,必须严格遵守试验规程,确保试验条件的稳定性和一致性,以获得准确可靠的检测结果。 展开更多

关键词 实时荧光定量RT-PCR 核酸扩增 影响因素 变异系数

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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术及环介导等温扩增技术在结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：13

3

作者 冉燕 赵建军 +1 位作者 张建勇 宗兆婧 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第24期3416-3419,共4页

目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核... 目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核性脑膜炎B组,另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液20例为对照组(CG组)。其中结核性脑膜炎A组患者入院后抽取脑脊液送脑脊液常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF,结核性脑膜炎B组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养和LAMP,CG组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF和LAMP。结果结核性脑膜炎A组脑脊液GeneXpert MTB/RIF阳性32例,其中利福平耐药基因检测阳性3例,结核性脑膜炎A组脑脊液结核菌涂片、培养、GeneXpert MTB/RIF阳性率分别为8.3%(5/60)、16.7%(10/60)和53.0%(32/60)。结核性脑膜炎B组50例脑脊液结核菌涂片、结核菌培养、LAMP,阳性率分别为8.0%(4/50),18.0%(9/50)和58.0%(29/50),CG组脑脊液GeneXpert MTB/RIF和脑脊液LAMP均为阴性。结论脑脊液GeneXpert MTB/RIF及脑脊液LAMP均为早期诊断结核性脑膜炎的较好方法。 展开更多

关键词 结核 脑膜炎 脑脊液 利福平 耐药 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术 环介导等温扩增技术

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核酸扩增实时检测荧光染料的研究进展 被引量：3

4

作者 邱婷 毛国斌 徐秦峰 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期479-486,共8页

核酸扩增反应能够在短时间内将特定DNA模板的数量增加106~109倍,显著提高微量核酸检测的灵敏度,但同时扩增产物的遗漏极易造成交叉污染,影响后续检测。扩增反应通过添加荧光染料实现的实时闭管检测,不仅可以避免反应结束后开管操作所导... 核酸扩增反应能够在短时间内将特定DNA模板的数量增加106~109倍,显著提高微量核酸检测的灵敏度,但同时扩增产物的遗漏极易造成交叉污染,影响后续检测。扩增反应通过添加荧光染料实现的实时闭管检测,不仅可以避免反应结束后开管操作所导致的交叉污染,还可以通过反应动力学对样品中模板的起始拷贝数定量,以及通过熔解曲线分析鉴别多种靶标来源、进行基因突变扫描和基因分型检测。目前常用的商业化实时检测荧光染料,如SYBR Green I、Eva Green等,其精确结构信息尚未披露,因此只能通过实验“试错法”选取合适染料,无法从根本上获知染料结构和分析性能之间的关系。本文将通过对目前常用的核酸实时检测荧光染料性质和应用进行总结,为其优化选择、设计和开发提供参考依据。 展开更多

关键词 核酸扩增 实时检测 荧光染料

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实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中沙门氏菌 被引量：22

5

作者 王瑾 林丽萍 +1 位作者 郜彦彦 吴国平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第24期170-174,共5页

根据沙门氏菌inv A基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测方法。结果表明,检测过程仅需45 min,灵敏度达6 CFU/管,而且细菌数量对数值(lg(CFU/管))与扩增荧光指数增加... 根据沙门氏菌inv A基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测方法。结果表明,检测过程仅需45 min,灵敏度达6 CFU/管,而且细菌数量对数值(lg(CFU/管))与扩增荧光指数增加时间(Tp值)具有良好正相关线性关系,R2为0.985 1。通过模拟沙门氏菌人工污染25 g鸡肉样品,经37℃保温4 h,提取样品制备DNA模板用于实时荧光定量环介导等温扩增检测,结果表明灵敏度达450 CFU/g,共需时约7 h。随机从市场购买冷冻鸡肉样品21份,采用国标沙门氏菌检测方法和鸡肉样品实时荧光定量环介导等温扩增检测进行对比检测,结果两种方法均检测出同一份样品为沙门氏菌阳性,其余20份样品均为沙门氏菌阴性,表明本研究建立的鸡肉沙门氏菌实时荧光定量环介导等温扩增检测,其灵敏性和准确性与国标检测方法相当,但检测时间可缩短至7 h。 展开更多

关键词 沙门氏菌 鸡肉 实时荧光定量环介导等温扩增 检测

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用荧光双链引物特异扩增并定量核酸 被引量：2

6

作者 郭秋平 李庆阁 +1 位作者 栾国彦 梁基选 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期108-111,共4页

描述了一种利用特殊的双链引物———突触引物 ,用于核酸扩增的特异定量检测 .在传统的引物的 5’端标记荧光物质 ,而在引物的互补序列的 3’端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸 .二者杂交即成双链突触引物 .在制备PCR反应混合物阶段以及加... 描述了一种利用特殊的双链引物———突触引物 ,用于核酸扩增的特异定量检测 .在传统的引物的 5’端标记荧光物质 ,而在引物的互补序列的 3’端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸 .二者杂交即成双链突触引物 .在制备PCR反应混合物阶段以及加热的初期 ,突触引物保持稳定的双链结构而不能引导扩增 ,在退火阶段 ,突触引物部分解链导致引物延伸 ,荧光物质与淬灭剂分开而产生荧光 .利用人 β珠蛋白基因对此方法进行了验证 .这种可自行退火的荧光引物不仅简单地实现了实时扩增 。 展开更多

关键词 突触引物 定量检测 荧光双链引物 核酸 聚合酶链式反应 特异扩增

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SYBR荧光实时定量PCR检测非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平 被引量：8

7

作者 陈建 李敏伟 +2 位作者 张国兵 李菌 王临润 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期628-633,共6页

目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中R... 目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin的mRNA进行检测。结果:标准曲线呈良好的线性关系。标准品的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,说明基本无非特异性扩增。结论:所建SYBR荧光实时定量PCR方法操作简便,费用低,特异性好,准确度、灵敏度高,为后续研究构建了理想的平台。 展开更多

关键词 SYBR 荧光实时定量 PCR检测 非小细胞 肺癌组织 外周血 RRM1 ERCC1 BRCA1基因 表达水平 Detection quantitative real-time peripheral blood lung cancer cell gene expression 特异性扩增 管家基因 标准曲线

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用探针实时荧光定量RT—PCR法对中国田间样品中猪捷申病毒的快速检测

8

《中国猪业》 2013年第1期76-76,共1页

建立基于TaqMan探针的实时荧光定量RT—PCR技术，用于定量检测猪捷申病毒fPrVs）。根据在P1V1—11不同血清型间高度保守的5’端非编码区（5一UTR）基因序列，设计实时荧光定量RT—PCR的引物和TaqMan探针。构建含有5’～UTR的PCR扩增产... 建立基于TaqMan探针的实时荧光定量RT—PCR技术，用于定量检测猪捷申病毒fPrVs）。根据在P1V1—11不同血清型间高度保守的5’端非编码区（5一UTR）基因序列，设计实时荧光定量RT—PCR的引物和TaqMan探针。构建含有5’～UTR的PCR扩增产物的标准质粒DNA，用于建立适用于胛V的实时荧光定量RT—PCR检测技术。结果表明， 展开更多

关键词 TAQMAN探针 猪捷申病毒 荧光定量 PCR法 RT 实时 快速检测 PCR扩增产物

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新疆阿克苏地区猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2

9

作者 李虎 孙鹏亮 +3 位作者 邢潇月 张家浩 刘祥杰 李莲瑞 《塔里木大学学报》 2023年第1期45-50,共6页

本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较... 本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较好的结果。重复性试验结果中,组内变异系数在0.165%~0.588%之间,组间变异系数在0.013%~0.097%之间,变异系数均小于1%,表明本试验离散程度较小。在PCV3 TaqMan荧光定量PCR灵敏性试验中,灵敏性为3.72×10^(3)拷贝/μL,相较于传统PCR方法灵敏性增加10倍,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法为快速精准检测PCV3奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 Cap基因 实时荧光定量核酸扩增检测系统

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核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)概述 被引量：6

10

作者 张英英 谢鹏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第z1期105-106,共2页

　　随着分子牛物学技术的快速发展,体外核酸扩增技术己逐步应用于科研和临床.最近几年才兴起的核酸序列依赖性扩增法(Nuleic and sequerce based amplipicain,NASBA)同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍... 　　随着分子牛物学技术的快速发展,体外核酸扩增技术己逐步应用于科研和临床.最近几年才兴起的核酸序列依赖性扩增法(Nuleic and sequerce based amplipicain,NASBA)同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐.本文就NASBA方法作一综述.…… 展开更多

关键词 NASBA 核酸序列依赖性扩增 扩增技术 检测探针 分子灯塔 扩增反应 RNA 实时定量 携带污染 敏感性

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“突触引物”实时荧光PCR检测端粒酶活性

11

作者 李庆阁 董春升 +1 位作者 汪世溶 梁基选 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期610-613,共4页

为建立一种简便的端粒酶测定方法 ,首先采用高灵敏的核酸染料SYBRGold染色代替放射自显影 ,建立了简便可靠的扩增产物显示方法 .进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物 ,考察了突触引物检测的可行性和灵敏度 .在此基础上 ,建立了检测端粒... 为建立一种简便的端粒酶测定方法 ,首先采用高灵敏的核酸染料SYBRGold染色代替放射自显影 ,建立了简便可靠的扩增产物显示方法 .进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物 ,考察了突触引物检测的可行性和灵敏度 .在此基础上 ,建立了检测端粒酶活性实时荧光PCR .由于突触引物可以有效的降低非特异扩增 ,有效解决了端粒酶活性检测中的非特异产物干扰 。 展开更多

关键词 实时荧光PCR检测 酶活性 端粒酶 突触引物 活性检测 核酸染料 非特异扩增

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转录介导扩增技术检测慢性丙型肝炎患者血清中HCV RNA及与RT-PCR的比较 被引量：9

12

作者 吴大先 刘菲 +2 位作者 刘洪波 戴立忠 谭德明 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期664-672,共9页

目的:利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)扩增HCV RNA,并与实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)进行比较,探讨TMA系统的稳定性及其与RT... 目的:利用转录介导的扩增技术(transcription mediated amplification,TMA)扩增HCV RNA,并与实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)进行比较,探讨TMA系统的稳定性及其与RT-PCR的灵敏性差异和相关性,以及TMA临床应用的意义。方法:利用鼠白血病反转录酶(moloney murine leukemia virus,MMLV)、T7 RNA聚合酶及2条特异性引物等建立TMA扩增体系;通过HCV RNA的扩增曲线的相关性变化,评价不同储存温度对TMA扩增体系的稳定性和重复性的影响;通过扩增一组10倍梯度稀释的HCV RNA体外转录样本,评价TMA体系与RT-PCR的灵敏性差异。收集101份临床诊断为慢性丙型肝炎患者的血清,同时采用TMA试剂和RT-PCR试剂进行检测,比较两种方法的阳性检出率,并利用直线相关和回归探讨两种方法检测血清HCV RNA的相关性。结果:成功地建立了TMA扩增体系,该体系在室温下放置24 h,结果影响较大,但在4℃储存6 d,-20℃下储存6个月内扩增效果不受影响,稳定性良好。与湖南圣湘生物技术公司RT-PCR试剂检测结果的比较显示:31份血清标本TMA及RT-PCR均检测到阳性20例,阴性11例,检测一致率为100%。选取其中20例阳性标本进行定量分析,发现两种技术有很好的相关性(r=0.91,P<0.01)。与上海科华公司的RT-PCR试剂检测结果比较,发现在70份血清标本中,TMA检出RNA阳性标本数为34例,阴性标本数为36例,PCR检出RNA阳性标本数为32例,阴性标本数为38例,检测一致率为97.1%,两种检测方法阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。对其中29例PCR检测和TMA检测均有定量结果的血清进行分析,两种技术也有很好的相关性(r=0.96,P<0.01)。结论:TMA检测试剂在-20℃下储存,6个月内稳定性和重复性良好。TMA与RT-PCR均能很好地检出血清中HCV RNA,两种技术有很好的相关性,定量检测有很好的可比性。 展开更多

关键词 转录介导的扩增技术 丙型肝炎 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 丙型肝炎病毒核糖核酸

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实时荧光定量PCR技术在动物遗传育种中的应用

13

作者 张海富 籍丁艳 《农业技术与装备》 2012年第23期75-77,共3页

聚合酶链式反应技术（polymerasechainreaction简称PCR）是一项体外基因快速扩增技术。该技术的建立，使定性检测的技术得到改善，达到检测单个靶细胞的水平，以其简便易行、灵敏度高等优点被广泛应用于分子生物学及医学等领域。但其易... 聚合酶链式反应技术（polymerasechainreaction简称PCR）是一项体外基因快速扩增技术。该技术的建立，使定性检测的技术得到改善，达到检测单个靶细胞的水平，以其简便易行、灵敏度高等优点被广泛应用于分子生物学及医学等领域。但其易污染、假阳性及定量不准确等问题也日益突出。而荧光定量PCR技术（FQ—PCR）的出现解决了以上难题，实现了从定性到定量的飞跃。此方法特异性强和可靠性更强，能实现多重反应，且采用完全闭管检测，不需要PCR后处理，有效解决PCR污染问题以及EB对试验人员的伤害； 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR技术 动物遗传育种 聚合酶链式反应技术 应用 定性检测 污染问题 分子生物学 扩增技术

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环介导等温扩增技术在现场工作中的应用进展 被引量：1

14

作者 钟田雨 胡蓉 江丽霞 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第13期2225-2227,共3页

核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增... 核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增（100p—mediatedisothermalamplification．LAMP）是日本学者Notomi等于2000年发明的核酸扩增技术。与PCR技术相比，具有操作简单快速、对仪器和样本质量要求低等特点．尤其适用于现场工作使用。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 现场工作 实时荧光定量PCR 核酸扩增技术 技术操作 微生物检测 实验室人员 PCR技术

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市售食品21种动植物过敏原成分的检测分析 被引量：1

15

作者 何名扬 王鸣秋 +6 位作者 刘艳 李诗瑶 朱必婷 张涛 郭雅晴 周陶鸿 彭青枝 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第5期255-260,共6页

为进一步明确市售食品动植物过敏原标注情况,该研究建立一种可同时检测21种动植物过敏原成分的多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术,并对其进行灵敏度实验,并结合实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)检测技术对38种市售预包装食品中动... 为进一步明确市售食品动植物过敏原标注情况,该研究建立一种可同时检测21种动植物过敏原成分的多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术,并对其进行灵敏度实验,并结合实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-fqPCR)检测技术对38种市售预包装食品中动植物过敏原成分进行比较分析。结果表明,采用MLPA检测技术可同时对21种动植物过敏原成分进行检测,扩增峰之间不存在交叉干扰,扩增峰实际大小和理论大小相差≤3 bp,检出最低脱氧核糖核酸(DNA)质量浓度为1 ng/μL;RT-fqPCR、MLPA技术检测标注过敏原成分食品的检出率分别为51.5%、44.1%,此外,MLPA检测法检出了6个标注可能含有过敏原成分样品中的过敏原成分,10个样品中未标记的过敏原成分。因此,采用MLPA技术检测21种动植物过敏原成分的灵敏度更高。 展开更多

关键词 动植物过敏原 多重连接依赖性探针扩增 实时荧光定量聚合酶链式反应 多重检测

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AMSS-PCR在肺癌突变基因检测中的价值研究 被引量：1

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作者 金柯 谢绚 +6 位作者 潘越江 王科喜 陈柏深 吴多光 沈卓坚 王铭辉 张惠忠 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期815-820,共6页

背景与目的肺癌驱动基因检测具有重要意义,目前检测方法多样,临床适用性有差异。本研究旨在比较基于扩增阻碍突变系统-聚合酶链反应(Amplification Refractory Mutation System-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术的试剂盒与一代... 背景与目的肺癌驱动基因检测具有重要意义,目前检测方法多样,临床适用性有差异。本研究旨在比较基于扩增阻碍突变系统-聚合酶链反应(Amplification Refractory Mutation System-polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术的试剂盒与一代测序及ARMS-qPCR检测肺癌突变基因的敏感性和特异性,探究突变位点特异扩增法(Amplification Mutation Specific System, AMSS)-PCR技术在肺癌突变基因检测中的应用价值。方法对前期已行ARMS-PCR检测的肿瘤标本进行一代测序及试剂盒检测,比较各种方法的检测结果,并对检测结果进行统计学分析。结果本研究共收集了309例肺癌标本。试剂盒与一代测序符合率97.41%,ARMS-PCR的符合率97.73%。试剂盒与一代测序、试剂盒与实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR)、qPCR与一代测序一致性检验的Kappa值分别为0.946、0.953、0.913。试剂盒以一代测序为参照的受试者工作特征曲线(receiver operatingcharacteristiccurve,ROC)曲线下面积为0.976,以qPCR为参照的ROC曲线下面积为0.975。结论 AMSSqPCR技术能够有效检测肺癌突变基因,具有较好的临床应用价值。 展开更多

关键词 一代测序 突变位点特异扩增法 扩增阻碍突变系统 实时定量聚合酶链式反应 肺癌突变基因检测

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NASBA方法制备HIV/SHIV RNA定量测定标准品及其应用

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作者 丛喆 刘秀英 +3 位作者 侯丽波 蒋虹 陈志伟 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第8期39-43,共5页

目的应用NASBA方法制备SIV／SHIV RNA定量测定标准品。方法应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段，扩增的RNA产物（RS-NASBA）纯化后10倍系列稀释，测定定量曲线、标准曲线，测定该标准品的稳定性和重复性... 目的应用NASBA方法制备SIV／SHIV RNA定量测定标准品。方法应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段，扩增的RNA产物（RS-NASBA）纯化后10倍系列稀释，测定定量曲线、标准曲线，测定该标准品的稳定性和重复性。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCRKit，该标准品可精确定量到2．033×10 copies／μL。结论外标准品RS．NASBA纯度高，稳定性好，可用于定量测定SIV／SHIV RNA拷贝数。 展开更多

关键词 依赖核酸序列的扩增技术 病毒载量 实时荧光定量RT-PCR

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Xpert MTB/RIF检测对淋巴结结核的诊断价值 被引量：4

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作者 柯荟 桂徐蔚 顾瑾 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1318-1322,共5页

目的·分析联合利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(rifampicin resistant Mycobacterium tuberculosis semi-nested multiple real-time fluorescence quantitative system,Xpert MTB/RIF)检测对于提高淋巴结结核诊断率的意义。方... 目的·分析联合利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(rifampicin resistant Mycobacterium tuberculosis semi-nested multiple real-time fluorescence quantitative system,Xpert MTB/RIF)检测对于提高淋巴结结核诊断率的意义。方法·回顾性分析2016年1月至2018年12月在上海市肺科医院初次诊断为颈淋巴结结核并接受淋巴结穿刺的351例患者的临床资料,包括淋巴结穿刺物的结核分枝杆菌涂片、结核分枝杆菌培养、结核分枝杆菌DNA检测、病理学检测及Xpert MTB/RIF检测结果;分析不同检测方法的阳性率及结核分枝杆菌涂片、结核分支杆菌培养、结核分支杆菌DNA检测、病理学检测分别联合Xpert MTB/RIF检测的阳性率。结果·共纳入145例确诊淋巴结结核的患者。其中,结核分枝杆菌涂片阳性患者39例,结核分枝杆菌DNA阳性患者74例,Xpert MTB/RIF检出患者111例,结核分枝杆菌培养阳性患者51例,病理检测阳性患者87例。Xpert MTB/RIF检出8例利福平耐药患者,其中6例患者结核分枝杆菌培养阴性,2例患者结核分枝杆菌培养阳性并提示利福平耐药。结核分枝杆菌DNA联合Xpert MTB/RIF检测阳性率最高(91.0%),显著高于结核分枝杆菌涂片联合Xpert MTB/RIF检测(80.7%),差异有统计学意义(P=0.017);同时也高于结核分枝杆菌培养联合Xpert MTB/RIF检测(88.3%)及病理检测联合Xpert MTB/RIF检测(90.3%),但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论·联合Xpert MTB/RIF检测可提高淋巴结结核早期诊断率。 展开更多

关键词 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术 淋巴结结核 诊断 耐药

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SAT法检测人巨细胞病毒pp67 mRNA在人类免疫缺陷病毒合并人巨细胞病毒感染患者临床诊疗中的价值探讨 被引量：1

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作者 孟欢 王爽 +6 位作者 何超男 韩莹 潘美晨 殷商启 郑梅 金方方 王雅杰 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第5期739-746,共8页

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)基质表层蛋白pp67(phosphoprotein67,pp67)mRNA在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,H... 目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)基质表层蛋白pp67(phosphoprotein67,pp67)mRNA在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)合并HCMV感染患者临床诊疗中的价值。方法利用SAT技术构建检测HCMV pp67 mRNA的方法,评估SAT法检测HCMV pp67 mRNA重复性、特异性以及检测下限;收集HIV阳性HCMV活动性感染患者69例、HIV阳性HCMV非活动性/潜伏感染154例、HIV阴性HCMV非活动性/潜伏感染79例患者的血清、肺泡灌洗液、脑脊液等样本进行HCMV pp67 mRNA检测,评估特异度、灵敏度、正确率、阴性预测值、阳性预测值以及约登指数,评估HCMV pp67 mRNA在辨别HCMV活动性感染中的临床价值。结果SAT法检测HCMV pp67 mRNA的精密度(变异系数<10%)可满足临床检测要求,与其他病原体无交叉反应,特异性良好,试剂检测下限为400 copies/mL;特异度87.55%,灵敏度60.87%,正确率81.46%,阴性预测值0.88,阳性预测值0.59以及约登指数0.48;SAT法检测HCMV pp67 mRNA结果阳性率与临床诊断结果差异无统计学意义(P=0.894)。结论SAT法检测HCMV pp67 mRNA可用于HCMV活动性感染的辅助诊断。 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒 巨细胞病毒活动性感染 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 人巨细胞病毒pp67 mRNA

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兔皮肤真菌病常见检测方法

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作者 李代军 《中国畜禽种业》 2017年第1期53-54,共2页

兔皮肤真菌病是一种由病原真菌通过侵入动物表皮及毛囊引起动物皮屑增多,脱毛等相关症状的疾病。近年来,兔皮肤真菌病在世界范围内广泛流行,对养兔业发展造成了极其严重的经济损失。在美国、意大利等国家都有兔皮肤真菌病的发生。在国内... 兔皮肤真菌病是一种由病原真菌通过侵入动物表皮及毛囊引起动物皮屑增多,脱毛等相关症状的疾病。近年来,兔皮肤真菌病在世界范围内广泛流行,对养兔业发展造成了极其严重的经济损失。在美国、意大利等国家都有兔皮肤真菌病的发生。在国内,黑龙江、山东青岛地区也有该病的发生。 展开更多

关键词 皮肤真菌病 病原真菌 养兔业 随机扩增多态性 形态学方法 随机引物扩增 分子生物学方法 核酸分析技术 实时荧光定量 山东青岛

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