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改良组织块培养法提取原代大鼠脑微血管内皮细胞及鉴定 被引量:1
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作者 张帆 李柏霖 +2 位作者 池茗 刘海琴 唐元瑜 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期10-14,共5页
目的探究脑微血管组织块培养法提取原代大鼠脑微血管内皮细胞并对其进行鉴定。方法取4周龄SD大鼠脑皮层,经过筛网、预消化、微血管组织块固化处理后,置于CO_(2)培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化... 目的探究脑微血管组织块培养法提取原代大鼠脑微血管内皮细胞并对其进行鉴定。方法取4周龄SD大鼠脑皮层,经过筛网、预消化、微血管组织块固化处理后,置于CO_(2)培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色法鉴定所培养的目的细胞。结果体外培养48 h后短梭形细胞从脑微血管段周围爬出;72 h后岛屿状的细胞团簇形成;96 h后团簇融合,细胞呈典型的单层铺路石样镶嵌式排列生长。第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色法检测显示,细胞胞质呈棕红色,表达为阳性,细胞核被苏木精衬染成蓝黑色。结论脑微血管组织块培养法能够成功提取原代大鼠脑微血管内皮细胞。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 原代培养 微血管组织块培养法 第Ⅷ因子相关抗原 大鼠 鉴定
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脑溢安对缺氧大鼠脑微血管内皮细胞VEGF蛋白表达的影响 被引量:7
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作者 万赛英 黎杏群 +3 位作者 梁清华 智屹惠 罗云 张花先 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期153-156,共4页
目的:观察脑溢安血清对体外缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:大鼠用脑溢安浸膏连续灌胃3d后,心脏内采血分离出血清;用新生7dSD大鼠脑内分离培养的微血管内皮细胞(RCMEC)移入厌氧培养箱造成... 目的:观察脑溢安血清对体外缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:大鼠用脑溢安浸膏连续灌胃3d后,心脏内采血分离出血清;用新生7dSD大鼠脑内分离培养的微血管内皮细胞(RCMEC)移入厌氧培养箱造成缺氧模型;MTT法测定细胞活性;免疫细胞化学及Wersternblotting研究脑微血管内皮细胞VEGF蛋白表达。结果:缺氧18h脑溢安组OD值较对照组增高(P<0. 05)。缺氧损伤的脑微血管内皮细胞内VEGF蛋白表达增强,脑溢安血清组VEGF蛋白的表达水平高于对照组(P<0. 01)。结论:缺氧可诱导脑微血管内皮细胞VEGF蛋白的表达;脑溢安可以上调VEGF蛋白的表达,这可能是脑溢安对缺氧的脑微血管内皮细胞的保护作用机制之一。 展开更多
关键词 大鼠脑微血管内皮细胞 蛋白表达 血管内皮生长因子(VEGF) VEGF蛋白 blotting 溢安血清 免疫细胞化学 保护作用机制 厌氧培养箱 缺氧培养 缺氧模型 分离培养 SD大鼠 细胞活性 MTT法 表达增强 缺氧损伤 对照组 心脏内 OD值
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洛美利嗪对大鼠脑微血管内皮细胞上P-糖蛋白功能的影响 被引量:4
3
作者 吴玉林 祝浩杰 +1 位作者 郑莉 刘国卿 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期352-355,共4页
目的 :研究洛美利嗪对大鼠脑微血管内皮细胞上P 糖蛋白功能的影响。方法 :使用荧光分光光度计和流式细胞术分析大鼠脑微血管内皮细胞内P 糖蛋白底物 罗丹明 12 3的荧光强度。结果 :环孢素A和洛美利嗪与大鼠脑微血管内皮细胞孵育后能明... 目的 :研究洛美利嗪对大鼠脑微血管内皮细胞上P 糖蛋白功能的影响。方法 :使用荧光分光光度计和流式细胞术分析大鼠脑微血管内皮细胞内P 糖蛋白底物 罗丹明 12 3的荧光强度。结果 :环孢素A和洛美利嗪与大鼠脑微血管内皮细胞孵育后能明显提高胞内罗丹明 12 3的荧光强度。人脐静脉内皮细胞内荧光强度则不受环孢素A和洛美利嗪的影响。结论 :洛美利嗪能显著地抑制大鼠脑微血管内皮细胞上P 糖蛋白的活性 ,提高P 糖蛋白底物的胞内浓度。 展开更多
关键词 P-糖蛋白 罗丹明123 大鼠脑微血管内皮细胞 流式细胞 洛美利嗪
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洛美利嗪对大鼠脑微血管内皮细胞上P-糖蛋白活力的影响与P-gp及mdr1基因mRNA表达无关(英文) 被引量:4
4
作者 吴玉林 马秉亮 +1 位作者 祝浩杰 刘国卿 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2006年第1期45-50,共6页
目的:研究洛美利嗪对原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMECs)上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。方法:使用流式细胞术分析洛美利嗪对P-gp底物-罗丹明123(rhodamine123,Rh123)在RBMECs中外排的影响,使用流式细胞术分析了洛美利嗪对RBM... 目的:研究洛美利嗪对原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMECs)上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。方法:使用流式细胞术分析洛美利嗪对P-gp底物-罗丹明123(rhodamine123,Rh123)在RBMECs中外排的影响,使用流式细胞术分析了洛美利嗪对RBMECs上P-gp表达的影响,应用RT-PCR技术分析了洛美利嗪对RBMECsmdr1基因mRNA水平表达的影响,还使用Transwell模型研究了洛美利嗪对Rh123通透RBMECs单层细胞转运的影响。结果:洛美利嗪通过抑制了RBMECs胞内Rh123的外排;洛美利嗪对P-gp功能的影响与RBMECs上P-gp及mdr1基因mRNA表达无关;在Transwell模型中,洛美利嗪还能显著增加Rh123跨RBMECs单层细胞膜的、经上室至下室的转运,并抑制相反方向的Rh123的转运。结论:洛美利嗪能显著地抑制RB-MECs上P-gp的活性,并对P-gp底物的跨细胞转运产生影响。 展开更多
关键词 P-糖蛋白 洛美利嗪 罗丹明123 大鼠脑微血管内皮细胞 流式细胞 TRANSWELL
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大鼠脑微血管内皮细胞与周细胞、星形胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型 被引量:28
5
作者 查雨锋 傅晓钟 +5 位作者 张顺 罗敏 欧瑜 董永喜 王爱民 王永林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期730-735,共6页
目的应用原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brainmicrovessel endothelial cells,BMECs)与脑微血管周细胞(brain-microvessel pericytes,BMPC)、星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立可模拟在体状态的体外血脑屏障(blood-brain barrier... 目的应用原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brainmicrovessel endothelial cells,BMECs)与脑微血管周细胞(brain-microvessel pericytes,BMPC)、星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立可模拟在体状态的体外血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型。方法原代分离、纯化和培养大鼠BMECs、BMPC和AS,通过细胞形态学和免疫细胞化学染色方法鉴定原代培养的细胞,应用Millicell细胞培养插(孔径0.4μm)建立5种不同类型的体外BBB模型,经跨内皮电阻值(transendothelial electrical resistance,TEER)、荧光素钠通透性(sodium fluorescent,Na-FLU)、碱性磷酸酶(AKP)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT1)的表达测定以及阳性药在体内和体外BBB通透量的相似性,比较评价其屏障功能。结果原代培养的BMECs呈典型的铺路卵石样结构,BMPC胞体较大且呈分枝状,AS有细长突触,胞质较浅;免疫细胞化学染色证实原代细胞为目标细胞;BMECs与BMPC、AS共培养后TEER值可达(478±25)Ω·cm2,Na-FLU的表观渗透系数为[(8.23±0.78)×10-6]cm·s-1,AKP和γ-GT1表达分别为(6.90±0.27)金氏单位·g-1Pro,(4.39±0.32)μg·g-1Pro;阳性药在体外BBB的表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)与在体数据具有较好的相关性(R2=0.92)。结论原代培养的大鼠BMECs与BMPC、AS共培养建立的体外BBB模型在形态、结构及屏障功能方面具备BBB的基本特征,为研究BBB的生理学、病理学以及筛选化合物提供了一种有用工具。 展开更多
关键词 原代培养 微血管内皮细胞 细胞 星形胶质细胞 屏障 形态学 免疫细胞化学
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一种高纯度和高活力的大鼠脑微血管内皮细胞的提取及原代培养方法 被引量:15
6
作者 查雨锋 张顺 +5 位作者 苏航 刘亭 傅晓钟 董永喜 王爱民 王永林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1616-1619,共4页
目的:建立一种纯度和活力较高、简单实用的大鼠脑微血管内皮细胞分离及原代培养方法,为建立体外血脑屏障提供材料。方法采集1-2周SD大鼠大脑皮质,应用Ⅱ型胶原酶和分散酶/胶原酶连续消化法,筛网过滤法及20%BSA和44%Percoll两次梯度离... 目的:建立一种纯度和活力较高、简单实用的大鼠脑微血管内皮细胞分离及原代培养方法,为建立体外血脑屏障提供材料。方法采集1-2周SD大鼠大脑皮质,应用Ⅱ型胶原酶和分散酶/胶原酶连续消化法,筛网过滤法及20%BSA和44%Percoll两次梯度离心法获得脑微血管段后,接种于培养瓶中进行原代培养,采用倒置显微镜对所培养的细胞进行形态学观察,以Ⅷ因子相关抗原免疫染色法对其进行鉴定。结果体外培养2h后,微血管内皮细胞爬出血管段进行贴壁生长,3~4 d呈典型的铺路卵石样结构,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达呈阳性,可见细胞胞质呈棕色,阳性细胞占99%以上。结论该方法能成功地分离并培养出高纯度的大鼠脑微血管内皮细胞,对体外血脑屏障的建立以及脑微血管内皮细胞的生物学特性和功能的深入研究具有重要意义。 展开更多
关键词 大鼠 微血管内皮细胞 原代培养 屏障 形态学 免疫染色
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大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养 被引量:18
7
作者 刘恺鸣 迟路湘 +1 位作者 鲁向辉 何国祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期2011-2013,共3页
目的 建立稳定的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)体外培养模型,并对其生物学特性进行初步研究。方法取Sprague—Dawley大鼠脑组织,通过匀浆、酶消化和梯度离心获得纯化的脑微血管段后,接种于... 目的 建立稳定的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)体外培养模型,并对其生物学特性进行初步研究。方法取Sprague—Dawley大鼠脑组织,通过匀浆、酶消化和梯度离心获得纯化的脑微血管段后,接种于涂布明胶的培养瓶进行原代培养;培养的细胞采用相差显微镜形态学观察、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定;采用跨内皮电阻(transendothelial electrical resistance,TEER)检测单层细胞通透性;CellCountingKit-8(CCK-8)方法测定细胞生长曲线。结果细胞从贴壁的脑微血管段周围长出.呈短梭形和多角形,区域性单层生长,5—7d细胞融合,经Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学检测证实培养的细胞是血管内皮细胞,原代培养的脑微血管内皮细胞表现出很强的屏障特性,随着传代次数的增加脑微血管内皮细胞的跨内皮阻抗减弱。结论 提示该方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养.原代培养的脑微血管内皮细胞是研究脑部微血管和血脑屏障的可靠技术手段。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 细胞培养 大鼠
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大鼠脑微血管内皮细胞的纯化培养与鉴定 被引量:13
8
作者 鹿文葆 秦伟伟 +2 位作者 刘淑英 李宏伟 修瑞娟 《中国脑血管病杂志》 CAS 2011年第10期535-538,共4页
目的探讨获取纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的分离和培养方法。方法选取10只3周龄Wistar大鼠,取大脑,去除白质,剪碎成大约1 mm^3大小,通过两次酶消化、20%BSA离心和33%连续密度Percoll梯度离心,获得纯度较高的大脑微血管片... 目的探讨获取纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的分离和培养方法。方法选取10只3周龄Wistar大鼠,取大脑,去除白质,剪碎成大约1 mm^3大小,通过两次酶消化、20%BSA离心和33%连续密度Percoll梯度离心,获得纯度较高的大脑微血管片段,接种于涂布明胶的35 mm dish培养皿中,加入含4μg/ml嘌呤霉素的内皮细胞培养基,2d后更换新鲜培养基;采用倒置显微镜观察内皮细胞生长状况及其形态;免疫组化法检测BMECs标志物Ⅷ因子相关抗原(vWF)的表达,以及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果培养24 h后可见内皮细胞从贴壁的脑微血管片段周围长出,细胞呈梭形;5~6 d可形成融合;融合后的BMECs呈典型的"鹅卵石"样外观;免疫组化法检测显示BMECs的vWF表达阳性,CFAP表达阴性,内皮细胞纯度(vWF阳性细胞表达率)达96%以上。结论该方法能够成功获得纯度较高的原代大鼠BMECs。 展开更多
关键词 内皮细胞 微血管 细胞 培养的 大鼠 体外研究
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大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养及鉴定 被引量:8
9
作者 郭洋 伊鹏霏 +4 位作者 吕钊君 白慧云 韦旭斌 杜绍范 穆祥 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期170-174,共5页
探讨大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,为研究猪链球菌引起脑膜炎的致病机理打下基础。采用脑组织匀浆、二次过筛及酶消化技术分离大鼠脑微血管段,对分离的脑微血管内皮细胞进行了体外培养、形态学观察、免疫荧光鉴定及生长曲线的MT... 探讨大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,为研究猪链球菌引起脑膜炎的致病机理打下基础。采用脑组织匀浆、二次过筛及酶消化技术分离大鼠脑微血管段,对分离的脑微血管内皮细胞进行了体外培养、形态学观察、免疫荧光鉴定及生长曲线的MTT法测定。结果表明:倒置显微镜下,细胞具有单层"铺路石样"排列的典型特征,免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,成功建立了大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法。 展开更多
关键词 大鼠 微血管内皮细胞 培养 鉴定
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三七总皂苷对抗H_2O_2所致大鼠脑微血管内皮细胞损伤的物质基础研究 被引量:23
10
作者 李晓宇 孙建国 +5 位作者 郑媛婷 吴晓兰 李雁楠 夏春华 顾舒静 王广基 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1030-1034,共5页
目的研究三七总皂苷对H2O2致大鼠脑微血管内皮细胞损伤产生保护作用的物质基础。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),以MTT和LDH的释放为指标,观察三七总皂苷(TPNS)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1对RBMEC损伤的保护作... 目的研究三七总皂苷对H2O2致大鼠脑微血管内皮细胞损伤产生保护作用的物质基础。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),以MTT和LDH的释放为指标,观察三七总皂苷(TPNS)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1对RBMEC损伤的保护作用。结果500μmol·L-1的H2O2对原代培养的RBMEC产生明显的损伤。20~200mg·L-1的TPNS,16·0μmol·L-1的R1,37·5~75·0μmol·L-1的Rg1,8·0~16·0μmol·L-1的Rd及5·4~54·0μmol·L-1的Rb1对H2O2致RBMEC的损伤具有明显的保护作用(P<0·05或P<0·01),Re则无此作用。结论TPNS对H2O2所致原代培养的RBMEC损伤具有明显的保护作用,产生这一作用的主要物质基础可能为Rb1、Rg1和Rd。 展开更多
关键词 原代培养 微血管内皮细胞 三七总皂苷 物质基础
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原代大鼠脑微血管内皮细胞培养方法的改进 被引量:6
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作者 徐平湘 齐特 +2 位作者 陆莉 薛明 肇玉明 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期693-698,共6页
血脑脊液屏障(blood brain barrier,BBB)是机体的内部屏障之一,由介于血循环与脑实质间的软脑膜、脉络丛的脑毛细血管壁和包于壁外的胶质膜所组成,是中枢神经系统的重要解剖结构基础[1]。血脑脊液屏障主要是由脑微血管内皮细胞(brain... 血脑脊液屏障(blood brain barrier,BBB)是机体的内部屏障之一,由介于血循环与脑实质间的软脑膜、脉络丛的脑毛细血管壁和包于壁外的胶质膜所组成,是中枢神经系统的重要解剖结构基础[1]。血脑脊液屏障主要是由脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)和周细胞构成,星形胶质足突包绕毛细血管的外周,覆盖其95%~99%的表面积。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 细胞培养方法 大鼠 脊液屏障 毛细血管 中枢神经系统 brain cells
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清开灵有效组分对体外缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用 被引量:12
12
作者 高永红 袁拯忠 +3 位作者 牛福玲 朱陵群 李澎涛 王硕仁 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2008年第7期1104-1106,共3页
目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注损伤模型,研究细胞生存活性和NO含量的变化,探讨清开灵有效组分的保护作用。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,MTT法测定细胞生存活性变化并结合硝酸酶还原法... 目的:建立脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注损伤模型,研究细胞生存活性和NO含量的变化,探讨清开灵有效组分的保护作用。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,MTT法测定细胞生存活性变化并结合硝酸酶还原法测定细胞上清NO含量。结果:模型组细胞OD值明显低于正常组,NO含量明显升高(P<0.01);清开灵各组分都显著降低上清中NO含量,而且胆酸、黄芩苷、栀子苷(12.5μg.mL-1)组和新清开灵注射液(0.03%)明显增高OD值(P<0.05)。结论:清开灵有效组分通过提高细胞生存活性、减少NO分泌而保护体外缺血再灌注损伤的脑微血管内皮细胞。 展开更多
关键词 微血管内皮细胞 缺血再灌注 清开灵有效组分 实验研究 中医药疗法
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桂枝汤有效部位A对IL-1刺激的大鼠脑微血管内皮细胞前列腺素E_2及其主要信号转导元件的影响 被引量:9
13
作者 姜楠 霍海如 +2 位作者 李兰芳 郭淑英 姜廷良 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第11期1289-1292,共4页
目的:探讨桂枝汤解热有效部位A(Fr.A)对IL-1刺激的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)PGE2信号转导通路主要元件的影响。方法:制备大鼠含药血清,通过放射免疫法测定PGE2含量,酶反应底物法测定PLA2活性,ELISA法测定COX活性,比色法测定NO含量。... 目的:探讨桂枝汤解热有效部位A(Fr.A)对IL-1刺激的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)PGE2信号转导通路主要元件的影响。方法:制备大鼠含药血清,通过放射免疫法测定PGE2含量,酶反应底物法测定PLA2活性,ELISA法测定COX活性,比色法测定NO含量。结果:Fr.A含药血清处理rCMEC后,在IL-1刺激下,孵育液中PGE2和NO含量、总COX和COX-2活性均显著减低,对升高的sPLA2活性无明显影响。结论:Fr.A可通过影响PGE2信号转导通路主要元件COX及NO,进而影响PGE2水平。 展开更多
关键词 桂枝汤有效部位A 微血管内皮细胞 细胞介素-1 前列腺素 信号转导
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大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养与鉴定 被引量:3
14
作者 王鑫 冯波 +3 位作者 刘晓晔 张倩 董虹 穆祥 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1260-1264,共5页
本研究旨在建立1种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法。取7<sup>1</sup>0日龄SD大鼠,分离大脑皮质,经Ⅱ型分散酶消化、葡聚糖3次离心法获得大鼠脑微血管段,用胶原/分散酶消化后,在37℃... 本研究旨在建立1种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法。取7<sup>1</sup>0日龄SD大鼠,分离大脑皮质,经Ⅱ型分散酶消化、葡聚糖3次离心法获得大鼠脑微血管段,用胶原/分散酶消化后,在37℃5%CO<sub>2</sub>培养箱中进行原代细胞培养。利用第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测法,结合细胞形态学观察对培养的细胞进行鉴定。成功分离培养了大鼠脑微血管内皮细胞,倒置显微镜下单个细胞呈短梭形或多角形,汇合后呈铺路石样,单层贴壁生长;免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性。本试验成功建立了分离纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法。 展开更多
关键词 大鼠 微血管内皮细胞 体外分离培养
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聚花过路黄对原代大鼠脑微血管内皮细胞糖-氧剥夺诱导下NFκ-B p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的影响 被引量:7
15
作者 冯新民 何世银 +2 位作者 樊红 谢纪文 沈霖 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期73-77,共5页
目的通过测定聚花过路黄(Lysimachia congestifloa hemsl,LCH)对原代大鼠脑微血管内皮细胞(brain mi-crovascular endothelial cells,BMECs)糖-氧剥夺诱导下NF-κB p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的变化,探讨其可能的细胞保护机制。方... 目的通过测定聚花过路黄(Lysimachia congestifloa hemsl,LCH)对原代大鼠脑微血管内皮细胞(brain mi-crovascular endothelial cells,BMECs)糖-氧剥夺诱导下NF-κB p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的变化,探讨其可能的细胞保护机制。方法选用初生的Wistar大鼠,建立脑微血管内皮细胞培养模型,以糖-氧剥夺方法(oxygen-glucosedeprivation,OGD)复制体外模拟的脑缺血再灌注模型,观察试验各组(即正常组、模型组、LCH低剂量组及LCH高剂量组)缺氧缺糖6 h、复氧复糖18 h后BMECs的活性(CCK-8比色法)变化,相差显微镜下BMECs的细胞形态学改变,免疫组化测定NF-κB p65蛋白表达的变化以及荧光定量RT-PCR测定NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达的变化。结果BMECs活性,LCH高、低剂量组明显高于模型组(均P<0.01);BMECs的细胞损伤变化,LCH高剂量组明显轻于模型组;NF-κB p65阳性表达,LCH高、低剂量组分别明显低于模型组(均P<0.01);NFκ-B p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达,LCH高、低剂量组明显低于模型组(均P<0.01),LCH低剂量组高于LCH高剂量组(P<0.01)。结论LCH对糖-氧剥夺诱导下的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制NFκ-B p65的活化及其下游靶基因ICAM-1的异常表达有关。其抑制效应可能存在一定的量-效关系。 展开更多
关键词 聚花过路黄 微血管内皮细胞 核因子ΚBP65 细胞间黏附分子1 神经保护
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缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞对共培养的人间充质干细胞分化的影响 被引量:4
16
作者 刘恺鸣 迟路湘 鲁向辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期610-613,共4页
目的探讨缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)对人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化的影响。方法分离、培养并鉴定人骨髓MSCs和大鼠BMECs,在正常和缺氧两种条件下,分别以间接... 目的探讨缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)对人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化的影响。方法分离、培养并鉴定人骨髓MSCs和大鼠BMECs,在正常和缺氧两种条件下,分别以间接和直接共培养两种方式对MSCs进行诱导分化,用流式细胞术和免疫荧光细胞化学法观察和分析诱导后MSCs的胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,Flk-1)和血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的表达。结果正常间接共培养未能诱导MSCs表达vWF和Flk-1蛋白,缺氧间接共培养和正常条件下的直接共培养均能诱导MSCs开始表达Flk-1蛋白,而vWF染色仍为阴性,缺氧条件下直接共培养表达Flk-1蛋白的MSCs比正常条件增多,而且部分Flk-1阳性细胞开始同时表达vWF蛋白。结论BMECs能够通过细胞直接接触诱导共培养的MSCs开始向内皮分化,缺氧条件下的直接共培养BMECs能诱导更多的MSCs更彻底地向内皮分化。 展开更多
关键词 间充质干细胞 缺氧 共培养 分化 微血管内皮细胞
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大鼠脑微血管内皮细胞的培养 被引量:1
17
作者 刘政操 杨向红 +2 位作者 李宝月 王跃中 张亚加 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期435-435,444,共2页
血管内皮细胞在动脉粥样硬化的发病机制中发挥重要作用。本文通过胶原酶消化、密度梯度离心等技术建立一种程序简便、经济、稳定、获得细胞纯度较高的体外分离、长期培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法。
关键词 微血管内皮细胞 细胞培养 大鼠
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新生隐球菌培养上清液对大鼠脑微血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9和微管相关蛋白的增强作用 被引量:3
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作者 徐赤宇 温海 朱红梅 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期568-570,共3页
目的:观察深部致病性真菌新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶对脑微血管内皮细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9、微管相关蛋白(Tau-LRP)表达的影响以及抑肽酶的干预作用。方法:在含有成熟的脑微血管内皮细胞的培养皿中,分别加入胞外蛋白水解酶... 目的:观察深部致病性真菌新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶对脑微血管内皮细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9、微管相关蛋白(Tau-LRP)表达的影响以及抑肽酶的干预作用。方法:在含有成熟的脑微血管内皮细胞的培养皿中,分别加入胞外蛋白水解酶相关成分及其特异性抑制剂后,应用免疫组化技术检测内皮细胞中MMP-9、Tau-LRP表达的变化。结果:加入新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶和(或)丝氨酸蛋白酶后内皮细胞的MMP-9、Tau-LRP表达均升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);抑制剂组的MMP-9、Tau-LRP与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶通过上调MMP-9和(或)Tau-LRP表达,诱导微血管内皮细胞基质降解和细胞自身微管结构及紧密连接发生变化,可能是最终导致血脑屏障通透性增加的原因之一。 展开更多
关键词 新生隐球菌 微血管内皮细胞 抑肽酶 胞外蛋白水解酶 基质金属蛋白酶-9 微管相关蛋白 屏障
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肾上腺髓质素2对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 蔡莉蓉 李玉珍 刘秀华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期908-910,共3页
目的:研究肾上腺髓质素2(AM2)对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响。方法:分离并培养SD大鼠脑微血管内皮细胞,经Ⅷ因子相关抗原的抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照、AM2(10-7mol/L1、0-8mol/L和10-9mol/L)、ADM、ADM+AM2、10%胎牛血清和... 目的:研究肾上腺髓质素2(AM2)对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响。方法:分离并培养SD大鼠脑微血管内皮细胞,经Ⅷ因子相关抗原的抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照、AM2(10-7mol/L1、0-8mol/L和10-9mol/L)、ADM、ADM+AM2、10%胎牛血清和10%胎牛血清+AM210-7mol/L等8组,以[3H]-TdR掺入法测定MEC增殖反应。结果:10-7-10-9mol/L各浓度AM2、ADM以及AM2和ADM合用对于静止状态的脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入与对照组比较均无明显差异(均P>0.05)。10%胎牛血清刺激组脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入比对照组高87.5%(P<0.05),10-7mol/L AM2抑制胎牛血清诱导的脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入增加(P<0.05)。结论:AM2抑制血清诱导的脑微血管内皮细胞增殖。 展开更多
关键词 肾上腺髓质素 细胞增殖 微血管内皮细胞
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布美他尼对大鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤后增殖的影响
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作者 付佩彩 喻志源 +3 位作者 李彩红 唐荣华 叶茂斌 王伟 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期615-618,共4页
目的观察钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl-cotransporter 1,NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脑微血管内皮细胞(BMEC)缺氧损伤后增殖的影响。方法将原代培养的大鼠BMEC分为3组:对照组、氧糖剥夺/复氧(OGD/Reo)组和OGD/Reo+Bumetanide(1... 目的观察钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl-cotransporter 1,NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脑微血管内皮细胞(BMEC)缺氧损伤后增殖的影响。方法将原代培养的大鼠BMEC分为3组:对照组、氧糖剥夺/复氧(OGD/Reo)组和OGD/Reo+Bumetanide(10μmol/L)组。在氧糖剥夺/复氧6、12、24和48h时,用MTT法检测细胞活力,Edu染色以及流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期情况。结果氧糖剥夺/复氧6、12、24h,BMEC活力下降,Edu染色阳性率减少且S期细胞减少。而与OGD/Reo组相比,OGD/Reo+Bumetanide组BMEC活力增加[复氧6h:(0.497±0.039)vs.(0.612±0.044)],Edu染色阳性率增加[6h时:(5.742±0.195)%vs.(7.125±0.144)%],且S期细胞增多[6h时:(5.845±0.389)%vs.(7.124±0.542)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论布美他尼可促进缺氧损伤后BMEC的活力及细胞增殖,提示NKCC1通路在BMEC缺氧损伤后的细胞增殖中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 布美他尼 钠-钾-氯共转运体1 微血管内皮细胞 细胞增殖
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