宇佐美曲霉木聚糖酶基因的克隆和序列分析 被引量：13

1

作者 周晨妍 符丹丹 +1 位作者 朱劼 邬敏辰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期29-32,共4页

依据宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001木聚糖酶(XynII)N末端氨基酸残基序列以及曲霉菌密码子的偏爱性和真核生物mRNA在3′端存在Poly(A)等所提供的生物信息,采用RTPCR技术扩增了XynII成熟肽和3′非编码区的cDNA片段,PCR产物直接克隆... 依据宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001木聚糖酶(XynII)N末端氨基酸残基序列以及曲霉菌密码子的偏爱性和真核生物mRNA在3′端存在Poly(A)等所提供的生物信息,采用RTPCR技术扩增了XynII成熟肽和3′非编码区的cDNA片段,PCR产物直接克隆至pUCmT载体中。DNA序列分析表明,该cDNA全长733bp,其中3′非编码区178bp,成熟肽编码区555bp,编码184个氨基酸。成熟肽基因推导的氨基酸序列同Aspergillusniger、Emericellanidulans以及Trichodermaviride来源的木聚糖酶相比,同源性分别为89%、46%和36%。又进一步对XynII二级结构进行了分析,并通过SWISSMODEL预测了XynII的三维结构。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶Xyn Ⅱ 基因克隆 序列分析

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宇佐美曲霉木聚糖酶的纯化和性质 被引量：10

2

作者 邬敏辰 符丹丹 +1 位作者 朱劼 夏美芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期29-33,共5页

采用缓冲液浸提、硫酸铵盐析、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离纯化手段,从宇佐美曲霉E001固态发酵曲中分离出木聚糖酶组分,再经DE-AE-Sepharose fast flow阴离子交换层析进一步纯化,获得了两种电泳... 采用缓冲液浸提、硫酸铵盐析、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离纯化手段,从宇佐美曲霉E001固态发酵曲中分离出木聚糖酶组分,再经DE-AE-Sepharose fast flow阴离子交换层析进一步纯化,获得了两种电泳纯木聚糖酶XynⅠ和XynⅡ.分别采用SDS-PAGEG-75凝胶过滤层析测得XynⅠ、XynⅡ相对分子质量,两种酶均为单体蛋白质;等电聚焦电泳测得两种酶的等电点(pI);测定了XynⅠ、XynⅡ的酶动力学常数;序列测定XynⅡN末端15个氨基酸残基的. 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶Xyn Ⅰ XynⅡ 分离纯化 性质

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宇佐美曲霉阿魏酸酯酶A基因的克隆表达及酶学性质研究 被引量：9

3

作者 龚燕燕 殷欣 +1 位作者 邬敏辰 曾妍 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期706-712,共7页

本研究通过RT-PCR技术从宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001中克隆了编码阿魏酸酯酶A的成熟肽cDNA（AusfaeA）,构建重组表达质粒pPIC9K-AusfaeA,将其经SacⅠ线性化后转化毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝... 本研究通过RT-PCR技术从宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001中克隆了编码阿魏酸酯酶A的成熟肽cDNA（AusfaeA）,构建重组表达质粒pPIC9K-AusfaeA,将其经SacⅠ线性化后转化毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/AusfaeA,用甲醇诱导表达重组阿魏酸酯酶（reAusFaeA）。SDS-PAGE显示,纯化后的reAusFaeA为单一条带,其表观相对分子质量为36 000;以阿魏酸甲酯为底物,经高效液相色谱法测定,该酶的酶活为29.4 U/mg;reAusFaeA的最适反应温度为45℃,并在45℃以下稳定;最适反应pH为5.0,在pH 4.0～6.0范围内稳定;多数测定的金属离子及EDTA对该酶的活性影响不大。结果表明在P.pastoris中成功实现了AusfaeA的异源表达,该重组酶优良的酶学性质表明其具有较大的工业应用潜力。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 阿魏酸酯酶A 基因克隆 表达 毕赤酵母 酶学性质

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宇佐美曲霉产木聚糖酶的固态发酵条件研究 被引量：11

4

作者 符丹丹 谢慧 邬敏辰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期50-53,共4页

研究了培养基组分及培养条件对宇佐美曲霉(Asp usamii) 固态发酵产木聚糖酶的影响。采用Plack ett Burman和Box Behnken实验设计确定了最佳培养基组成和培养条件为:麸皮3 4g ,玉米芯4 6 g ,NH4NO31% ,KH2 PO40 3% ,CaCl2 0 1% ,MgSO4... 研究了培养基组分及培养条件对宇佐美曲霉(Asp usamii) 固态发酵产木聚糖酶的影响。采用Plack ett Burman和Box Behnken实验设计确定了最佳培养基组成和培养条件为:麸皮3 4g ,玉米芯4 6 g ,NH4NO31% ,KH2 PO40 3% ,CaCl2 0 1% ,MgSO40 1% ,Tween 80 0 4 % (均为相对于固体料的质量百分数) ,液固比为1 2∶1;最佳初始pH为自然pH ,2 8℃静置培养72h ,其间翻曲2～3次。酶活最高达到74 4 2IU/g(干曲)。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶 固态发酵条件 TWEEN-80 NH4NO3 KH2PO4 培养条件 培养基组分 培养基组成 CaCl2 MgSO4 实验设计 静置培养 sp. Box 玉米芯 百分数 液固比 最佳 pH 麸皮

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宇佐美曲霉木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达与优化 被引量：3

5

作者 白剑宇 周晨妍 +1 位作者 王瑾 邬敏辰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期100-103,共4页

从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆木聚糖酶基因xynⅡ,将不含原酶信号肽编码序列的xynⅡ以正确的读码框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建成重组质粒pET-Xn并转化大肠杆菌,得到重组工程菌KN21。通过对其进行IPTG浓度、温... 从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆木聚糖酶基因xynⅡ,将不含原酶信号肽编码序列的xynⅡ以正确的读码框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建成重组质粒pET-Xn并转化大肠杆菌,得到重组工程菌KN21。通过对其进行IPTG浓度、温度等诱导培养条件的优化后,胞内重组木聚糖酶活力最高达到81.77U/mg。对重组木聚糖酶进行酶学性质研究,显示其最适温度为45℃,最适pH为4.5。 展开更多

关键词 木聚糖酶 宇佐美曲霉 大肠杆菌 重组蛋白 高效表达

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宇佐美曲霉酸性β-甘露聚糖酶的纯化及性质研究 被引量：2

6

作者 李剑芳 马丽萍 +1 位作者 邬敏辰 夏文水 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期5-9,共5页

采用硫酸铵分部盐析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE Sepharosefast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78菌株固态曲浸出液中分离出1种SDS-PAGE电泳纯和HPLC色... 采用硫酸铵分部盐析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE Sepharosefast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78菌株固态曲浸出液中分离出1种SDS-PAGE电泳纯和HPLC色谱纯的酸性β-甘露聚糖酶组分,其最终回收率为12.6%,纯化倍数为32.3。经SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得该纯化酶的分子质量分别为42 ku和40 ku,表明该酶以单体形式存在;其等电点pI为4.2;含糖量为23.2%。以角豆胶半乳甘露聚糖为底物,测得该酶的Km值和Vmax值分别为6.3 mg/mL和1 667μmol/(min.mg)。 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶 宇佐美曲霉 分离纯化 酶学性质

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提高宇佐美曲霉537产酶活性的研究 被引量：2

7

作者 于丽萍 邹碧珍 王金英 《中国调味品》 CAS 北大核心 1998年第3期13-14,共2页

通过控制斜面培养基成分和液体发酵的通气量提高宇佐美曲霉５３７产生的酸性蛋白酶活力。产酶活性提高了２０％左右。达到７１００单位／亳升。

关键词 宇佐美曲霉 发酵 酸性蛋白酶 蛋白酶

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宇佐美曲霉环氧化物水解酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：1

8

作者 胡蝶 朱利娟 +4 位作者 邬敏辰 汪俊卿 唐存多 冯峰 余涛 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1244-1252,共9页

环氧化物水解酶(Epoxide hydrolase,EH)是酶法拆分消旋体环氧化物,制备光学活性环氧化物和邻二醇的重要酶之一。通过RT-PCR和新构建的THSO-PCR侧翼未知DNA序列扩增技术,克隆了一种来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的EH基因,命... 环氧化物水解酶(Epoxide hydrolase,EH)是酶法拆分消旋体环氧化物,制备光学活性环氧化物和邻二醇的重要酶之一。通过RT-PCR和新构建的THSO-PCR侧翼未知DNA序列扩增技术,克隆了一种来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的EH基因,命名为Aueh2(GenBank No.KF061095),并对该基因进行了相关生物信息学分析。Aueh2的DNA序列长度为2 481 bp,其中包含了5′端和3′端侧翼调控序列,6个内含子序列和编码cDNA序列。开放阅读框序列长度为1 188 bp,编码395个氨基酸,对应的蛋白质命名为AuEH2;该蛋白质为无信号肽的亲水蛋白质,其理论相对分子质量44.6 kD;其三维结构包含EH典型的"α/β"核心催化结构域和"帽子"结构域,活性中心由催化三联体Asp191、His369和Glu343组成。本课题研究成果为深入研究AuEH2及其应用奠定了基础。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 环氧化物水解酶 侧翼未知DNA序列 基因克隆 生物信息学分析

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宇佐美曲霉木聚糖酶在哺乳动物细胞中的分泌表达 被引量：1

9

作者 张茂 邹娴 +3 位作者 林纯 刘德武 吴珍芳 蔡更元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期23-27,共5页

本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。... 本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。在脂质体介导下将重组质粒转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测定木聚糖酶酶活,结果显示,重组质粒pcDNA-spna转染细胞后表达的酶活力最高为8.53U/mL,较pcDNA-spnb表达的酶活(6.87U/mL)高24%,实现了微生物基因在哺乳动物细胞的分泌表达,为xyn基因在转基因方面的利用提供了依据。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶 哺乳动物细胞 分泌表达

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宇佐美曲霉L-336酸性蛋白酶2m^3罐中试发酵研究报告 被引量：1

10

作者 李永泉 翁醒华 +2 位作者 贺筱蓉 胡华萃 庄晓峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期5-8,共4页

宇佐美曲霉栗色变种Ｌ－３３６是分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌，在摇瓶小试工艺基础上进行２ｍ３罐发酵中试，结果表明：较优发酵培养基（％）为黄豆粉４．３，玉米粉１．０，鱼粉０．７，蚕蛹水解液１０，Ｎａ２ＨＰＯ４０．２，Ｃａ... 宇佐美曲霉栗色变种Ｌ－３３６是分泌高单位酸性蛋白酶的生产菌，在摇瓶小试工艺基础上进行２ｍ３罐发酵中试，结果表明：较优发酵培养基（％）为黄豆粉４．３，玉米粉１．０，鱼粉０．７，蚕蛹水解液１０，Ｎａ２ＨＰＯ４０．２，ＣａＣｌ２０．５，ＮＨ４Ｃｌ１．０，豆油１．６；风量为０～２５ｈ时１∶０．４ｖ／ｖ／ｍ，２５～５０ｈ时１∶１．０ｖ／ｖ／ｍ，５０ｈ后１∶１．３ｖ／ｖ／ｍ；接种量１０％，温度３１℃，搅拌转速２００ｒ／ｍｉｎ，发酵周期７５ｈ。在上述条件下，发酵酶活力稳定在５５００ｕ／ｍｌ左右。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 酸性蛋白酶 发酵 酶制剂

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宇佐美曲霉中β-甘露聚糖酶基因调控序列的克隆

11

作者 唐存多 赵顺阁 +1 位作者 邬敏辰 史红玲 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期152-158,共7页

建立了一种利用限制性内切酶酶切、pUCm-T载体连接和巢式PCR技术,基于部分已知DNA序列测定其两侧翼未知DNA序列的新方法,命名为T载体介导的PCR技术,并将此技术应用于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-甘露聚糖酶基因(Aus man5A)... 建立了一种利用限制性内切酶酶切、pUCm-T载体连接和巢式PCR技术,基于部分已知DNA序列测定其两侧翼未知DNA序列的新方法,命名为T载体介导的PCR技术,并将此技术应用于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-甘露聚糖酶基因(Aus man5A)5′和3′端调控序列的克隆。结果表明:该PCR技术具有操作简便、引物特异性强、结果验证简捷、操作限制少等特点;借助于T载体介导的PCR技术、分子克隆和序列测定等手段,成功地测定了Ausman5A两侧翼的调控序列。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 Β-甘露聚糖酶 基因 调控序列 t载体介导的pcr

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宇佐美曲霉酸性蛋白酶摇瓶发酵工艺条件的优化 被引量：4

12

作者 李乃强 蓝蕾 +1 位作者 潘军华 张星元 《粮食与饲料工业》 CAS 2002年第1期29-31,共3页

采用正交试验 ,对宇佐美曲霉酸性蛋白酶摇瓶发酵工艺条件进行了优化。最佳发酵培养基的组成为 :玉米粉 1.5g ,豆饼粉 6 .0g ,蛋白胨 0 .7g ,氯化铵 1.0g ,氯化钙 0 .5g,磷酸氢二钠 0 .4g ;最优培养条件是 :pH值为 5 .5 ,培养温度为 32... 采用正交试验 ,对宇佐美曲霉酸性蛋白酶摇瓶发酵工艺条件进行了优化。最佳发酵培养基的组成为 :玉米粉 1.5g ,豆饼粉 6 .0g ,蛋白胨 0 .7g ,氯化铵 1.0g ,氯化钙 0 .5g,磷酸氢二钠 0 .4g ;最优培养条件是 :pH值为 5 .5 ,培养温度为 32℃ ,摇床转速为 2 2 0r/min。采用优化工艺 ,酸性蛋白酶的酶活由 72 0 0U/ml左右提高到 840 0U/ml。 展开更多

关键词 饲料 添加剂 宇佐美曲霉 酸性蛋白酶 摇瓶发酵工艺优化

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固体培养黑曲霉复合酶在传统发酵上的应用

13

作者 胡学智 凌晨 李平作 《江苏调味副食品》 2010年第5期1-3,共3页

为了充分发挥黑曲霉宇佐美曲霉M90-537-42这一从自然界中分离得到的优良产酶菌株的作用,介绍了以麸皮为主要培养基原料生产宇佐美曲霉复合酶的生产工艺,并其将与其它菌株的产酶效果进行了比较,同时还进行了宇佐美曲霉复合酶在酒精、酱... 为了充分发挥黑曲霉宇佐美曲霉M90-537-42这一从自然界中分离得到的优良产酶菌株的作用,介绍了以麸皮为主要培养基原料生产宇佐美曲霉复合酶的生产工艺,并其将与其它菌株的产酶效果进行了比较,同时还进行了宇佐美曲霉复合酶在酒精、酱油及食醋等生产中的应用试验,并与对照组比较。结果认为,将其添加到发酵基质中,有助于培养基原料的降解,可促进微生物利用而提高发酵产品得率。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 固体培养 发酵产品 应用

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β-甘露聚糖酶高产菌株选育及产酶条件的研究 被引量：19

14

作者 李剑芳 邬敏辰 夏文水 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期9-13,共5页

从实验室保藏的曲霉菌株中,通过筛选和紫外线诱变,获得了一株遗传性状稳定的酸性β甘露聚糖酶高产菌株Aspergillus usamii YL0178。在单因素试验基础上,采用Plackett Burman和Box Behnken实验设计确定的最佳产酶培养基组成和培养条件为... 从实验室保藏的曲霉菌株中,通过筛选和紫外线诱变,获得了一株遗传性状稳定的酸性β甘露聚糖酶高产菌株Aspergillus usamii YL0178。在单因素试验基础上,采用Plackett Burman和Box Behnken实验设计确定的最佳产酶培养基组成和培养条件为:m(麸皮)∶m(豆饼粉)=7∶3,魔芋粉2%,KH2PO40.2%,MgSO40.1%,CaCl20.1%,NaNO31.5%(均相对于固体物料),液固比为1.2∶1,自然pH;31℃静置培养72h,期间翻曲2～3次。最高酶活可达3362IU/g(干曲)。 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶 宇佐美曲霉 菌株选育 响应面分析 酸性β-甘露聚糖酶 产酶条件 紫外线诱变 单因素试验 培养基组成 高产菌株

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霉菌酸性蛋白酶高产突变菌株9169的选育 被引量：27

15

作者 李乃强 潘军华 张星元 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2001年第5期493-496,共4页

对一株宇佐美曲霉进行紫外光、微波和60 Co的逐级诱变育种 ,使酸性蛋白酶产量从 2 80 0U/mL提高到 72 0 0U/mL .突变株传代多次 ,产酶性能保持稳定 ;对突变株与出发株的发酵过程进行了比较研究 ,发现突变株最大产酶时间提前 10h以上 ,... 对一株宇佐美曲霉进行紫外光、微波和60 Co的逐级诱变育种 ,使酸性蛋白酶产量从 2 80 0U/mL提高到 72 0 0U/mL .突变株传代多次 ,产酶性能保持稳定 ;对突变株与出发株的发酵过程进行了比较研究 ,发现突变株最大产酶时间提前 10h以上 ,而培养基 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 酸性蛋白酶 微波诱变 高产突变菌株 选育 饲料添加剂

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酸性β-甘露聚糖酶固态发酵工艺与粗酶性质 被引量：6

16

作者 李剑芳 张静娟 +1 位作者 邬敏辰 夏文水 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期143-147,共5页

用宇佐美曲霉菌株(AspergillususamiiYL-01-78)进行固态发酵生产酸性β-甘露聚糖酶,其曲盘发酵的最优工艺为:培养基最初料水比为1:1.4,起始pH自然,接种量10%(相对于干物料),通过中间补水和翻曲,31℃培养72h,最高酶活可达3183IU/g干曲。... 用宇佐美曲霉菌株(AspergillususamiiYL-01-78)进行固态发酵生产酸性β-甘露聚糖酶,其曲盘发酵的最优工艺为:培养基最初料水比为1:1.4,起始pH自然,接种量10%(相对于干物料),通过中间补水和翻曲,31℃培养72h,最高酶活可达3183IU/g干曲。对酶学性质初步研究显示:酶的最适反应温度和pH分别为70℃和3.5,低于60℃、pH5.0～8.0酶稳定,Ca2+、EDTA对酶有激活作用,Mn2+、Pb2+、Sn2+、Fe3+、Cu2+、Al3+、Fe2+对酶有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶 宇佐美曲霉 固态发酵 酶学性质

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酒用酸性蛋白酶的研究进展 被引量：24

17

作者 唐胜球 董小英 许梓荣 《酿酒科技》 北大核心 2005年第1期41-44,共4页

酒用酸性蛋白酶在白酒酿造的发酵过程中起协同作用,具有溶解发酵原料的颗粒、促进微生物繁殖、分解蛋白质生成香味物质、降解酵母菌体蛋白等多种功能。综述了酒用酸性蛋白酶酶源研究及其酿酒中的酶学功能。

关键词 白酒 酸性蛋白酶 黑曲霉 宇佐美曲霉 酶源 酶学功能

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突变木聚糖酶基因xynⅡC~*在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究 被引量：2

18

作者 周晨妍 王武 邬敏辰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期19-22,27,共5页

对来源于宇佐美曲霉的高比活木聚糖酶xyn Ⅱ基因进行热稳定性改造,获得突变木聚糖酶基因xynI-IC-*ST4、xynⅡC-*ST5,将其分别克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,得到重组质粒,经SalI线性化后分别转化毕赤酵母GS115,xynⅡC*基因通过同源重... 对来源于宇佐美曲霉的高比活木聚糖酶xyn Ⅱ基因进行热稳定性改造,获得突变木聚糖酶基因xynI-IC-*ST4、xynⅡC-*ST5,将其分别克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,得到重组质粒,经SalI线性化后分别转化毕赤酵母GS115,xynⅡC*基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选获得阳性重组菌。获得的2个突变酶在热稳定性上比野生型酶都有不同程度的提高。突变酶ST4和突变酶ST5使酶的最适温度分别由原酶的50℃提高为52℃和55℃。55℃保温15min,ST4、ST5的残留酶活性由原酶的20%提高为65%和75%;保温1h,ST4、ST5的残留酶活性由原酶的15%提高为50%和65%。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶 热稳定性 毕赤酵母 酶学性质

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等离子体注入法诱变选育高产酸性蛋白酶菌株的研究 被引量：4

19

作者 赵培城 邓颜威 《粮食与食品工业》 2013年第5期59-64,67,共7页

采用等离子注入法诱变选育高产酸性蛋白酶的高产菌株。通过对初始菌株宇佐美曲霉M-537的等离子体诱变,酪蛋白平板初筛,液态发酵复筛等过程,筛选到1株稳定性好、酸性蛋白酶产量高的变变株,产酶能力从最初的4.15 U/mL提高到12.34 U/mL,提... 采用等离子注入法诱变选育高产酸性蛋白酶的高产菌株。通过对初始菌株宇佐美曲霉M-537的等离子体诱变,酪蛋白平板初筛,液态发酵复筛等过程,筛选到1株稳定性好、酸性蛋白酶产量高的变变株,产酶能力从最初的4.15 U/mL提高到12.34 U/mL,提高率达197.3%。连续传代6次,产酶能力变化不大,说明该突变株遗传性稳定。为进一步增加目标产物的产量,试验采用单因素试验和响应面实验分析,优化了变异菌株的生长培养基条件,最终确定培养基豆饼粉浓度为51 g/L,玉米粉浓度为10.0 g/L,KH2PO4浓度为3.0 g/L。经优化条件后,突变菌产酸性蛋白酶酶活力达到33.1 U/mL。 展开更多

关键词 等离子体 酸性蛋白酶 宇佐美曲霉 响应面试验分析

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乙酰木聚糖酯酶基因的克隆、表达及酶学性质研究 被引量：1

20

作者 朱天地 殷欣 +2 位作者 邬敏辰 何瑶 唐存多 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1084-1089,共6页

乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖的O-乙酰基,消除木聚糖酶水解木聚糖时该基团产生的空间阻碍作用。以宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001菌株的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了乙酰木聚糖酯酶成熟肽的编码基因（Auaxe）,并构... 乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖的O-乙酰基,消除木聚糖酶水解木聚糖时该基团产生的空间阻碍作用。以宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001菌株的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增了乙酰木聚糖酯酶成熟肽的编码基因（Auaxe）,并构建了重组表达质粒p PIC9K^M-Auaxe,SalⅠ线性化后电转入毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中,经G418抗性筛选及甲醇诱导表达72 h,获得了重组乙酰木聚糖酯酶（reAuAxe）,其酶活性为35.6 U/m L。发酵液经纯化获得电泳纯reAuAxe,其表观相对分子质量约为3.4×10^4,比酶活性为390.5 U/mg。纯化后reAuAxe的最适反应温度为50℃,在45℃及以下稳定;其最适反应pH为6.0,在pH 4.5-7.0范围内稳定;所测的多数金属离子及EDTA对其酶活性影响不大。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 乙酰木聚糖酯酶 基因克隆 表达 酶学性质

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