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大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNA^(Leu)的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组(英文): 1; 作者李勇王恩多《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 2003年第1期117-122,共6页; 第一部分:为得到大量的大肠杆菌tRNALeu1 和tRNALeu2 ,研究tRNA与亮氨酰 tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,... 展开更多; 关键词大肠杆菌 tRNA^Leu 亮氨酰-TRNA合成酶相互作用头孢菌素酰化酶亚基重组基因表达基因克隆; 在线阅读下载PDF 职称材料

3-硝基-5-(6-溴己酰胺)苯甲酸的合成及其作为头孢菌素酰化酶产生菌筛选指示剂的研究被引量：1: 2; 作者朱颂成温业淳 +2 位作者金志坤姜卫红赵国屏《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期169-172,210,共5页; 为筛选头孢菌素Ｃ酰化酶产生菌，由环己酮和３－硝基－５－乙酰胺基苯甲酸出发，合成了一种新的生色物质３－硝基－５－（６－溴己酰胺）苯甲酸（３－Ｎｉｔｒｏ－５－（６－ｂｒｏｍｏｈｅｘａｎｏｙｌａｍｉｎｏ）ｂｅｎｚｏｉｃａｃ... 展开更多; 关键词头孢菌素C 头孢菌素酰化酶 NBHAB; 在线阅读下载PDF 职称材料

头孢菌素酰化酶高β-折叠区保守氨基酸附近位点突变研究: 3; 作者任羽常瑞 +2 位作者王继莲马刘峰王东《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期19-23,共5页; 头孢菌素酰化酶(Cephalosporin acylase)能够一步催化头孢菌素C(Cephalosporin C,简称CPC)生成7-氨基头孢烷酸(7-Aminocephalosporanic acid,简称7-ACA),后者是重要的医药中间体。但头孢菌素酰化酶对CPC的一步催化活性低,远未达到工业... 展开更多; 关键词头孢菌素酰化酶 7-氨基头孢烷酸定点突变头孢菌素C; 在线阅读下载PDF 职称材料

内源信号肽DSE4介导头孢菌素C酰化酶在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2: 4; 作者丁璐妹肖慈英 +2 位作者储炬钱江潮张嗣良《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期449-454,共6页; 头孢菌素C(CPC)酰化酶可用于一步酶法合成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)。对来自Pseudomonas sp.Strain SE83的高活性CPC酰化酶突变基因进行基于毕赤酵母偏好密码子优化,获得基因SECA。选取毕赤酵母内源信号肽DSE4,构建表达菌G/DSECA,首次在毕... 展开更多; 关键词毕赤酵母分泌表达 DSE4信号肽头孢菌素C酰化酶 Β-半乳糖苷酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组头孢菌素C酰化酶的固定化研究: 5; 作者朱琳琳常雁红 +3 位作者姚舜罗晖于慧敏沈忠耀《化学与生物工程》 CAS 2017年第2期19-24,共6页; 将含头孢菌素C(CPC)酰化酶的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28-CPCAcy在50L发酵罐中发酵,发酵液OD600可达19.5,酶活达到11 542U·L^(-1);CPC酰化酶粗酶液经1%活性炭纯化后,比酶活由6.56U·mg^(-1)提高到10.77U·mg^(-1)... 展开更多; 关键词重组头孢菌素C酰化酶固定化酶稳定性生物催化; 在线阅读下载PDF 职称材料

一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展被引量：8: 6; 作者姚舜罗晖 +3 位作者常雁红于慧敏李强沈忠耀《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期11-14,16,共5页; 7-氨基头孢烷酸是合成头孢类抗生素的重要中间体,一般由头孢菌素C通过化学法或生物酶法裂解脱去侧链分子制备得到。综述了头孢菌素C酰化酶的来源、特性及其基因的克隆和改造,表达与纯化,固定化及其催化工艺的研究,并展望了一步酶法生产7... 展开更多; 关键词 7-氨基头孢烷酸两步酶法一步酶法头孢菌素C酰化酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNA^(Leu)的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组(英文): 1; 作者李勇王恩多; 机构中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室; 出处《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 2003年第1期117-122,共6页; 基金 supportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(3 973 0 12 0)andtheChineseAcademyofSciences(GrantKJ95 1 B1 610) supportedbythe 863projectinChina(10 3 13 0 2 0 1); 文摘第一部分:为得到大量的大肠杆菌tRNALeu1 和tRNALeu2 ,研究tRNA与亮氨酰 tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,优化了转录条件,转录序列比文献值高 1 0倍.用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNALeu变种,研究了一个在CP1结构域插入 40个氨基酸残基的变种LeuRS A对tRNALeu2种等受体的识别,证明了tRNA Leu1 和tRNA Leu2 接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS A识别的关键.　　第二部分:在大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因 1 0倍以上.研究了它的α 亚基的N 端变化(LAEP →MGIP )对酶学动力学常数的影响.构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒,研究了它们表达的特点,分析了这些质粒的不同用途.用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法.研究了它们在体内的重组和前体的加工.研究结果表明,该酶可能属于一类新的N; 关键词大肠杆菌 tRNA^Leu 亮氨酰-TRNA合成酶相互作用头孢菌素酰化酶亚基重组基因表达基因克隆; Keywords tRNA Leu , leucyl tRNA synthetase, interaction cephalosporin acylase, Pseudomonas , subunits reconstitution; 分类号 Q814 [生物学—生物工程] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名3-硝基-5-(6-溴己酰胺)苯甲酸的合成及其作为头孢菌素酰化酶产生菌筛选指示剂的研究被引量：1: 2; 作者朱颂成温业淳金志坤姜卫红赵国屏; 机构中国科学院上海植物生理研究所微生物次生代谢分子调控开放实验室中国科学院上海生物工程研究中心; 出处《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期169-172,210,共5页; 基金国家高技术发展(863)计划项目; 文摘为筛选头孢菌素Ｃ酰化酶产生菌，由环己酮和３－硝基－５－乙酰胺基苯甲酸出发，合成了一种新的生色物质３－硝基－５－（６－溴己酰胺）苯甲酸（３－Ｎｉｔｒｏ－５－（６－ｂｒｏｍｏｈｅｘａｎｏｙｌａｍｉｎｏ）ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，ＮＢＨＡＢ）。通过红外光谱法、核磁共振法、质谱法鉴定了其结构。ＧＬ－７ＡＣＡ酰化酶和青霉素Ｇ酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｉｎＧＡｃｙｌａｓｅ，ＰＧＡ）及其产生菌对该化合物的作用表明，该物质能够检测头孢菌素酰化酶活力，用来筛选头孢菌素Ｃ酰化酶产生菌，其灵敏性有待进一步提高。; 关键词头孢菌素C 头孢菌素酰化酶 NBHAB; Keywords Nitro5(6bromohexanoylamino) benzoic acid Chromogenic substrate Cephalosporin C Cephalosporin acylase Indicator; 分类号 R914.5 [医药卫生—药物化学] R978.11 [医药卫生—药品]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名头孢菌素酰化酶高β-折叠区保守氨基酸附近位点突变研究: 3; 作者任羽常瑞王继莲马刘峰王东; 机构喀什大学叶尔羌绿洲生态与生物资源研究重点实验室; 出处《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期19-23,共5页; 基金新疆维吾尔自治区自然科学基金(201442137-10) 新疆维吾尔自治区优秀科技人才项目(2017Q031) +1 种基金喀什大学高层次人才引进计划项目(GCC14ZK-001)。; 文摘头孢菌素酰化酶(Cephalosporin acylase)能够一步催化头孢菌素C(Cephalosporin C,简称CPC)生成7-氨基头孢烷酸(7-Aminocephalosporanic acid,简称7-ACA),后者是重要的医药中间体。但头孢菌素酰化酶对CPC的一步催化活性低,远未达到工业生产的要求。研究以来源于Pseudomonas sp.SE83头孢菌素酰化酶(CPCase)蛋白序列为模板,对其基因进行全局优化设计,人工合成目的基因,并克隆至表达载体pET28a,实现了CPCase的高效表达,命名为WT。将其与来自Pseudomonas SY-77、Pseudomonas N176等菌株的头孢菌素酰化酶氨基酸序列进行相似性比较,在保守氨基酸附近选择了25个突变位点,采用定点突变的方法分别突变为Ala,获得了25个突变酶。结果表明,突变体蛋白F311A对CPC的催化活性上升50%,k cat/K m提高到原来的1.7倍,比酶活达到4.302 U/mg,其他突变体对CPC催化活性均有不同程度的下降。结构分析显示,第311的Phe突变为Ala,能够使结合口袋变大,减少空间位阻,使酶与底物CPC的结合更加牢固,提高催化效率。; 关键词头孢菌素酰化酶 7-氨基头孢烷酸定点突变头孢菌素C; Keywords cephalosporin acylase 7-aminocephalosporanic acid site-directed mutagenesis cephalosporin C; 分类号 Q517 [生物学—生物化学] TQ465.9 [化学工程—制药化工]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名内源信号肽DSE4介导头孢菌素C酰化酶在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2: 4; 作者丁璐妹肖慈英储炬钱江潮张嗣良; 机构华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室; 出处《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期449-454,共6页; 基金教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-11-0639); 文摘头孢菌素C(CPC)酰化酶可用于一步酶法合成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)。对来自Pseudomonas sp.Strain SE83的高活性CPC酰化酶突变基因进行基于毕赤酵母偏好密码子优化,获得基因SECA。选取毕赤酵母内源信号肽DSE4,构建表达菌G/DSECA,首次在毕赤酵母中分泌了CPC酰化酶。与酿酒酵母α-交配因子前导肽(α-factor)相比,DSE4介导SECA的分泌表达效果更优,其介导SECA表达的胞内、外单位体积酶活分别比α-factor高65%和44%。分别以DSE4和α-factor为信号肽构建β-半乳糖苷酶表达菌G/DSEL与G/MFL,进一步考察DSE4介导异源蛋白的分泌效果,G/DSEL的胞内外单位体积酶活也均高于G/MFL。; 关键词毕赤酵母分泌表达 DSE4信号肽头孢菌素C酰化酶 Β-半乳糖苷酶; Keywords Pichia pastoris secreting expression signal peptide DSE4 cephalosporin C acylase β-galactosidase; 分类号 Q815 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组头孢菌素C酰化酶的固定化研究: 5; 作者朱琳琳常雁红姚舜罗晖于慧敏沈忠耀; 机构北京科技大学环境工程系北京科技大学生物科学与工程系清华大学化学工程系; 出处《化学与生物工程》 CAS 2017年第2期19-24,共6页; 基金国家自然科学基金资助项目(21276023 21476025) +1 种基金中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(FRF-SD-12-007A); 文摘将含头孢菌素C(CPC)酰化酶的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28-CPCAcy在50L发酵罐中发酵,发酵液OD600可达19.5,酶活达到11 542U·L^(-1);CPC酰化酶粗酶液经1%活性炭纯化后,比酶活由6.56U·mg^(-1)提高到10.77U·mg^(-1);然后将纯化的CPC酰化酶共价结合固定在氨基载体LX-1000HA和环氧基载体LX-1000EPC上,并对固定化酶的热稳定性及pH值稳定性进行考察。结果表明,LX-1000HA固定化酶的初始酶活较LX-1000EPC固定化酶低,但其热稳定性、pH值稳定性以及酶与载体的结合强度均高于LX-1000EPC固定化酶;并且在固定化酶投加量相同时,LX-1000HA固定化酶的催化性能优于LX-1000EPC固定化酶。对LX-1000HA固定化酶进行催化批次实验,在催化39批次时达到半衰期。; 关键词重组头孢菌素C酰化酶固定化酶稳定性生物催化; Keywords recombination cephalosporin C acylase immobilized enzyme stability biocatalysis; 分类号 TQ465.1 [化学工程—制药化工] Q556 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展被引量：8: 6; 作者姚舜罗晖常雁红于慧敏李强沈忠耀; 机构北京科技大学化学与生物工程学院北京科技大学土木与环境工程学院清华大学化学工程系; 出处《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期11-14,16,共5页; 基金国家自然科学基金项目(21276023) 国家"863"计划项目(2008AA02Z207) +1 种基金北京市科技新星计划(2006B22); 文摘 7-氨基头孢烷酸是合成头孢类抗生素的重要中间体,一般由头孢菌素C通过化学法或生物酶法裂解脱去侧链分子制备得到。综述了头孢菌素C酰化酶的来源、特性及其基因的克隆和改造,表达与纯化,固定化及其催化工艺的研究,并展望了一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的应用前景。; 关键词 7-氨基头孢烷酸两步酶法一步酶法头孢菌素C酰化酶; Keywords 7-ACA two-step enzymatic process one-step enzymatic process CPC acylase; 分类号 TQ9 [化学工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNA^(Leu)的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组(英文)	李勇王恩多	《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	3-硝基-5-(6-溴己酰胺)苯甲酸的合成及其作为头孢菌素酰化酶产生菌筛选指示剂的研究	朱颂成温业淳金志坤姜卫红赵国屏	《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心	1999	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	头孢菌素酰化酶高β-折叠区保守氨基酸附近位点突变研究	任羽常瑞王继莲马刘峰王东	《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	内源信号肽DSE4介导头孢菌素C酰化酶在毕赤酵母中的分泌表达	丁璐妹肖慈英储炬钱江潮张嗣良	《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2015	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	重组头孢菌素C酰化酶的固定化研究	朱琳琳常雁红姚舜罗晖于慧敏沈忠耀	《化学与生物工程》 CAS	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展	姚舜罗晖常雁红于慧敏李强沈忠耀	《现代化工》 CAS CSCD 北大核心	2013	8	在线阅读下载PDF 职称材料