实时荧光定量PCR技术在水产养殖研究中的应用 被引量：1

1

作者 陈向红 何瑜 +2 位作者 郑姣妹 耿相昌 奉佳 《当代水产》 2024年第10期70-72,共3页

实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实现PCR进程的实时监测,进而对未知模板进行定量分析的一种检测技术。qPCR是在普通PCR定性检测基础上发展而来的核酸定量技术。在q... 实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实现PCR进程的实时监测,进而对未知模板进行定量分析的一种检测技术。qPCR是在普通PCR定性检测基础上发展而来的核酸定量技术。在qPCR技术发展的过程中,两项重要发现起到了关键作用:一是TaqDNA聚合酶的5’端核酸外切酶活性被发现,它能降解特异性荧光标记的探针,使得间接定量检测PCR产物成为可能;二是荧光双标记探针被使用在密闭的反应管中,能实时地监测PCR反应的全过程。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 核酸外切酶 定性检测 水产养殖 荧光基团 TAQDNA聚合酶 荧光信号 荧光标记

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实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立 被引量：55

2

作者 陈颖 徐宝梁 +3 位作者 苏宁 王媛 王丙武 葛毅强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期65-69,共5页

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <... 采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 检测 转基因大豆 内源基因Lectin 外源基因NEPSPS

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实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究 被引量：43

3

作者 陈颖 徐宝梁 +2 位作者 苏宁 葛毅强 王曙光 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期602-607,共6页

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法... 采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于 0 .0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 转基因玉米 定量检测 食品安全

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实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用 被引量：86

4

作者 袁亚男 刘文忠 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期27-30,共4页

实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用... 实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 荧光共振能量转移 荧光探针 淬灭探针

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实时荧光定量PCR技术在植物中的应用 被引量：10

5

作者 崔颖 王秀娟 +1 位作者 高山 王国泽 《湖北农业科学》 2015年第13期3073-3077,共5页

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术实现了PCR从定性到定量的转变。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分... 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术实现了PCR从定性到定量的转变。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分类及优缺点,综述了近年来实时荧光定量PCR技术在植物中的应用概况及其研究进展,旨在为该技术的进一步开发应用提供理论参考。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 原理 内参基因 植物抗逆性 转基因产品

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实时荧光定量PCR技术在植物检疫中应用的研究进展 被引量：12

6

作者 黄海泉 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第1期5-8,共4页

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。近年来,实时荧光定量PCR技术在植... 实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。近年来,实时荧光定量PCR技术在植物检疫研究上不断深入,大大提高了植物疫情的检测效率和监测防治水平。综合论述了实时荧光定量PCR技术在由真菌、细菌、病毒和线虫引发的植物疫情的检测与应用。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 植物检疫 植物病害

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实时荧光定量PCR技术的应用及研究进展 被引量：10

7

作者 李萌 李雪 郑志强 《饲料博览》 2018年第7期94-94,共1页

实时荧光定量简称PCR。该技术以PCR技术为基础进行改进得到的更加快速、灵敏、特异的核算定量技术,有着光谱高敏感性以及定量精确等特点,可以对PCR中荧光信号变化进行直接探测,从而得到定量结果。为进一步加强对该技术研究及应用,本文... 实时荧光定量简称PCR。该技术以PCR技术为基础进行改进得到的更加快速、灵敏、特异的核算定量技术,有着光谱高敏感性以及定量精确等特点,可以对PCR中荧光信号变化进行直接探测,从而得到定量结果。为进一步加强对该技术研究及应用,本文将针对其原理、特点及应用前景进行探讨。1原理Ct是荧光定量PCR技术中重要的一个值,代表着每个反应管内荧光信号在达到设定阈值过程中所需要经历循环数。在进行荧光定量PCR反应中需要加入特定波长的荧光染料或者基团,然后通过仪器对荧光物质进行监测,得到其积累信号即为PCR反应进程,从而定量定性分析起始模板。PCR反应产物随着PCR反应的进行而不断积累,同时荧光信号强度也会不断呈正比增加。荧光强度信号随着每个循环的完成而不断收集,从而通过荧光强度变化对产物量的变化进行监测,进而将结果绘制成扩增曲线图。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 应用 pcr反应 荧光信号 反应产物 直接探测 荧光染料 荧光物质

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实时荧光定量PCR技术的应用 被引量：4

8

作者 韩惠瑛 石丽瑞 张艳红 《中国畜禽种业》 2014年第3期37-39,共3页

1985年Mullis等发明了聚合酶链反应（PCR）技术，成为20世纪生物医学领域革命性创举，使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。1992年，Higuchi最早提出了实时PCR的设想。

关键词 实时荧光定量pcr技术 应用 聚合酶链反应 实时pcr 医学领域 革命性 生物 核酸

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实时荧光定量PCR技术及其在植物中的应用 被引量：2

9

作者 衡静 梁芳芳 于晓莹 《河南农业》 2013年第16期55-56,共2页

阐述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及方法,综述了近几年实时荧光定量PCR技术在转基因植物、植物病害及与植物表皮气孔变化相关激酶检测过程中的运用情况;展望了实时荧光定量PCR反应在植物核酸定性、定量检测及分析其在植物中的应用... 阐述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及方法,综述了近几年实时荧光定量PCR技术在转基因植物、植物病害及与植物表皮气孔变化相关激酶检测过程中的运用情况;展望了实时荧光定量PCR反应在植物核酸定性、定量检测及分析其在植物中的应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 植物 应用

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荧光定量PCR技术在猪病防治中的应用 被引量：1

10

作者 刘彩云 王冬娟 《中国畜牧业》 2024年第7期47-48,共2页

生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和... 生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和防治现状猪病预防成效能直接影响养殖效益,在我国农村有大量的个体户进行生猪养殖,但个体农户往往缺乏足够的养殖经验,文化水平普遍偏低. 展开更多

关键词 疾病预防工作 实时荧光定量pcr技术 猪病防治 养殖经验 个体农户 生猪养殖 养殖效益

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应用实时荧光定量PCR技术对一例猪瘟的诊断报告 被引量：2

11

作者 李霞 《中国动物保健》 2012年第10期61-61,共1页

猪瘟（HogCholera，HC），又称古典猪瘟（Classi—calSwineFever，CSF）是一种高度接触性传染的病毒病，由黄病毒科，瘟病毒属的猪瘟病毒（HCV或CSFV）引起，于1833年首先发现于美国的俄亥俄州。中国是獬攫彩新刊蓟亚重的国家之一，近... 猪瘟（HogCholera，HC），又称古典猪瘟（Classi—calSwineFever，CSF）是一种高度接触性传染的病毒病，由黄病毒科，瘟病毒属的猪瘟病毒（HCV或CSFV）引起，于1833年首先发现于美国的俄亥俄州。中国是獬攫彩新刊蓟亚重的国家之一，近些年因多科疾病歹巴亡生猪占养猪总数的8％～10％，其中1／3由HC致死，每年的直接经济陨失在20亿元人民币左右。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 古典猪瘟 诊断报告 应用 猪瘟病毒 黄病毒科 俄亥俄州 病毒病

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实时荧光定量PCR技术及应用 被引量：12

12

作者 葛忠源 熊东艳 张启勇 《中国牧业通讯》 2008年第13期12-14,共3页

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上发展起来的核酸定量技术，于1996年由美国Applied Biosystems公司推出。当前，实时荧光定量PCR技术应用范围很广，例如，能从粪便材料中分离出的细菌DNA来精确定量检测肠道菌，使我们能详细地分析... 实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上发展起来的核酸定量技术，于1996年由美国Applied Biosystems公司推出。当前，实时荧光定量PCR技术应用范围很广，例如，能从粪便材料中分离出的细菌DNA来精确定量检测肠道菌，使我们能详细地分析肠道中优势菌与荧光原位杂交（FISH）及培养方法检测不到的非优势菌，为理解肠道菌群与机体状况关系提供重要线索。该技术从原理上分为荧光染料检测模式和荧光探针检测模式两方面。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 systems公司 定量检测 荧光原位杂交 肠道菌群 常规pcr 细菌DNA

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实时荧光定量PCR及其在微生物生态学中的应用 被引量：44

13

作者 张晶 张惠文 张成刚 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1445-1450,共6页

定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的。然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情。最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰... 定量描述微生物群落的组成,在微生物生态学的许多研究领域都是非常重要的。然而由于可培养技术的局限性,定量描述微生物群落成为比较困难的事情。最近包括PCR技术在内的分子生物学技术为人们提供了有力的工具,使对微生物群落的分布、丰度等有了进一步的了解。实时荧光定量PCR技术作为核酸定量检测技术,自从发明以来在微生物生态学研究中逐渐得到了广泛的应用。从微生物生态学角度,综述了实时荧光定量PCR技术的原理、发展、优缺点及其在微生物生态学研究中的应用与研究进展,并探讨了实时荧光定量PCR技术的发展和应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 SYBR Green I 荧光探针 微生物生态学

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荧光定量PCR技术在植物研究中的应用 被引量：29

14

作者 马月萍 戴思兰 马艳蓉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期37-45,共9页

荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自问世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛。在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的... 荧光定量PCR技术是近年发展起来的一种用于基因定量分析的PCR方法,自问世以来在基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域应用较为广泛。在植物研究方面应用起步较晚,现已开始用于植物基因表达分析、外源基因基因鉴定等方面的研究。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点和试验中潜在问题和条件的优化,并对其在植物研究中的应用及前景作了探讨。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 植物 基因表达

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实时荧光定量PCR技术在动物遗传育种中的应用

15

作者 张海富 籍丁艳 《农业技术与装备》 2012年第23期75-77,共3页

聚合酶链式反应技术（polymerasechainreaction简称PCR）是一项体外基因快速扩增技术。该技术的建立，使定性检测的技术得到改善，达到检测单个靶细胞的水平，以其简便易行、灵敏度高等优点被广泛应用于分子生物学及医学等领域。但其易... 聚合酶链式反应技术（polymerasechainreaction简称PCR）是一项体外基因快速扩增技术。该技术的建立，使定性检测的技术得到改善，达到检测单个靶细胞的水平，以其简便易行、灵敏度高等优点被广泛应用于分子生物学及医学等领域。但其易污染、假阳性及定量不准确等问题也日益突出。而荧光定量PCR技术（FQ—PCR）的出现解决了以上难题，实现了从定性到定量的飞跃。此方法特异性强和可靠性更强，能实现多重反应，且采用完全闭管检测，不需要PCR后处理，有效解决PCR污染问题以及EB对试验人员的伤害； 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr技术 动物遗传育种 聚合酶链式反应技术 应用 定性检测 污染问题 分子生物学 扩增技术

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喉癌组织中环氧化酶-2（COX-2）基因表达的实时定量PCR研究

16

作者 龚树生 丁娟 常青 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期547-547,共1页

测定环氧化酶-2（COX-2）mRNA在喉鳞癌组织中的含量，并分析COX-2 mRNA与喉鳞癌临床分期及组织分化程度的关系。用序列特异性引物和荧光染料SYBR greenⅠ聚合酶链式反应（PCR）方法，检测30例原发性喉鳞癌和癌旁组织中COX-2mRNA表达，采... 测定环氧化酶-2（COX-2）mRNA在喉鳞癌组织中的含量，并分析COX-2 mRNA与喉鳞癌临床分期及组织分化程度的关系。用序列特异性引物和荧光染料SYBR greenⅠ聚合酶链式反应（PCR）方法，检测30例原发性喉鳞癌和癌旁组织中COX-2mRNA表达，采用GAPDH作对照。结果，30份标本的扩增产物经熔解曲线分析及DNA琼脂糖凝胶电泳，证实均为COX-2。COX-2mRNA在喉鳞癌中的阳性率是100％，而在癌旁组织阳性率为40％（12／30例），NCOX分别为（16．54±13．27）、（9．24±6．91），两者之间差异有显著性意义（P〈0．05），且喉癌组织中的COX-2mRNA表达水平与喉癌组织分化程度及临床分期密切相关。结果表明，应用荧光染料SYBR greenⅠ的实时定量PCR技术能够对COX-2基因表达水平进行定量分析，COX-2基因表达的上调与喉癌的发生有关，且可以作为一种有效的喉癌分子标志。 展开更多

关键词 环氧化酶-2(COX-2) 实时定量pcr技术 基因表达水平 喉癌组织 pcr研究 聚合酶链式反应(pcr) DNA琼脂糖凝胶电泳 mRNA表达 COX-2MRNA 序列特异性引物

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凡纳滨对虾卵黄蛋白原和血蓝蛋白mRNA在卵巢不同发育时期的半定量和实时荧光定量PCR分析

17

作者 方昱 蔡生力 刘红 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期209-214,共6页

卵黄蛋白原和血蓝蛋白是凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)卵巢和/或肝胰腺合成的重要蛋白。利用半定量和荧光定量PCR技术分别检测了亲虾卵巢不同发育期卵黄蛋白原和血蓝蛋白mRNA在卵巢和肝胰腺的相对表达量。结果显示,卵黄蛋白原mRNA在... 卵黄蛋白原和血蓝蛋白是凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)卵巢和/或肝胰腺合成的重要蛋白。利用半定量和荧光定量PCR技术分别检测了亲虾卵巢不同发育期卵黄蛋白原和血蓝蛋白mRNA在卵巢和肝胰腺的相对表达量。结果显示,卵黄蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中均有表达,其相对表达量随着卵巢发育持续增加,在第五期达到最高,在恢复期迅速下降。根据卵巢和肝胰腺质量的综合计算,凡纳滨对虾的卵黄蛋白中,卵巢的贡献率占主导地位,约占80%,而肝胰腺仅为卵巢的四分之一。血蓝蛋白mRNA主要在肝胰腺中表达,随着卵巢的发育,表达量呈增加趋势,至第三期达到高峰,其后稍有下降,但仍然维持在较高水平,在第六期恢复到初始水平。血蓝蛋白是否直接或间接参与了卵黄发生和卵巢发育有待进一步探讨研究。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 卵巢 肝胰腺 卵黄蛋白原 血蓝蛋白 半定量pcr技术 实时荧光定量pcr技术

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荧光定量PCR法检测饲料中的牛、羊成分 被引量：5

18

作者 黄士新 沈富林 +3 位作者 李洁 王蓓 曹莹 孙亚云 《饲料研究》 CAS 2002年第11期18-20,共3页

疯牛病是一种严重威胁畜牧业发展和人类生命安全的传染病,因此对于我们国家而言,急需建立一套严格,规范的检验标准,防止疫区的牛、羊肉骨粉通过直接或间接贸易进,本文运用荧光定量PCR法,针对牛、羊两种不同动物的特异性基因序列设计带... 疯牛病是一种严重威胁畜牧业发展和人类生命安全的传染病,因此对于我们国家而言,急需建立一套严格,规范的检验标准,防止疫区的牛、羊肉骨粉通过直接或间接贸易进,本文运用荧光定量PCR法,针对牛、羊两种不同动物的特异性基因序列设计带有不同荧光标记的特异性探针,对整个PCR过程采用实时监控,最终通过不同的荧光信息来鉴定饲料中的牛、羊成分。本方法能有效解决普通PCR的样品污染问题,具有特异性强,灵敏度高,重复性好等特点。 展开更多

关键词 饲料检验 牛 羊 肉骨粉 实时荧光定量pcr技术

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利用qRT-PCR技术对PVY重组株系的鉴定 被引量：4

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作者 尚慧 韩树鑫 +6 位作者 高艳玲 张威 范国权 申宇 聂先舟 吕文河 白艳菊 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期238-244,共7页

【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)作为制约马铃薯生产的重要病毒之一,株系分化繁杂。近年被科学家研究分离的PVY^(N-Wi)和PVY^(NTN-NW)株系而言,其基因组结构极为相似但致病性差异较大。【方法】本研究利用qRT-PCR方法,方便快... 【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)作为制约马铃薯生产的重要病毒之一,株系分化繁杂。近年被科学家研究分离的PVY^(N-Wi)和PVY^(NTN-NW)株系而言,其基因组结构极为相似但致病性差异较大。【方法】本研究利用qRT-PCR方法,方便快捷的检测出马铃薯Y病毒的这2种不同株系,同时并使之可成功且稳定的应用于马铃薯生产中。通过查找Gen Bank已公布的PVY^(N-Wi)和PVY^(NTN-NW)株系的全基因组序列,设计用于qRT-PCR检测,扩增目的片段大小为150 bp左右的特异性引物,应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)进行检测。【结果】通过设计的引物对保存的试管苗毒源进行检测,可以成功的精准鉴别出PVY^(N-Wi)和PVY^(NTN-NW)株系;同时对100份田间采集的叶片样品进行检测,成功的检测出100份样品中32份样品,受到PVY^(N-Wi)株系侵染;27份样品,受到PVY^(NTN-NW)株系侵染;同时存在9份样品,可能同时受到PVY^(N-Wi)、PVY^(NTN-NW)株系的侵染。【结论】实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)可适用于马铃薯叶片样品的检测,为株系的快速鉴定提供了可靠的方法,可用于生产中大规模样品的检测,有利于及时采取防控措施,降低损失。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒(PVY) 株系分化 实时荧光定量pcr技术(qRT-pcr)

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实用荧光定量PCR在结核性脑膜炎诊断中的应用 被引量：2

20

作者 李秀武 杨永辉 +2 位作者 李志惠 李晓霞 秦立志 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第8期471-473,共3页

关键词 实时荧光定量pcr技术 结核性脑膜炎 早期诊断 肺外结核病 应用 抗酸染色法 脑膜炎病人 神经系统

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