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双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒
1
作者 邓迎春 郭旭光 +3 位作者 牛会敏 任宝红 韩小改 郭瑞 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第12期151-157,共7页
目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型... 目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。 展开更多
关键词 荧光逆转录-聚合酶链式反应 恒温荧光逆转录-重组酶介导等温扩增 GⅠ型诺如病毒 GⅡ型诺如病毒
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竞争性逆转录-聚合酶链反应对哮喘患者诱导痰白细胞介素-10基因表达的定量分析 被引量：1
2
作者 何梦璋 梁剑辉 徐军 《医学研究生学报》 CAS 2007年第1期49-52,共4页
目的:建立竞争性逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量方法,监测哮喘患者白细胞介素-10(IL-10)基因的表达水平,探讨IL-10在哮喘气道炎症中的作用和临床意义。方法:用酶切法构建IL-10内标分子,用已知量的该内标分子,通过竞争性RT-PCR对哮喘组... 目的:建立竞争性逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量方法,监测哮喘患者白细胞介素-10(IL-10)基因的表达水平,探讨IL-10在哮喘气道炎症中的作用和临床意义。方法:用酶切法构建IL-10内标分子,用已知量的该内标分子,通过竞争性RT-PCR对哮喘组(30例)和对照组(29例)的诱导痰和外周血IL-10 mRNA进行定量分析。结果:哮喘发作期患者的诱导痰和外周血绝大多数未检测到IL-10 mRNA,部分缓解期患者有少量IL-10 mRNA表达。健康对照者外周血和诱导痰均有IL-10 mRNA表达。结论:哮喘患者的气道炎症过程与IL-10基因表达有关,且存在IL-10转录水平的合成障碍。 展开更多
关键词 竞争性逆转录-聚合酶链反应 白细胞介素-10 支气管哮喘
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多重荧光定量聚合酶链式反应法检测水牛乳中黄牛源性成分
3
作者 梁媛媛 赵娇 +1 位作者 崔生熠 刘鹏鹏 《现代食品》 2025年第1期150-154,159,共6页
目的:建立多重荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法同时检测水牛乳中水牛、黄牛这2种牛源性成分。方法:设计基于cytb基因的特异性引物和探针,通过优化反应体系的退火温度和循环参数,建立一种能在同一反应体系内快... 目的:建立多重荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法同时检测水牛乳中水牛、黄牛这2种牛源性成分。方法:设计基于cytb基因的特异性引物和探针,通过优化反应体系的退火温度和循环参数,建立一种能在同一反应体系内快速检测水牛和黄牛源性成分的多重荧光定量PCR方法。同时,对该方法进行特异性、灵敏度、重复性等方法学验证。结果:该方法特异性强,能特异性检出水牛、黄牛源性成分;该方法灵敏度可达核酸浓度1.0×10^(-4) ng·μL^(-1),且重复性较好。结论:该方法操作简单,具有通量高、特异性强、灵敏度高和重复性好等优点,适用于水牛乳样品中水牛、黄牛源性成分的掺假鉴别和快速检测。 展开更多
关键词 多重荧光定量聚合酶链式反应 水牛乳 牛源性成分 快速检测
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高效液相色谱法分析逆转录聚合酶链反应产物
4
作者 廖杰 赵玉兰 +2 位作者 董芳霆 杨军 郝秀华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期491-492,共2页
建立了分离逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ）产物的高效液相色谱方法，反应液直接进样， 用 Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｎ Ｐ Ｒ 柱分离， Ｔｒｉｓ Ｈ Ｃｌ 缓冲溶液（ｐ Ｈ ９０）氯化钠线性梯度洗脱，于 ２６０... 建立了分离逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ）产物的高效液相色谱方法，反应液直接进样， 用 Ｔ Ｓ Ｋ ｇｅｌ Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｎ Ｐ Ｒ 柱分离， Ｔｒｉｓ Ｈ Ｃｌ 缓冲溶液（ｐ Ｈ ９０）氯化钠线性梯度洗脱，于 ２６０ ｎｍ 处检测。用所建立的方法分析了大鼠肠缺血／再灌注损伤后外周血中性粒细胞（ Ｐ Ｍ Ｎ）磷脂酶 Ａ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达。 展开更多
关键词 逆转录 聚合酶链反应 磷脂酶A2 PMN MRNA 表达
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实时逆转录聚合酶链式反应检测活的金黄色葡萄球菌
5
作者 张冲 刘祥 陈计峦 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期170-175,共6页
针对基于DNA水平的聚合酶链式反应(DNA-PCR)检测食品中金黄色葡萄球菌时会出现假阳性结果的缺点,建立一种能够区分死、活金黄色葡萄球菌的检测方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因,自设计Taqman探针、引物,采用一步法逆转录聚合酶链式反... 针对基于DNA水平的聚合酶链式反应(DNA-PCR)检测食品中金黄色葡萄球菌时会出现假阳性结果的缺点,建立一种能够区分死、活金黄色葡萄球菌的检测方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因,自设计Taqman探针、引物,采用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以femA mRNA为检测对象,发现只有活的金黄色葡萄球菌显阳性,死亡的则呈阴性;纯培养时,重复检测变异系数为0.15,灵敏度为9×102CFU/mL,检出限可达1/3 CFU/3 mL。实验表明,该研究所建立的一步法逆转录聚合酶链式反应检测法,不仅灵敏度高、特异性强,而且能够有效地区分死、活金黄色葡萄球菌。 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链式反应 金黄色葡萄球菌 死活菌 普通聚合酶链式反应
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反应体系混匀与否对新型冠状病毒实时荧光逆转录聚合酶链反应检测结果的影响
6
作者 杨志 秦冬梅 +1 位作者 周波 肖光军 《临床医药实践》 2022年第11期824-827,共4页
目的:探讨反应体系混匀与否对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果的影响。方法:两种不同逆转录时长的实时荧光PCR法试剂均按以下方法处理。试剂盒内自带的阳性对照用生理盐水配制成稀释度为1∶1,1∶1... 目的:探讨反应体系混匀与否对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果的影响。方法:两种不同逆转录时长的实时荧光PCR法试剂均按以下方法处理。试剂盒内自带的阳性对照用生理盐水配制成稀释度为1∶1,1∶10,1∶100三个浓度水平的试验样本。每个浓度水平的样本检测16次,其中8次的混匀体系先混匀再瞬离后上机检测(混匀组),而另外8次的反应体系则直接瞬离后上机检测(非混匀组),检测结果以阈值循环数(Ct值)表示。比较每个浓度水平混匀组与非混匀组的结果差异。当组间差异具有统计学意义时,则进一步分析差异有无临床意义(实际意义),当两组的均值之差在0.5以内,则认为差异无临床意义。结果:对于逆转录时间较长的试剂,各浓度水平组间差异均无统计学意义(P>0.05);对于逆转录时间较短的试剂,部分组间差异具有统计学意义(P<0.05),但无临床意义(组间均值之差在0.5以内)。结论:用实时荧光RT-PCR法检测新型冠状病毒核酸时,反应体系混匀与否对检测结果无影响。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 逆转录聚合酶链反应 检测结果
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逆转录聚合酶链反应检测血清中丙型肝炎病毒RNA
7
作者 彭梅 代长柏 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第S1期6-7,共2页
本文用本所自己合成的引物，对３０份怀疑ＨＣＶ感染血清进行ＨＣＶＲＮＡＲＴ－ＰＣＲ检测。该３０份血清中，２２份抗－ＨＣＶ阳性，其中１８份ＨＣＶＲＮＡ为阳性，８份抗－ＨＣＶ阴性血清及怀疑阳性血清中，２份ＨＶＣＲＮＡ为阳性... 本文用本所自己合成的引物，对３０份怀疑ＨＣＶ感染血清进行ＨＣＶＲＮＡＲＴ－ＰＣＲ检测。该３０份血清中，２２份抗－ＨＣＶ阳性，其中１８份ＨＣＶＲＮＡ为阳性，８份抗－ＨＣＶ阴性血清及怀疑阳性血清中，２份ＨＶＣＲＮＡ为阳性。结果提示，抗－ＨＣＶ抗体试剂盒用于检测急性ＨＣＶ感染有其不足之处，结合ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ的方法可提高急性ＨＣＶ感染的检出率。 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链反应 丙型肝炎
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实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测4种食源性致病弧菌 被引量：2
8
作者 马晨晨 宋昌彦 +4 位作者 马梦杰 彭国瑜 刘平平 李云峰 许剑锋 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第21期22-31,共10页
目的建立和优化4种食源性致病弧菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)快速检测方法。方法基于副溶血性弧菌的toxR基因(GenBank ID:MH047287.1)、霍乱弧菌的ompW基因(GenBank ID:MF10... 目的建立和优化4种食源性致病弧菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)快速检测方法。方法基于副溶血性弧菌的toxR基因(GenBank ID:MH047287.1)、霍乱弧菌的ompW基因(GenBank ID:MF100046.1)、拟态弧菌的toxR基因(GenBank ID:EF693743)和创伤弧菌的vvhA基因(GenBank ID:KC821520.1)设计常规PCR引物和qPCR特异性引物和探针。分别建立副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌4种食源性致病弧菌的单重qPCR检测体系,根据扩增曲线和Ct值对探针浓度进行优化,设置探针浓度梯度。结果4种弧菌的探针最适浓度均为0.1µmol/L。对设计的4种弧菌的引物分别进行常规PCR的扩增,其最低检出限均为1×10^(5) copies/µL,4种弧菌分别进行单重qPCR的最低检出限均为1×10^(1) copies/µL,扩增效率均接近100%。qPCR的灵敏度均高于常规PCR。特异性实验结果表明,4种目的弧菌DNA扩增出特异性曲线,其他的非目的基因未被扩增出扩增曲线。结论该方法准确度和灵敏度高,前处理简单快速,适用于4种食源性致病弧菌的荧光定量PCR快速检测。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 霍乱弧菌 拟态弧菌 创伤弧菌 荧光定量聚合酶链式反应
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逆转录聚合酶链反应检测脑脊液中肠道病毒RNA 被引量：2
9
作者 陈宗波 李福年 董永绥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期104-104,共1页
关键词 聚合酶链反应 肠道病毒 RNA 脑脊液
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SYBR GreenⅠ染料-实时荧光定量聚合酶链式反应法检测发酵乳中的霉菌和酵母含量 被引量：1
10
作者 张捷 李献 +4 位作者 张瑞 刘雨蒙 明若阳 陈佳 周巍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第16期31-38,共8页
目的建立一种应用SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量聚合酶链式反应法快速检测发酵乳中的霉菌和酵母菌。方法本研究针对霉菌与酵母菌的保守序列设计引物,确定最优反应体系与反应条件。通过熔解曲线以及非目标菌株的检测验证该方法的特异性... 目的建立一种应用SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量聚合酶链式反应法快速检测发酵乳中的霉菌和酵母菌。方法本研究针对霉菌与酵母菌的保守序列设计引物,确定最优反应体系与反应条件。通过熔解曲线以及非目标菌株的检测验证该方法的特异性;通过菌悬液的梯度稀释检测确定该方法的灵敏度;通过菌悬液与发酵乳样品混合后进行检测,确定该方法的检出限,并得到标准曲线。结果该方法能够特异性的检测发酵乳中的霉菌、酵母菌,无交叉反应。该方法检测霉菌、酵母菌的灵敏度均为10^(2) CFU/mL,并且当菌悬液与发酵乳样品混合后,并没有降低该方法的检出限。在10^(2)~10^(6) CFU/mL浓度范围内,菌液浓度的对数值与循环阈值(cyclethreshold,Ct)具有良好的线性关系,可以在市售样品的检测中通过Ct值计算样品中目标菌的含量,更快的判断发酵乳是否被霉菌、酵母菌污染。结论该方法可用于发酵乳中霉菌和酵母菌的快速检测,为发酵乳的食品安全提供了技术保障。 展开更多
关键词 霉菌 酵母 SYBR GreenⅠ染料 检测 实时荧光定量聚合酶链式反应 发酵乳
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多重荧光定量聚合酶链反应法检测肉制品中的3种食源性致病菌 被引量：1
11
作者 孙新城 李爽 +4 位作者 李侠颖 周杰 曹亚新 王宏伟 张晓根 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第9期37-43,共7页
目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大... 目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。 展开更多
关键词 沙门氏菌 单增李斯特菌 大肠杆菌O157:H7 多重荧光定量聚合酶链反应法
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Taq Man探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测低温酸乳中常见的霉菌和酵母 被引量：1
12
作者 张捷 陈勃旭 +4 位作者 杜海宽 张子仑 严陶陶 陈佳 周巍 《乳业科学与技术》 2024年第5期20-24,共5页
为提高低温酸乳中霉菌和酵母菌检测效率,根据保守基因延伸因子1α(elongation factor 1α,EF-1α)序列分别针对霉菌与酵母菌设计引物与探针,利用实时荧光定量聚合酶链式反应,基于TaqMan探针分别建立霉菌和酵母菌检测方法。以低温酸乳中... 为提高低温酸乳中霉菌和酵母菌检测效率,根据保守基因延伸因子1α(elongation factor 1α,EF-1α)序列分别针对霉菌与酵母菌设计引物与探针,利用实时荧光定量聚合酶链式反应,基于TaqMan探针分别建立霉菌和酵母菌检测方法。以低温酸乳中常见真菌与乳酸菌基因组DNA为扩增模板进行特异性检验,并对方法灵敏度与重复性进行检验,同时构建标准曲线。结果表明:根据EF-1α基因设计的引物与探针特异性良好;所构建的标准曲线相关系数均大于0.99;该方法检测酵母菌的灵敏度为101 CFU/mL,检测霉菌的灵敏度为102 CFU/mL;重复性检验中组内与组间的变异系数均小于2%,表明方法具有良好的可靠性与稳定性,适用于低温酸乳中霉菌与酵母菌的快速检测。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 霉菌 酵母 实时荧光定量聚合酶链式反应 低温酸乳
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双重数字聚合酶链式反应定量检测转基因马铃薯EH92-527-1品系
13
作者 孙敏 高宏伟 +3 位作者 王金花 李瑞 张倩 林青宇 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第12期20-26,共7页
目的建立双重数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)精准定量检测转基因马铃薯EH92-527-1品系的方法。方法基于马铃薯内参UGPase基因和EH92-527-1品系外源插入片段旁侧序列,设计合成引物和探针,确定反应体系和反应条件,建... 目的建立双重数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)精准定量检测转基因马铃薯EH92-527-1品系的方法。方法基于马铃薯内参UGPase基因和EH92-527-1品系外源插入片段旁侧序列,设计合成引物和探针,确定反应体系和反应条件,建立转基因马铃薯EH92-527-1品系双重数字PCR定量检测方法。对方法的特异性、定量检测范围、定量限、检测准确度进行评估。结果该方法特异性良好,除转基因马铃薯EH92-527-1品系外,其他物种和品系均无扩增;在线性范围内,内参基因和品系特异性基因拷贝数的相对标准偏差值介于0.86%~22.90%,线性决定系数r^(2)>0.99;品系特异性基因的定量限为3拷贝;不同浓度样品EH92-527-1品系含量测定值与真实值之间的偏差分别为1.54、4.92和–1.31。结论方法具有良好的重复性和准确度,可以用于进出口产品中转基因马铃薯EH92-527-1成分的定性定量检测。该方法的建立对于转基因马铃薯及其制品的监控监管、安全评价和风险预警具有重要意义。 展开更多
关键词 转基因马铃薯 双重数字聚合酶链式反应 定量检测
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多重实时荧光定量聚合酶链式反应在芝麻酱掺假鉴别中的应用
14
作者 陈茵茵 梁颖思 +5 位作者 陈宝欣 丁清龙 苏章庭 韩志杰 陈玥 郑玥 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第12期199-209,共11页
目的研究基于分子生物学技术,建立多重实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测芝麻酱中的植物源性成分,实现芝麻酱的快速掺假鉴别,突破单标准单物种检测的局限性。方法该研究以芝麻2S albumim mRNA基因、花... 目的研究基于分子生物学技术,建立多重实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测芝麻酱中的植物源性成分,实现芝麻酱的快速掺假鉴别,突破单标准单物种检测的局限性。方法该研究以芝麻2S albumim mRNA基因、花生Ara b2基因、大豆Lectin基因、玉米adh1基因设计特异性引物和探针,优化反应体系,建立多重实时荧光定量PCR技术检测芝麻酱中的芝麻源性成分、花生源性成分、大豆源性成分、玉米源性成分,并应用于市售的芝麻酱样本检测分析。结果该方法高效低成本,特异性好,对小米、绿豆等10种非目标源性成分无特异性扩增;对芝麻源性成分、花生源性成分、大豆源性成分、玉米源性成分的最低检出限为100 pg/μL,具有较高的灵敏度;应用建立的方法,对市售21份芝麻酱样本进行检测分析,检测结果与标签标注不符合的有4份,标签标注符合率为80.95%,与参比方法检测结果一致。结论建立的多重实时荧光定量PCR技术对加工成品的检测具有较好的适用性,为芝麻酱的掺假鉴别提供了一种新的分子生物学方法。 展开更多
关键词 多重实时荧光定量聚合酶链式反应 芝麻酱 植物源性成分 掺假鉴别
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逆转录　巢式聚合酶链反应(RT-PCR)检测庚型肝炎病毒RNA在临床上的应用
15
作者 王长奇 兰桂英 《江西煤炭科技》 1998年第2期42-42,41,共2页
关键词 肝炎 庚型肝炎 病毒肝炎 RNA 聚合酶链反应
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微滴式数字聚合酶链式反应精准定量检测羊肉中掺杂猪肉 被引量：24
16
作者 任君安 邓婷婷 +2 位作者 黄文胜 葛毅强 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期311-316,共6页
以羊和猪的单拷贝持家基因DNA复制蛋白A1为靶基因设计合成了适用于微滴式数字聚合酶链式反应的特异性引物和探针,通过理论推导获得了单位质量两种肉基因拷贝数之比的固定值,并进行了验证,据此将样品中羊肉和猪肉的拷贝数转换为相对质量... 以羊和猪的单拷贝持家基因DNA复制蛋白A1为靶基因设计合成了适用于微滴式数字聚合酶链式反应的特异性引物和探针,通过理论推导获得了单位质量两种肉基因拷贝数之比的固定值,并进行了验证,据此将样品中羊肉和猪肉的拷贝数转换为相对质量分数,从而建立了羊肉中掺杂猪肉的精准定量检测方法。该方法可以很好地应用于羊肉中掺杂猪肉的含量检测,猪肉的最低定量限为1%,在5%~80%范围内绝对误差小于±1.30%,相对误差小于±10%,定量结果准确、重复性高,可以为肉类掺假的监管工作提供有力的技术参考。 展开更多
关键词 羊肉 猪肉 精准定量 微滴式数字聚合酶链式反应
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实时荧光定量聚合酶链反应技术在结核性脑膜炎中的诊断价值 被引量：10
17
作者 李锐成 刘昕阳 +4 位作者 阎琳 邹菊贤 杨文青 徐爽 张惠中 《临床荟萃》 CAS 2014年第1期31-34,共4页
目的用涂片、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对临床确诊的结核性脑膜炎(n=110)、可疑结核性脑膜炎(n=205)和非结核性脑膜炎(n=100)患者的脑脊液标本分别采用涂片、RT-PCR两种方法进行检... 目的用涂片、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对临床确诊的结核性脑膜炎(n=110)、可疑结核性脑膜炎(n=205)和非结核性脑膜炎(n=100)患者的脑脊液标本分别采用涂片、RT-PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 415例脑脊液标本中,脑脊液涂片检查阳性率为2.4%(10/415),PCR检测阳性率为12.5%(52/415);脑脊液涂片、PCR法检测110例临床确诊的结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为6.4%(7/110)、26.4%(29/110);检测205例临床可疑结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为1.5%(3/205)、11.2%(23/205)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(P<0.05),检测100例非结核患者脑脊液标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 RT-PCR法检测脑脊液中TB-DNA对结核性脑膜炎的诊断有决定意义,具有较高临床应用价值。 展开更多
关键词 结核 脑膜 脑脊液 聚合酶链反应 诊断
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荧光定量聚合酶链反应在小儿人巨细胞病毒感染检测中应用 被引量：4
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作者 肖晗 向赟 +2 位作者 孙红 刘秀珍 向飞艳 《生物医学工程与临床》 CAS 2015年第2期179-181,共3页
目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）在小儿人巨细胞病毒（HCMV）感染检测中的临床应用价值。方法选择2012年1月至2013年10月在武汉市妇女儿童医疗保健中心就诊的疑似HCMV感染患儿血清或尿液标本,其中血清标本454例,尿液标本1 001例... 目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）在小儿人巨细胞病毒（HCMV）感染检测中的临床应用价值。方法选择2012年1月至2013年10月在武汉市妇女儿童医疗保健中心就诊的疑似HCMV感染患儿血清或尿液标本,其中血清标本454例,尿液标本1 001例,患儿男女比为1 005∶394,年龄1天~3岁。用FQ-PCR检测疑似HCMV感染患儿血清和尿液中的HCMV-DNA,比较两种标本的阳性率。结果 1 001例尿液标本的HCMV-DNA阳性率为46.35%（464/1 001）,显著高于血清标本的阳性率5.95%（27/454）;56例血清和尿液标本HCMV-DNA进行配对检测,其中血清检测阴性的52例中有23例尿液检测为阳性,而血清检测阳性的4例尿液检测均为阳性。结论应用FQ-PCR检测患儿HCMV-DNA,采用尿液标本可提高阳性检出率。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒(HCMV) 荧光定量聚合酶链反应 血清 尿 儿童
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常见转基因大米数字聚合酶链式反应多重定量检测方法研究 被引量：4
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作者 邓婷婷 黄文胜 +4 位作者 张九凯 葛毅强 邢冉冉 于宁 陈颖 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第21期6979-6986,共8页
目的建立4种转基因(geneticallymodified,GM)大米成分多重定量检测方法,解决混合转基因产品和多品系杂交的多价转基因产品高通量精准定量难题。方法采用Raindrop微滴式数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对4种常见... 目的建立4种转基因(geneticallymodified,GM)大米成分多重定量检测方法,解决混合转基因产品和多品系杂交的多价转基因产品高通量精准定量难题。方法采用Raindrop微滴式数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对4种常见转基因大米TT51-1、克螟稻、科丰6号、M12品系特异性基因和大米蔗糖磷酸合成酶基因逐一进行拷贝数分析,并将其转化为含量百分比。结果转基因含量在0.1%~100.0%范围内的4个品系转基因大米混合样品的定量体系线性关系良好,标准曲线r2值均在0.99以上,定量相对灵敏度可达0.1%,相对误差和相对标准偏差值均小于25%,定量准确性和精密度符合国际通用要求。结论本研究成功建立了4种常见转基因大米成分的多重定量检测方法,解决了常规方法一次只能定量分析单一样品的缺点,为大米、稻谷及其初加工产品中多种转基因成分的高效定量提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 转基因 大米 多重定量 数字聚合酶链式反应
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竞争性聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA 被引量：5
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作者 田小平 朱崇尧 +1 位作者 何浩明 徐凤英 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期346-347,共2页
定量检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的现有方法主要是分子杂交法，敏感性为０．１～１ｐｇ，不能达到病毒最低感染水平。聚合酶链反应技术有极高的特异性，灵敏度可达１ｆｇ，相当于３×１０２个病毒颗粒。定量ＰＣＲ技术为研究病毒与疾病关系... 定量检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的现有方法主要是分子杂交法，敏感性为０．１～１ｐｇ，不能达到病毒最低感染水平。聚合酶链反应技术有极高的特异性，灵敏度可达１ｆｇ，相当于３×１０２个病毒颗粒。定量ＰＣＲ技术为研究病毒与疾病关系提供了强有力的手段。本文应用竞争性ＰＣ... 展开更多
关键词 血清诊断 HBV-DNA 乙型肝炎 聚合酶链反应
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