转天麻抗真菌蛋白基因提高棉花对黄萎病抗性 被引量：5

1

作者 肖松华 赵君 +5 位作者 刘剑光 吴巧娟 王义琴 储成才 俞敬忠 喻德跃 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期212-221,共10页

黄萎病是全球植棉业的主要病害,严重缺乏抗黄萎病资源导致棉花抗黄萎病育种至今未取得显著进展。采用农杆菌介导法,以下胚轴为受体,将天麻抗真菌蛋白基因转化陆地棉品系苏研060,通过愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化和植株再生,获得大量... 黄萎病是全球植棉业的主要病害,严重缺乏抗黄萎病资源导致棉花抗黄萎病育种至今未取得显著进展。采用农杆菌介导法,以下胚轴为受体,将天麻抗真菌蛋白基因转化陆地棉品系苏研060,通过愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化和植株再生,获得大量再生苗。分别以NPT II基因、gafp基因、35S启动子-gafp基因特异引物对再生苗进行PCR检测,将95个阳性再生苗嫁接到海7124幼苗砧木上,获得37个成活植株。RT-PCR检测发现,31个植株出现预期的540 bp扩增片段。盆栽花铃期花粉育性鉴定表明,9个转基因植株雄性败育,22个植株花粉育性正常,通过人工自交得到T1代种子。通过转基因作物隔离区种植、特异引物PCR检测、卡那霉素抗性筛选、自交纯合与选择,培育获得22个T3代转基因纯系。Southern blotting检测发现,转基因植株体内有2个gafp基因拷贝。GAFP蛋白免疫印迹表明,16个转基因纯系出现分子量为14 k D的GAFP蛋白,另6个纯系表现出转录后水平上的基因沉默。黄萎病抗性鉴定结果证实,获得3个抗落叶型黄萎病的棉花株系TG09、TG16和TG23。 展开更多

关键词 棉花 天麻 抗真菌蛋白 基因 黄萎病 抗性

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天麻抗真菌蛋白(GAFP)的N端序列测定及cDNA基因克隆 被引量：9

2

作者 王义琴 李文彬 +4 位作者 LamHonming 张秀海 陈潜 郭顺星 孙勇如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第1期10-14,共5页

从新鲜天麻次生块茎中将天麻抗真菌蛋白(GAFP)提纯,然后测得其N端的30个氨基酸,根据氨基酸序列设计了一段30bp的核酸探针,从cDNA文库中筛选到了编码该蛋白的基因,为这一新型蛋白在抗真菌基因工程中的应用奠定了基础。

关键词 天麻 CDNA文库 N端序列 抗真菌蛋白基因

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转天麻抗真菌蛋白GAFP基因烟草的获得及离体抑菌活性检测 被引量：10

3

作者 陈英 王义琴 +3 位作者 诸葛强 施季森 黄敏仁 王明庥 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2002年第2期1-5,共5页

通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导,采用叶盘法将天麻(GastrodiaelataBl.)抗真菌蛋白基因GAFP转入烟草(NicotianatabacumL.),PCR和Southern blotting分析证明已将GAFP基因整合进烟草植株。体外抑菌实验表明GAFP转基因的烟... 通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导,采用叶盘法将天麻(GastrodiaelataBl.)抗真菌蛋白基因GAFP转入烟草(NicotianatabacumL.),PCR和Southern blotting分析证明已将GAFP基因整合进烟草植株。体外抑菌实验表明GAFP转基因的烟草植株对真菌瑞氏木霉(Trichodermareesei)表现出一定的抑菌活性。 展开更多

关键词 活性检测 根癌农杆菌介导 天麻抗真菌蛋白 转基因烟草 离体抑菌活性 抗病育种

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天麻抗真菌蛋白基因转化彩色棉的初步筛选 被引量：4

4

作者 危晓薇 黄全生 +4 位作者 王冬梅 美丽古力 李仁敬 胡晓玲 陈大军 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第6期352-352,共1页

通过花粉管通道法将天麻抗真菌蛋白基因导入新疆彩色棉 3个品种 (系 ) ,经过标记基因阳性试验和病圃生物学检测 。

关键词 花粉管通道法 天麻 抗真菌蛋白基因 黄萎病 阳性反应 生物学检测 棉花 基因转化

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天麻抗真菌蛋白基因(GAFP)转化彩色棉新品系抗黄、枯萎病性鉴定 被引量：8

5

作者 刘丰疆 马德成 +5 位作者 李仁敬 李卫平 陈大军 姚正培 宋武 李玮 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2004年第4期244-247,共4页

将天麻抗真菌蛋白基因(GastrodiaAntifargalProtein,GAFP)利用花粉管通道法导入彩色棉品种新彩棉1号和新彩棉3号,转化后代经卡那霉素初筛、分子检测、农艺性状选择,培育出16个转基因新品系,对其在人工病圃进行田间黄、枯萎病的抗性鉴定... 将天麻抗真菌蛋白基因(GastrodiaAntifargalProtein,GAFP)利用花粉管通道法导入彩色棉品种新彩棉1号和新彩棉3号,转化后代经卡那霉素初筛、分子检测、农艺性状选择,培育出16个转基因新品系,对其在人工病圃进行田间黄、枯萎病的抗性鉴定,结果表明:参试的转基因品系中LB5007、ZB5020等5个品系既抗黄萎病又抗枯萎病,为兼抗类型;其余11个品系均为抗黄萎病耐枯萎病类型。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白基因 彩色棉 黄萎病 枯萎病 抗性鉴定 转基因

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天麻抗真菌蛋白基因或可防治棉花黄萎病

6

《中国食用菌》 2016年第4期62-62,共1页

黄萎病一直被认为是棉花的“癌症”。目前，中科院研究人员发现天麻中存在着4个抗真菌蛋白基因gafp，gafp对包括黄萎病在内的多种真菌具有较好抗性，其中，gafp4具有最强的抑菌活性，且带有胞间质定位的信号肽可以明显增强抗性。

关键词 天麻抗真菌蛋白基因 棉花黄萎病 防治 研究人员 抑菌活性 中科院 信号肽 抗性

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新疆陆地棉转天麻毒蛋白基因GAFP特性研究 被引量：1

7

作者 沈海涛 王爱英 +1 位作者 李玉霞 祝建波 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-8,共8页

本研究利用花粉管通道技术将在天麻中克隆的天麻毒蛋白基因(GAFP)转化棉花,经PCR和RTPCR鉴定,证实得到了5个转基因株系672GAFP-1,672GAFP-2,672GAFP-3,672GAFP-4,672GAFP-5。通过两年在无病田和病圃中连续种植分析转基因植株抗病性、农... 本研究利用花粉管通道技术将在天麻中克隆的天麻毒蛋白基因(GAFP)转化棉花,经PCR和RTPCR鉴定,证实得到了5个转基因株系672GAFP-1,672GAFP-2,672GAFP-3,672GAFP-4,672GAFP-5。通过两年在无病田和病圃中连续种植分析转基因植株抗病性、农艺性状和经济性状的研究,结果表明:外源基因GAFP的导入对棉花农艺性状和经济性状无显著影响;转基因株系672GAFP-1,672GAFP-2,672GAFP-5在病圃中的抗病指数、株高、产量和纤维品质与受体材料672差异显著(P<0.05),产量较对照提高近30%;转基因植株农艺性状和经济性状的各项指标均优于对照,具较强耐枯、黄萎病能力,且能稳定遗传。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白 转基因抗病陆地棉 棉花枯萎病 黄萎病

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双价抗病基因植物表达载体构建及在烟草中表达的初步研究 被引量：4

8

作者 陈英 戴咏梅 +2 位作者 黄敏仁 诸葛强 王明庥 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期81-85,共5页

多基因转化是基因工程研究热点之一。本研究应用DNA重组技术,将两个抗病机制不同,抗菌谱较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和兔防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP1上,两者具有各自的CaMV35S启动子和Nos终止子。通过... 多基因转化是基因工程研究热点之一。本研究应用DNA重组技术,将两个抗病机制不同,抗菌谱较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和兔防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBin35SGAFP-NP1上,两者具有各自的CaMV35S启动子和Nos终止子。通过根癌农杆菌介导,采用叶盘法转化烟草,PCR和PCR-Southern分析证明已将NP1和GAFP基因整合到烟草基因组中。离体抑菌实验表明转基因植株对真菌和细菌表现出一定的抗性。以上结果表明通过该表达载体进行遗传转化可获得含双价抗病基因植物,并能有效表达,提高转基因植物抗病能力。 展开更多

关键词 防御素基因NP1 天麻抗真菌蛋白基因翻肿 双价抗病基因植物表达载体 转基因烟草 抗病性

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新疆陆地棉抗病转基因棉花的初步筛选 被引量：7

9

作者 危晓薇 黄全生 +6 位作者 孟庆玉 王冬梅 美丽古力 李仁敬 陈爱民 谢迪佳 师维军 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2002年第1期18-19,共2页

通过花粉管通道法将天麻抗真菌蛋白基因导入新疆陆地棉 3个品种 (系 ) ,经过标记基因阳性试验和病圃生物学检测 ,得到初步的筛选结果。

关键词 花粉管通道法 天麻抗真菌蛋白基因 黄萎病 阳性反应 生物学检测 新疆 陆地棉 抗病性 转基因棉

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新疆陆地棉转基因抗病品系材料的获得 被引量：4

10

作者 危晓薇 师维军 +4 位作者 葛峰 徐利民 王义琴 黄全生 吾买尔江 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第4期402-407,共6页

天麻抗真菌蛋白(gastrodia antifungal protein简称GAFP)是从我国传统中药天麻(Gastrodia elata Bl.)中分离得到的一种具有广谱抗真菌活性的蛋白质,它对许多植物真菌病的致病菌离体具有很强的抑制作用。研究将所获得的转GAFP基因的陆地... 天麻抗真菌蛋白(gastrodia antifungal protein简称GAFP)是从我国传统中药天麻(Gastrodia elata Bl.)中分离得到的一种具有广谱抗真菌活性的蛋白质,它对许多植物真菌病的致病菌离体具有很强的抑制作用。研究将所获得的转GAFP基因的陆地棉经Southern点杂交,证实得到了2株高抗枯、黄萎病的转基因植株。其后代经过进一步的抗病性筛选、PCR鉴定、选育和扩繁,发现转基因陆地棉后代具有稳定的、较强抗枯、黄萎病能力。研究为新疆陆地棉通过植物抗病基因工程的方法进行抗病品种选育提供了一条新的途径。 展开更多

关键词 天麻抗真菌蛋白 转基因抗病陆地棉 棉花枯萎病和黄萎病

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新疆彩色棉抗病转基因植株的病圃筛选

11

作者 陈大军 李卫平 +7 位作者 黄全生 刘丰疆 危晓薇 胡晓玲 王冬梅 姚正培 美丽古力 李仁敬 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2002年第2期82-83,共2页

将用天麻抗真菌蛋白基因 (GAFP)转化的天然彩色棉 (棕色、绿色 )R0 代种子种植在黄、枯萎病混生的病圃中。根据标记基因的不同 ,分别用卡那霉素和除草剂 (Basta)对 9个筛选材料的R1代 1 92 5 3× 10 4株进行了筛选 ,入选 133株。入... 将用天麻抗真菌蛋白基因 (GAFP)转化的天然彩色棉 (棕色、绿色 )R0 代种子种植在黄、枯萎病混生的病圃中。根据标记基因的不同 ,分别用卡那霉素和除草剂 (Basta)对 9个筛选材料的R1代 1 92 5 3× 10 4株进行了筛选 ,入选 133株。入选的 133个植株经过四次抗病性鉴定、筛选 ,获得了抗病植株 16株。进一步进行分子检测 ,转化植株出现了杂交信号 ,证明了抗病基因的整合和表达。 展开更多

关键词 天然彩色棉 天麻抗真菌 蛋白基因 病圃筛选 新疆 抗病转基因 植株

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转GAFP基因对彩色棉性状的影响

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作者 刘丰疆 李仁敬 +3 位作者 张振南 王义琴 曹燕燕 焦明钰 《中国棉花》 北大核心 2006年第3期13-14,共2页

关键词 AFP基因 彩色棉 天麻抗真菌蛋白基因 棉花研究所 新彩棉1号 主栽品种 遗传结构 发育生物学 天然彩色 外源基因

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不同因素对农杆菌介导的杉木转化效率的影响 被引量：6

13

作者 席梦利 施季森 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期46-50,共5页

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料，研究6个影响杉木遗传转化效果的因素，初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为：预培养1—3d，OD600 nm为0．1-0．4的菌液浸染10-15min，共培养3—5d，共培养基附加乙酰丁香酮（AS）80μmol·... 以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料，研究6个影响杉木遗传转化效果的因素，初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为：预培养1—3d，OD600 nm为0．1-0．4的菌液浸染10-15min，共培养3—5d，共培养基附加乙酰丁香酮（AS）80μmol·L^-1，共培养后延迟3d筛选。在初次筛选培养基上共得到186个卡那霉素（Km）抗性芽，在二次筛选培养基上获得39个Km抗性芽。PCR检测有2个Km抗性芽呈稳定阳性，初步证明外源天麻抗真菌蛋白（GAFP）基因已整合到这2个Km抗性芽的基因组DNA中。 展开更多

关键词 杉木 农杆菌介导 天麻抗真菌蛋白基因

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生物防治

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第3期77-78,共2页

961062 无菌培养罗马柄锈菌的技术[英]/Bedi, J.S.…//Curr.Sci.-1995,69(1).-21～23[译自DBA,1995,14(17),95-10278] 由罗马柄锈菌引起的诱病可用作针对香附子的潜在生防因子。在不同温度(20、25、30和35℃)下研究了真菌的生长和孢子... 961062 无菌培养罗马柄锈菌的技术[英]/Bedi, J.S.…//Curr.Sci.-1995,69(1).-21～23[译自DBA,1995,14(17),95-10278] 由罗马柄锈菌引起的诱病可用作针对香附子的潜在生防因子。在不同温度(20、25、30和35℃)下研究了真菌的生长和孢子形成。 展开更多

关键词 杀虫活性 荧光假单胞菌 原生质体融合 天麻抗真菌蛋白基因 融合子 柄锈菌 染色体 生防因子 cDNA克隆 晶体蛋白

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