唇形后口虫SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

1

作者 郝文悦 王锦锦 +9 位作者 葛建龙 李彬 王印庚 廖梅杰 荣小军 赵宏晶 江敏棋 赵文广 牛立成 潘娇 《渔业科学进展》 北大核心 2025年第3期183-193,共11页

后口虫病是近年来影响刺参(Apostichopus japonicus)养殖效益的重要病害种类之一。唇形后口虫(Boveria labialis)是刺参后口虫病的病原。由于缺乏针对该物种的快速、准确的检测方法,研究人员难以系统解析该病原体的传播途径。本研究以... 后口虫病是近年来影响刺参(Apostichopus japonicus)养殖效益的重要病害种类之一。唇形后口虫(Boveria labialis)是刺参后口虫病的病原。由于缺乏针对该物种的快速、准确的检测方法,研究人员难以系统解析该病原体的传播途径。本研究以测序获得的唇形后口虫部分线粒体基因组序列为基础,根据nad10基因序列设计唇形后口虫引物,建立其SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并对刺参不同养殖区和不同养殖模式下养殖系统中唇形后口虫载量进行检测分析。结果显示,设计的唇形后口虫引物在质粒标准品4.05×10^(1)~4.05×10^(9) copies/μL范围内建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数R^(2)=0.997,熔解曲线呈现单一峰,无引物二聚体或非特异性扩增;灵敏度实验最低检测限为40.5 copies/μL;所设计的引物仅对唇形后口虫出现特异性扩增,对海洋尾丝虫(Uronema marinum)、贪食纤口虫(Chaenea vorax)、僧帽肾形虫(Colpoda cucullus)和多小核草履虫(Paramecium multi-micronuleatum)无交叉反应;重复性实验中各浓度的批内和批间Ct值均一性较高,批内实验变异系数(CV)值为0.32%~0.82%,批间实验CV值为0.40%~0.88%,稳定性较好。利用本方法对4种刺参养殖模式不同养殖区的环境样品和饲料进行检测,结合镜检结果对比分析发现,海水中唇形后口虫DNA载量与刺参体内唇形后口虫量呈中度正相关(R=0.563),底泥、附着物样品中的唇形后口虫DNA载量与刺参体内唇形后口虫量呈高度正相关(R=0.931)。推测,鲜海泥是唇形后口虫传播的重要载体之一。本研究结果可为唇形后口虫的快速检测、传播途径解析和防控提供参考。 展开更多

关键词 刺参 寄生性疾病 唇形后口虫 实时荧光定量PCR检测 传播途径

在线阅读 下载PDF 职称材料

聚合酶键式反应生物芯片/微装置的实时定量荧光检测

2

作者 章春笋 徐进良 《分析科学学报》 CAS CSCD 2006年第1期102-107,共6页

以微电子机械系统技术而发展起来的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re-action,PCR)生物芯片/微装置,由于具有所需样品和反应混合物体积少,反应速度快以及集成化程度高等优点而日益引起人们的重视。实时定量PCR是利用能特异标记PCR产... 以微电子机械系统技术而发展起来的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re-action,PCR)生物芯片/微装置,由于具有所需样品和反应混合物体积少,反应速度快以及集成化程度高等优点而日益引起人们的重视。实时定量PCR是利用能特异标记PCR产物的荧光染料来动态显示PCR产物的累积,从而得到PCR扩增曲线的技术。本文介绍了实时定量检测技术及其在PCR生物芯片/微装置中的应用。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应(PCR) 实时定量检测 生物芯片/微装置 荧光检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

土壤中茄科雷尔氏菌实时荧光定量PCR快速检测体系的建立与应用 被引量：6

3

作者 张海燕 张小芳 +3 位作者 魏兰芳 李雪 艾瑛 姬广海 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第14期17-20,共4页

根据茄科雷尔氏菌eg1基因,设计1对特异性引物,建立并优化实时荧光定量PCR反应体系,并对土壤中的茄科雷尔氏菌进行检测和评估。对采自云南省文山州5个县的100份青枯病带菌土壤进行检测,结果表明,100份土壤样品中,广南县15、22、24号,丘北... 根据茄科雷尔氏菌eg1基因,设计1对特异性引物,建立并优化实时荧光定量PCR反应体系,并对土壤中的茄科雷尔氏菌进行检测和评估。对采自云南省文山州5个县的100份青枯病带菌土壤进行检测,结果表明,100份土壤样品中,广南县15、22、24号,丘北县31、35、43号,麻栗坡县62、67、68号,马关县70、74、78、79、80、83、84号,共16份土壤样品中茄科雷尔氏菌含量大于105CFU/m L,预测细菌性青枯病发病风险较高;广南县12、20、21、23、26、27、29号,丘北县30、33、34、37、38、39、46、48号,麻栗坡县50、52、54、58、59、60、61、63、64、65、66、69号,马关县71、72、73、75、76、77、81、82、85、86号,砚山县1、2、4、5、7、9号,共43份土壤样品检测出的茄科雷尔氏菌含量在104~105CFU/m L之间,预测细菌性青枯病发病风险中等;其他土壤样品检测出的茄科雷尔氏菌含量均小于103CFU/m L,预测细菌性青枯病发病风险低,其中砚山县3、10、87、88、89、90号,广南县14、19、25、28、91、92、93号,丘北县32、36、44、49、94、95、96号,麻栗坡县51、57、97、98、99、100号,共26份土壤样品中未检测出茄科雷尔氏菌。 展开更多

关键词 茄科雷尔氏菌 实时荧光定量PCR检测 快速检测体系 细菌性青枯病

在线阅读 下载PDF 职称材料

实时荧光定量检测技术及应用 被引量：6

4

作者 李秉鸿 《动物医学进展》 CSCD 2003年第5期4-6,25,共4页

随着现代医学和分子生物学的飞速发展 ,近年来在病原体的鉴别诊断方面 ,不断研究和开发了一些先进的检验新技术 ,Taq Man荧光探针脱颖而出。这项新技术日臻成熟并开始大量应用于临床实践中。它实时、准确、定量和高度重现性的特点优于... 随着现代医学和分子生物学的飞速发展 ,近年来在病原体的鉴别诊断方面 ,不断研究和开发了一些先进的检验新技术 ,Taq Man荧光探针脱颖而出。这项新技术日臻成熟并开始大量应用于临床实践中。它实时、准确、定量和高度重现性的特点优于其它核酸扩增技术 ,在医学检验领域中颇受关注 ,在兽医诊断应用中也开始被采用。文章就这一新的检测技术的原理、特点、应用和研究进展进行综述并与常规 展开更多

关键词 实时荧光定量检测 医学 分子生物学 病原体 鉴别诊断 TaqMan荧光探针

在线阅读 下载PDF 职称材料

CCR5 mRNA的实时RT-PCR定量检测

5

作者 唐力 王斌 +3 位作者 赖建平 Steven D.Douglas 霍文哲 杨继红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期558-558,560,共2页

关键词 CCR5mRNA 实时RT-PCR定量检测 分子信标 引物 设计

在线阅读 下载PDF 职称材料

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术及环介导等温扩增技术在结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：13

6

作者 冉燕 赵建军 +1 位作者 张建勇 宗兆婧 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第24期3416-3419,共4页

目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核... 目的评价脑脊液利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)及脑脊液环介导等温扩增技术(LAMP)在结核性脑膜炎中的诊断价值。方法收集临床诊断为结核性脑膜炎住院患者110例,随机收集60例为结核性脑膜炎A组,50例为结核性脑膜炎B组,另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液20例为对照组(CG组)。其中结核性脑膜炎A组患者入院后抽取脑脊液送脑脊液常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF,结核性脑膜炎B组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养和LAMP,CG组患者送脑脊液作常规、生化、结核菌涂片、结核菌培养、GeneXpert MTB/RIF和LAMP。结果结核性脑膜炎A组脑脊液GeneXpert MTB/RIF阳性32例,其中利福平耐药基因检测阳性3例,结核性脑膜炎A组脑脊液结核菌涂片、培养、GeneXpert MTB/RIF阳性率分别为8.3%(5/60)、16.7%(10/60)和53.0%(32/60)。结核性脑膜炎B组50例脑脊液结核菌涂片、结核菌培养、LAMP,阳性率分别为8.0%(4/50),18.0%(9/50)和58.0%(29/50),CG组脑脊液GeneXpert MTB/RIF和脑脊液LAMP均为阴性。结论脑脊液GeneXpert MTB/RIF及脑脊液LAMP均为早期诊断结核性脑膜炎的较好方法。 展开更多

关键词 结核 脑膜炎 脑脊液 利福平 耐药 利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术 环介导等温扩增技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

新疆阿克苏地区猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2

7

作者 李虎 孙鹏亮 +3 位作者 邢潇月 张家浩 刘祥杰 李莲瑞 《塔里木大学学报》 2023年第1期45-50,共6页

本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较... 本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较好的结果。重复性试验结果中,组内变异系数在0.165%~0.588%之间,组间变异系数在0.013%~0.097%之间,变异系数均小于1%,表明本试验离散程度较小。在PCV3 TaqMan荧光定量PCR灵敏性试验中,灵敏性为3.72×10^(3)拷贝/μL,相较于传统PCR方法灵敏性增加10倍,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法为快速精准检测PCV3奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 Cap基因 实时荧光定量核酸扩增检测系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

入境旅客携带苹果中粉红聚端孢菌的检测与鉴定 被引量：1

8

作者 许萍萍 粟寒 +4 位作者 王振华 刘中慧 李甜甜 李彬 吴翠萍 《湖北农业科学》 2018年第2期67-72,共6页

首次建立了粉红聚端孢菌(Trichothecium roseum)实时荧光定量PCR检测方法,该检测方法扩增效率高、特异性好,灵敏度可达0.1 pg菌丝体DNA量;结合形态学观察及致病性测定,对从机场入境旅客携带的苹果中分离到的1株疑似菌株Tr-1685进行检测... 首次建立了粉红聚端孢菌(Trichothecium roseum)实时荧光定量PCR检测方法,该检测方法扩增效率高、特异性好,灵敏度可达0.1 pg菌丝体DNA量;结合形态学观察及致病性测定,对从机场入境旅客携带的苹果中分离到的1株疑似菌株Tr-1685进行检测和鉴定。Tr-1685实时荧光PCR检测结果为阳性。该菌株在PDA培养基上生长较快,菌落平展,边缘不规则,表面形成淡粉红色的霉层,产孢量丰富。分生孢子梗直立,长短不一,顶端着生分生孢子。分生孢子双细胞、光滑、棍棒状,平均大小为17.5μm×8.7μm,基部细胞弯曲状。该病原菌接种苹果4 d后,出现褐色腐烂,8 d后出现淡粉色霉层及分生孢子。分离获得的菌株Tr-1685鉴定为粉红聚端孢菌,与实时荧光PCR结果一致。 展开更多

关键词 粉红聚端孢菌(Trichothecium roseum) 入境旅客 苹果 鉴定 实时荧光定量PCR检测方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

浙江省金华市柑橘黄龙病检测及柑橘木虱分布情况调查 被引量：3

9

作者 刘顺民 吕佳 +6 位作者 杜丹超 蒲占湑 张利平 朱莉 黄振东 陈国庆 鹿连明 《浙江农业科学》 2023年第11期2723-2728,共6页

为了解浙江省金华市柑橘主要种植区内柑橘黄龙病及媒介昆虫柑橘木虱的发生情况,本研究在金华市5个县市区16个乡镇街道进行柑橘黄龙病和柑橘木虱发生情况调查与采样,调查研究结果如下,采集的210份样品中检测出13份样品携带黄龙病菌,黄龙... 为了解浙江省金华市柑橘主要种植区内柑橘黄龙病及媒介昆虫柑橘木虱的发生情况,本研究在金华市5个县市区16个乡镇街道进行柑橘黄龙病和柑橘木虱发生情况调查与采样,调查研究结果如下,采集的210份样品中检测出13份样品携带黄龙病菌,黄龙病菌检出率达6.2%,其中永康市唐先镇样品检出率最高,达20.0%,此外武义县白洋街道,婺城区洋埠镇、罗埠镇,永康市花街镇样品检出率均超过10.0%;通过对黄龙病菌16S rDNA进行特异性扩增,发现克隆后的测序结果与已报道的亚洲柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)相似性均在99.5%以上。金华市下辖的兰溪市、婺城区、金东区、武义县及永康市均有柑橘木虱的发生,其中永康市柑橘木虱发生率最高,达到83.3%,兰溪市柑橘木虱发生密度最高,成虫虫口密度为21.0头·株^(-1),有虫株率为41.9%。综合黄龙病检测结果与柑橘木虱发生情况表明,金华市下辖的兰溪市、婺城区、武义县和永康市属于黄龙病和柑橘木虱发生重叠区。 展开更多

关键词 黄龙病 柑橘木虱 实时荧光定量PCR检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

虚拟仿真在“生物技术药物学实验”中的应用 被引量：4

10

作者 张倩倩 徐立朋 +3 位作者 马志国 郭钟雪 陆小云 王峰 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2024年第8期171-174,193,共5页

由于许多实验环境无法满足新冠病毒取样和检测的要求,且病原微生物新冠病毒具有强传染性和致病性,学生很难开展感染性实验操作。因此,将虚拟仿真技术与新冠病毒实时荧光定量PCR检测相结合构建了虚拟实验平台,其中涵盖实验导学、临床取... 由于许多实验环境无法满足新冠病毒取样和检测的要求,且病原微生物新冠病毒具有强传染性和致病性,学生很难开展感染性实验操作。因此,将虚拟仿真技术与新冠病毒实时荧光定量PCR检测相结合构建了虚拟实验平台,其中涵盖实验导学、临床取样及实时荧光定量PCR检测等主要内容,重点模拟RNA提取、病毒序列获取与分析、引物设计、反转录、实时荧光定量PCR及结果分析等操作。通过虚拟环境,在保障学生安全的基础上,让学生更深入地了解新冠病毒实时荧光定量PCR的检测,大大提高了生物技术药物学实验教学的效率。 展开更多

关键词 虚拟仿真技术 生物技术药物学实验 新冠病毒的实时荧光定量PCR检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

酸浆乙酸乙酯活性部位抗胃溃疡的机制研究 被引量：1

11

作者 王勇 李会天 +3 位作者 张炯怡 谢明军 宋晓宁 马莹 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第4期74-81,共8页

为了研究幽门结扎和乙醇诱导两种胃溃疡模型对酸浆乙酸乙酯活性部位抗胃溃疡的作用机理,采用幽门结扎胃溃疡模型测定胃液量、游离酸、总酸量及蛋白酶活性,采用乙醇诱导胃溃疡模型检测血浆中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(S... 为了研究幽门结扎和乙醇诱导两种胃溃疡模型对酸浆乙酸乙酯活性部位抗胃溃疡的作用机理,采用幽门结扎胃溃疡模型测定胃液量、游离酸、总酸量及蛋白酶活性,采用乙醇诱导胃溃疡模型检测血浆中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和组织匀浆液中表皮生长因子(EGF)的表达;通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)分析胃粘膜中环氧化酶1和2(COX-1/2)的蛋白表达和mRNA表达。结果显示:EAF以100、250和500 mg/kg 3个剂量灌胃时,均能显著降低胃液量、游离酸、总酸和胃蛋白酶活性(P<0.05)。EAF中、高剂量组能显著增加血浆中NO含量和SOD活性(P<0.05),降低MDA水平(P<0.01),上调胃组织匀浆液中EGF表达(P<0.05)。关于EAF对COX蛋白和mRNA表达的影响,COX-1的表达水平无显著差别(P>0.05),EAF各剂量组与模型组和对照组相一致。但相对于模型组,EAF各剂量组明显抑制COX-2蛋白和mRNA表达的上调(P<0.05)。EAF可能通过对大鼠胃液量、游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性的抑制,促进氧自由基清除剂SOD、保护因子NO和EGF的合成,降低MDA的损害和抑制COX-2信号通路,从而提高溃疡愈合质量。 展开更多

关键词 酸浆乙酸乙酯活性部位 胃溃疡 蛋白质印迹法 实时荧光定量核酸扩增检测系统 环氧化酶1/2 机制

在线阅读 下载PDF 职称材料