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SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
被引量：
1
1
作者
赵仁双
朱羿龙
+10 位作者
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期19-25,共7页
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭...
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
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关键词
严重急性呼吸综合征冠状
病毒
2(SARS-CoV-2)
天坛株痘苗病毒
TK基因
同源重组
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职称材料
痘苗病毒对马属动物细胞的感染性研究
2
作者
马燕
孟庆来
+6 位作者
段丹丽
王晓钧
刘颖
相文华
沈容显
张晓燕
邵一鸣
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期149-152,共4页
目的研究痘苗病毒天坛株是否能够感染马属动物细胞,并诱导免疫马产生免疫反应。方法首先采用重组绿色荧光蛋白(GFP)的痘苗病毒WR株感染驴胎皮肤细胞(FDD)后,通过流式细胞仪定期检测GFP表达水平(病毒感染率),探索最佳感染时间,进而用重组...
目的研究痘苗病毒天坛株是否能够感染马属动物细胞,并诱导免疫马产生免疫反应。方法首先采用重组绿色荧光蛋白(GFP)的痘苗病毒WR株感染驴胎皮肤细胞(FDD)后,通过流式细胞仪定期检测GFP表达水平(病毒感染率),探索最佳感染时间,进而用重组HIV-1 Gag蛋白的痘苗病毒天坛株感染FDD,通过免疫印记实验确认Gag蛋白在细胞内表达,并且进行胞内染色,通过流式细胞仪监测病毒的复制进程;使用痘苗病毒天坛株空载体接种实验马并监测其诱导的免疫反应。结果痘苗病毒感染FDD使产生病变效应,在其内表达外源蛋白,最佳时间为48h;使实验马产生针对病毒的结合抗体。结论痘苗病毒对FDD易感,痘苗病毒天坛株能使实验马感染,提示痘苗病毒重组EIAV抗原的载体疫苗可用于马体接种免疫。
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关键词
驴胎皮肤细胞(FDD)
痘苗
病毒
天坛
株
流式细胞仪
免疫反应
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职称材料
题名
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
被引量：
1
1
作者
赵仁双
朱羿龙
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
机构
延边大学农学院预防兽医学实验室
长春中医药大学院士工作站
中国农业科学院长春兽医研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期19-25,共7页
基金
吉林省自然科学基金项目(YDZJ202201ZYTS257)
吉林省教育厅科学技术研究项目(JJKH20220873KJ)。
文摘
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
关键词
严重急性呼吸综合征冠状
病毒
2(SARS-CoV-2)
天坛株痘苗病毒
TK基因
同源重组
Keywords
SARS-CoV-2
vaccinia virus Tiantan strain(VVT)
TK gene
homologous recombination
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
S942.5 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
痘苗病毒对马属动物细胞的感染性研究
2
作者
马燕
孟庆来
段丹丽
王晓钧
刘颖
相文华
沈容显
张晓燕
邵一鸣
机构
中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心和传染病预防控制国家重点实验室
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期149-152,共4页
基金
国家自然科学基金(No:30371319和30671941)经费资助
文摘
目的研究痘苗病毒天坛株是否能够感染马属动物细胞,并诱导免疫马产生免疫反应。方法首先采用重组绿色荧光蛋白(GFP)的痘苗病毒WR株感染驴胎皮肤细胞(FDD)后,通过流式细胞仪定期检测GFP表达水平(病毒感染率),探索最佳感染时间,进而用重组HIV-1 Gag蛋白的痘苗病毒天坛株感染FDD,通过免疫印记实验确认Gag蛋白在细胞内表达,并且进行胞内染色,通过流式细胞仪监测病毒的复制进程;使用痘苗病毒天坛株空载体接种实验马并监测其诱导的免疫反应。结果痘苗病毒感染FDD使产生病变效应,在其内表达外源蛋白,最佳时间为48h;使实验马产生针对病毒的结合抗体。结论痘苗病毒对FDD易感,痘苗病毒天坛株能使实验马感染,提示痘苗病毒重组EIAV抗原的载体疫苗可用于马体接种免疫。
关键词
驴胎皮肤细胞(FDD)
痘苗
病毒
天坛
株
流式细胞仪
免疫反应
Keywords
fetal dermal donkey cells （FDD）
vaccinia virus Tian Tan strain
flow cytometry
immune response
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
赵仁双
朱羿龙
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
痘苗病毒对马属动物细胞的感染性研究
马燕
孟庆来
段丹丽
王晓钧
刘颖
相文华
沈容显
张晓燕
邵一鸣
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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已选择
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