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人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
1
作者
张祥
何姝
+2 位作者
胡小蕾
廖飞
杨晓兰
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期93-97,共5页
目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合...
目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合到人全长PDE4B2基因编码区的N端和152-528aa截短突变体N端得到SF-h PDE4B2和STh PDE4B2;大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化,用偶联碱性磷酸酶的孔雀绿定磷法测定酶活性。结果:纯化后ST-h PDE4B2比活性接近SF-h PDE4B2的40倍,活性收率超过100倍;SDS-PAGE和6His标签免疫印迹发现纯化后2种融合蛋白都有多种带6His标签的降解片段;测定咯利普兰[(R)-Rolipram]和罂粟碱的抑制常数表明,SF-h PDE4B2对(R)-Rolipram主要为高亲和力结合构象,而ST-h PDE4B2主要为低亲和力结合构象。结论:与SF-h PDE4B2相比,ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂可能更有优势。
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关键词
环核苷酸
磷
酸二酯酶4B2
重组表达
孔雀绿定磷法
酶抑制剂
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职称材料
题名
人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
1
作者
张祥
何姝
胡小蕾
廖飞
杨晓兰
机构
重庆医科大学检验医学院
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期93-97,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:31570862)
文摘
目的:比较6His-SUMO融合的人全长环核苷酸磷酸二酯酶4B2(SF-h PDE4B2)及152-528aa截短突变体(STh PDE4B2)在大肠杆菌融合表达、亲和纯化及酶学特征,以明确ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂的优势。方法:分别将6His-SUMO融合到人全长PDE4B2基因编码区的N端和152-528aa截短突变体N端得到SF-h PDE4B2和STh PDE4B2;大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化,用偶联碱性磷酸酶的孔雀绿定磷法测定酶活性。结果:纯化后ST-h PDE4B2比活性接近SF-h PDE4B2的40倍,活性收率超过100倍;SDS-PAGE和6His标签免疫印迹发现纯化后2种融合蛋白都有多种带6His标签的降解片段;测定咯利普兰[(R)-Rolipram]和罂粟碱的抑制常数表明,SF-h PDE4B2对(R)-Rolipram主要为高亲和力结合构象,而ST-h PDE4B2主要为低亲和力结合构象。结论:与SF-h PDE4B2相比,ST-h PDE4B2用于筛选抗炎活性h PDE4B2抑制剂可能更有优势。
关键词
环核苷酸
磷
酸二酯酶4B2
重组表达
孔雀绿定磷法
酶抑制剂
Keywords
cyclic nucleotide phosphodiesterase 4B2
fusion expression
alkaline phosphatase-coupled malachite green assay of phosphate
rolipram
分类号
Q556 [生物学—生物化学]
R446.61 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
人PDE4B2全长与截短突变体的重组表达及表征
张祥
何姝
胡小蕾
廖飞
杨晓兰
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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