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水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究 被引量:5
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作者 庄新杰 段亚苹 +2 位作者 黄怡 宁淑芳 张明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第18期8512-8514,8517,共4页
[目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用... [目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用免疫细胞化学法和台盼兰染色法检测分离细胞的纯度和活率。[结果]成功分离培养出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞;免疫荧光染色和细胞计数表明上皮细胞和基质细胞的纯度均达90%以上;台盼兰染色结果显示,上皮细胞的活率为91%,基质细胞的活率为78%。[结论]采用酶消化、刮取、过滤和差速贴壁相结合的方法可分离出高纯度的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。 展开更多
关键词 水牛 子宫内膜腺上皮细胞 基质细胞 免疫细胞化学
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雌二醇对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖及BCL6蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 魏民 徐凌燕 +2 位作者 韩婕 徐燕 樊莉莉 《山东医药》 CAS 2018年第42期13-15,共3页
目的观察雌二醇(E2)对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖及BCL6蛋白表达的影响。方法收集5例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的腹腔镜手术切除标本,获取异位子宫内膜腺上皮细胞。将细胞分为干预组和对照组,分别予以10 nmol/L E2和DMEM/F12培养液,MT... 目的观察雌二醇(E2)对异位子宫内膜腺上皮细胞增殖及BCL6蛋白表达的影响。方法收集5例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的腹腔镜手术切除标本,获取异位子宫内膜腺上皮细胞。将细胞分为干预组和对照组,分别予以10 nmol/L E2和DMEM/F12培养液,MTT法观察24、48、72 h细胞增殖情况(吸光度值);取干预组干预0、24、48、72 h的细胞,Western blotting法检测细胞中的BCL6蛋白。将细胞分为4组,A、B组转染BCL6-siRNA,C、D组转染对照Scrambeld;转染后,A、C组均予以10 nmol/L E2培养72 h,MTT法观察细胞增殖情况(吸光度值)。结果与对照组同时点比较,干扰组作用48、72 h的细胞吸光度值高(P均<0. 05); E2作用0、24、48、72 h时,干扰组细胞BCL6蛋白相对表达量分别为0. 17±0. 03、0. 19±0. 02、0. 57±0. 06、1. 14±0. 12,48、72 h的BCL6蛋白相对表达量高于0 h时(P均<0. 05)。与D组比较,B组72 h和C组48、72 h的吸光度值高(P均<0. 05);与C组比较,A组48、72 h的吸光度值低(P均<0. 05)。结论 E2可能通过上调BCL6蛋白表达促进异位子宫内膜腺上皮细胞增殖,BCL6蛋白可作为治疗子宫内膜异位的新靶标。 展开更多
关键词 雌二醇 BCL6蛋白 转录抑制因子 子宫内膜异位 子宫内膜腺上皮细胞 细胞增殖
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缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞中微RNA表达谱及细胞凋亡变化 被引量:1
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作者 王含必 窦帅杰 +3 位作者 刘思邈 张婉玉 刘美芝 邓成艳 《协和医学杂志》 CSCD 2022年第4期626-631,共6页
目的探究缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)中微RNA(micro-RNA,miRNA)表达谱变化及其对凋亡的影响。方法取对数生长期EEC,接种至六孔板(1×10^(5)个细胞/孔)并随机分为缺氧组和对照组。缺... 目的探究缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell,EEC)中微RNA(micro-RNA,miRNA)表达谱变化及其对凋亡的影响。方法取对数生长期EEC,接种至六孔板(1×10^(5)个细胞/孔)并随机分为缺氧组和对照组。缺氧组、对照组分别置于缺氧环境(O_(2)∶N_(2)∶CO_(2)体积比为1∶94∶5)和正常氧环境(O_(2)∶CO_(2)体积比为95∶5)中培养。培养4 h后收集细胞,加入Trizol并提取总RNA。采用高通量测序法测定两组EEC中miRNA表达谱变化,采用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测miR-7704、miR-7974基因表达水平,采用流式细胞术检测EEC凋亡情况,采用蛋白印迹法(Western blot)检测p53和凋亡相关蛋白表达变化。结果高通量测序对21种常见miRNA表达水平检测后发现,与对照组比较,缺氧组EEC中16种miRNA表达上调,5种miRNA表达下调;其中对照组表达丰度较高的miR-7704和miR-7974在缺氧组表达下降最为显著(P均<0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组比较,缺氧组EEC中miR-7704和miR-7974相对表达量分别降低20%、80%。流式细胞术检测结果显示,缺氧组早期凋亡率及晚期凋亡率均高于对照组(P均<0.001)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,缺氧组EEC中p53表达升高,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2表达降低(P均<0.05)。结论缺氧环境可诱导EEC中miRNA表达谱改变,其中以miR-7974表达下调最为显著。p53可能是miR-7974的靶蛋白,缺氧诱发的EEC凋亡可能通过下调miR-7974水平而促进p53表达实现。 展开更多
关键词 子宫内膜腺上皮细胞 缺氧 miR-7704 miR-7974 凋亡
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不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30mRNA及蛋白表达观察 被引量:4
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作者 叶佳 杨晓清 +2 位作者 盛楠 马勤宜 张玉泉 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第19期31-33,共3页
目的观察不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30(GPR30)mRNA及蛋白的表达变化。方法收集正常增生期人子宫内膜组织,原代培养子宫内膜腺上皮细胞并鉴定。体外培养人子宫内膜癌细胞系ISK(ERα阳性、ERβ阳性、高分化)、RL95-2(ERα阳性... 目的观察不同子宫内膜癌细胞系中G蛋白耦联受体30(GPR30)mRNA及蛋白的表达变化。方法收集正常增生期人子宫内膜组织,原代培养子宫内膜腺上皮细胞并鉴定。体外培养人子宫内膜癌细胞系ISK(ERα阳性、ERβ阳性、高分化)、RL95-2(ERα阳性、ERβ阳性、中分化)、HEC-1-B(ERα阴性、ERβ阳性、中分化)、KLE(ERα阴性、ERβ阴性、低分化)。采用real-time PCR法检测正常子宫内膜腺上皮细胞及不同子宫内膜癌细胞系中的GPR30 mRNA,采用Western blotting法检测GPR30蛋白。结果子宫内膜腺上皮细胞、ISK细胞系、RL95-2细胞系、HEC-1-B细胞系、KLE细胞系中GPR30 mRNA相对表达量分别为0.016±0.002、0.032±0.004、0.049±0.003、0.051±0.006、0.083±0.001,GPR30蛋白相对表达量分别为0.31±0.22、0.57±0.01、1.21±0.04、1.34±0.05、1.77±0.01。各子宫内膜癌细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量均高于子宫内膜腺上皮细胞(P均<0.05);ISK细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量最低,与RL95-2细胞系、HEC-1-B细胞系、KLE细胞系相比,P均<0.05;KLE细胞系中GPR30 mRNA及蛋白相对表达量高于HEC-1-B细胞系及RL95-2细胞系(P均<0.05)。结论不同子宫内膜癌细胞系中GPR30 mRNA及蛋白均呈高表达,且在高、中、低分化的子宫内膜癌细胞系中表达水平逐渐增高。 展开更多
关键词 子宫内膜 子宫内膜细胞 G蛋白耦联受体30 孕激素受体 子宫内膜腺上皮细胞
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肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜细胞增殖的影响
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作者 李静辉 《中国医学工程》 2013年第12期149-150,共2页
目的观察肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞的影响及其最佳剂量,并检测该因子对子宫内膜细胞白血病抑制因子、整合素αVβ3表达的影响。方法用MTT法检测肝细胞生长因子对腺上皮细胞的增殖影响,并用免疫组化方法检测白血... 目的观察肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞的影响及其最佳剂量,并检测该因子对子宫内膜细胞白血病抑制因子、整合素αVβ3表达的影响。方法用MTT法检测肝细胞生长因子对腺上皮细胞的增殖影响,并用免疫组化方法检测白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达。结果肝细胞生长因子能促进体外培养的腺上皮细胞增殖,在浓度为20 ng/mL时为峰值。且加药组白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达为强阳性。结论 10 ng/mL的HBF即能促进腺上皮细胞的增殖,20 ng/mL时增殖水平较对照组上调3.1倍,用免疫组化检测加药组白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达呈强阳性。 展开更多
关键词 子宫内膜腺上皮细胞 间质细胞 细胞生长因子 细胞培养 白血病抑制因子 整合素ΑVΒ3
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