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Nrf2通过降低有氧糖酵解缓解CoCl_(2)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移
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作者 张穗 黄家瑜 +2 位作者 何丽丽 买热甫喀·木合塔尔 罗琴 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第5期919-926,共8页
目的:探究核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)通过有氧糖酵解途径影响CoCl_(2)诱导的低氧条件下原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)的增殖和迁移,并揭示其潜在的作用机... 目的:探究核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)通过有氧糖酵解途径影响CoCl_(2)诱导的低氧条件下原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)的增殖和迁移,并揭示其潜在的作用机制。方法:采用酶消化法分离原代SD大鼠PASMCs,并通过200μmol/L CoCl_(2)诱导建立化学性低氧细胞模型。实验设置0、6、24和48 h四个时点观察CoCl_(2)刺激下PASMCs中有氧糖酵解关键酶[丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2,PKM2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)和单羧酸转运体蛋白4(monocarboxylate transporter 4,MCT4)]及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclera antigen,PCNA)的蛋白表达变化。通过Western blot筛选Nrf2激活剂富马酸二甲酯(dimethyl fumarate,DMF)和抑制剂ML385的最佳作用浓度,随后将细胞分为4组:常氧对照(normoxic control,NC)组、CoCl_(2)组、CoCl_(2)+DMF组及NC+ML385组,分别检测各组PASMCs的增殖和迁移能力,以及HIF-1α、Nrf2和有氧糖酵解关键酶的蛋白表达水平。结果:在CoCl_(2)诱导大鼠PASMCs低氧细胞模型中,随着低氧时间的延长,Nrf2蛋白水平显著下降(P<0.05),有氧糖酵解关键酶及PCNA蛋白水平显著升高(P<0.05),PASMCs迁移能力显著增强(P<0.05)。DMF干预后有氧糖酵解关键酶的蛋白表达与大鼠PASMCs增殖和迁移能力显著下降(P<0.05),而ML385抑制Nrf2表达后以上实验结果均出现相反变化(P<0.05)。结论:Nrf2可以通过降低有氧糖酵解缓解CoCl_(2)诱导化学性低氧原代大鼠PASMCs的增殖和迁移。 展开更多
关键词 肺动脉平滑肌细胞 有氧糖酵解 核因子E2相关因子2 细胞增殖 细胞迁移
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虎杖苷调节YAP1/TAZ信号通路对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响 被引量:2
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作者 刘文光 刘思佟 +5 位作者 张薇薇 庄桂银 谢思雨 田雪 李晓珊 谷强 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期68-74,共7页
目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+... 目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只。缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT%)和管壁面积占总面积的百分比(WA%)。分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组。CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。与NC组相比,Hypoxia组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P<0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡。 展开更多
关键词 缺氧性肺动脉高压 虎杖苷 肺动脉平滑肌细胞 增殖 凋亡 YAP1/TAZ信号通路
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siRNA沉默EGLN1基因对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞生长的影响 被引量:1
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作者 孙莉 嘎琴 +1 位作者 杨全余 靳国恩 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期787-791,共5页
目的:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),利用小干扰RNA技术转染PASMCs干扰EGLN1基因表达,检测细胞活力变化,从而验证EGLN1在PASMCs活力变化中的作用。方法:采用原代培养PASMCs,构建出特异的EGLN1 siRNA脂质体并转染到PASMCs;分别... 目的:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),利用小干扰RNA技术转染PASMCs干扰EGLN1基因表达,检测细胞活力变化,从而验证EGLN1在PASMCs活力变化中的作用。方法:采用原代培养PASMCs,构建出特异的EGLN1 siRNA脂质体并转染到PASMCs;分别在常氧和低氧下进行细胞培养,采用Western blot检测PASMCs的EGLN1蛋白、VEGF蛋白表达水平;用CCK-8法检测细胞活力,探讨低氧条件下沉默EGLN1基因表达后对PASMCs活力的影响。结果:低氧下PASMCs活力变化和VEGF的蛋白水平表达较常氧下增加并呈时间依赖性;EGLN1沉默后,无论低氧和常氧下,PASMCs活力变化和VEGF的蛋白水平表达均受到抑制。结论:EGLN1基因参与调控低氧下大鼠PASMCs的生长,其调节可能是通过VEGF的介导而完成的。 展开更多
关键词 低氧 EGLN1基因 大鼠肺动脉平滑肌细胞 细胞活力
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TLR9-JNK信号通路调控缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖 被引量:4
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作者 吴启建 张二龙 +3 位作者 孙滨达 徐刚 黄缄 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期2350-2357,共8页
目的研究Toll样受体-9(toll-like receptor 9,TLR9)在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法采用MTT、Western blot、PCR法检测RPASMCs的相对增殖水平、蛋白表达水... 目的研究Toll样受体-9(toll-like receptor 9,TLR9)在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法采用MTT、Western blot、PCR法检测RPASMCs的相对增殖水平、蛋白表达水平、mRNA转录水平。①3%O_(2),36 h处理RPASMCs,构建缺氧诱导RPASMCs增殖的细胞模型,检测细胞相对增殖水平、TLR9、磷酸化c-jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)蛋白表达水平。②缺氧条件下分别使用小干扰RNA序列(small interfering RNA sequence,siRNA)或20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826敲低或活化TLR9,检测RPASMCs的细胞增殖水平和c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平。③缺氧时使用5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测缺氧条件下细胞相对增殖水平。④缺氧时复合使用20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826和5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测RPASMCs的JNK磷酸化水平和相对增殖水平。结果缺氧组RPASMCs的相对增殖水平[(1.30±0.07),P<0.01]以及TLR9蛋白水平[(1.70±0.22),P<0.05]和JNK磷酸化[(1.83±0.18),P<0.01]都显著高于常氧组。敲低TLR9显著抑制缺氧诱导的RPASMC增殖[(0.64±0.09),P<0.01]并减少JNK磷酸化[(0.49±0.01),P<0.001]。TLR9激动剂显著促进RPASMCs增殖[(2.01±0.08),P<0.001]且增加JNK的磷酸化[(2.11±0.33),P<0.01]。JNK抑制剂抑制RPASMCs增殖[(0.70±0.06),P<0.05]。与缺氧+TLR9激动剂组相比,缺氧+TLR9激动剂+JNK抑制剂组RPASMCs JNK磷酸化[(0.82±0.14)vs(1.59±0.30),P<0.001]和相对增殖水平[(1.08±0.05)vs(1.35±0.02),P<0.001]都显著降低。结论缺氧时TLR9通过激活JNK通路促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。 展开更多
关键词 TOLL样受体-9 磷酸化c-jun氨基末端激酶 大鼠肺动脉平滑肌细胞 缺氧 细胞增殖
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新型气体信号分子硫化氢对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响 被引量:33
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作者 陈晓波 杜军保 +2 位作者 张春雨 唐朝枢 周伟仅 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期341-344,共4页
目的 :探讨新型气体信号分子硫化氢 (H2 S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用。方法 :2 4只Wistar大鼠 ,随机分为对照组 (8只 )、低氧组 (8只 )和低氧 +NaHS组 (8只 )。以化学分光光度法测定血浆H2 S含量 ;采用原位缺口末端标... 目的 :探讨新型气体信号分子硫化氢 (H2 S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用。方法 :2 4只Wistar大鼠 ,随机分为对照组 (8只 )、低氧组 (8只 )和低氧 +NaHS组 (8只 )。以化学分光光度法测定血浆H2 S含量 ;采用原位缺口末端标记方法 (TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡 ,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率 ;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl 2、Fas和caspase 3表达 ,并进行定位和半定量分析。结果 :低氧组与对照组比较 ,低氧组大鼠血浆中H2 S含量下降 36 % ,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少 5 2 .9% ,肺动脉平滑肌细胞Bcl 2蛋白表达增高 1 2 3.9% ,Fas蛋白表达减弱 4 5 % ,caspase 3表达与对照组差异无显著性 ;低氧组与低氧 +NaHS组比较 ,低氧 +NaHS组大鼠血浆中H2 S含量升高 6 5 % ,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高 6 2 .5 % ,肺动脉平滑肌细胞Bcl 2蛋白表达减弱 36 .4 % ,Fas和caspase 3蛋白表达分别增高 84 .8%、34.5 % ;结论 :低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少 ,H2 S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl 2蛋白表达、增加Fas和caspase 3蛋白表达 。 展开更多
关键词 气体信号分子 硫化氢 低氧血症大鼠 肺动脉 平滑肌细胞 细胞凋亡 H2S
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DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究
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作者 耿建慧 陈建 +6 位作者 张二龙 阳一栋 陈德伟 吴刚 王羽 赵文琦 高钰琪 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期731-739,共9页
目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering... 目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering RNA sequence, siRNA)敲低Dnase2a的表达,采用质粒过表达上调细胞中Dnase2a和Hif1a的表达。采用外源性加入线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)诱导细胞增殖,使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA作为HIF-1α激动剂上调细胞中HIF-1α的表达。采用MTS法检测各组细胞增殖能力,实时荧光定量PCR法检测Dnase2a的mRNA表达,Western blot法检测DNase 2α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期蛋白(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达。结果 缺氧可诱导RPASMCs增殖,并上调DNase 2α的表达(P<0.05)。siRNA可显著降低RPASMCs中Dnase2a的表达(P<0.05),并显著增强缺氧诱导的RPASMCs增殖(P<0.05),同时显著上调PCNA和Cyclin D1的蛋白表达(P<0.05)。过表达Dnase2a可显著上调RPASMCs中DNase 2α的表达(P<0.05),并显著抑制缺氧诱导RPASMCs增殖(P<0.05)。外源性加入mtDNA可诱导RPASMCs增殖,而过表达Dnase2a可显著抑制mtDNA诱导的RPASMCs增殖(P<0.05)。过表达Hif1a或使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA可显著上调HIF-1α表达,并显著上调DNase 2α的蛋白表达(P<0.05)。结论 DNase 2α可抑制缺氧或线粒体DNA诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,缺氧诱导的DNase 2α表达上调与HIF-1α有关。 展开更多
关键词 DNase 线粒体DNA 大鼠肺动脉平滑肌细胞 缺氧 增殖
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钙敏感受体在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用 被引量:14
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作者 李光伟 邢文婧 +4 位作者 郝静辉 白淑芝 李宏霞 林岩 徐长庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2433-2437,共5页
目的:观察钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法:Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。应用Western blotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在肺动脉平滑肌的表达;采用激光共聚焦扫描技... 目的:观察钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法:Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。应用Western blotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在肺动脉平滑肌的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测不同处理因素对细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,应用MTT法分析不同处理因素对细胞存活率的影响。结果:大鼠肺动脉平滑肌细胞有CaSR蛋白表达。缺氧能够增加CaSR和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、细胞存活率及[Ca2+]i(与对照组比较,P<0.05)。GdCl3(CaSR激动剂)能够增强缺氧的上述作用,NPS2390(CaSR抑制剂)则能够减弱缺氧的作用。结论:缺氧诱导的CaSR表达增加参与了缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖。 展开更多
关键词 受体 钙敏感 肺动脉平滑肌细胞 缺氧 细胞增殖
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不同方法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞的性状 被引量:7
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作者 王关嵩 钱桂生 +1 位作者 黄春基 杨晓静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期286-288,共3页
关键词 肺动脉 大鼠 平滑肌细胞 细胞培养
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低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响 被引量:9
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作者 夏世金 钱桂生 +2 位作者 胡明冬 黄勇 谭永红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期195-197,共3页
目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低... 目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 GAX基因 低氧 肺动脉平滑肌细胞 增殖
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川芎平喘合剂对慢性阻塞性肺疾病肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及对Rho激酶的影响 被引量:9
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作者 郭晓燕 徐向前 +2 位作者 钱家骅 范春香 张惠勇 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期2662-2664,共3页
目的:观察川芎平喘合剂对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及对Rho激酶的影响。方法:体外培养PASMCs,分为对照组、模型组、川芎平喘合剂组(低、中、高浓度组)、Rho激酶抑制剂组。采用CCK-8方法测定PASMCs增殖,Western blot测定PASMCs中ROCK... 目的:观察川芎平喘合剂对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖及对Rho激酶的影响。方法:体外培养PASMCs,分为对照组、模型组、川芎平喘合剂组(低、中、高浓度组)、Rho激酶抑制剂组。采用CCK-8方法测定PASMCs增殖,Western blot测定PASMCs中ROCK1、ROCK2表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组PASMCs增殖明显升高,ROCK1、ROCK2表达增强;Rho激酶抑制剂组PASMCs增殖、ROCK1、ROCK2表达均显著低于模型组;与模型组相比,中、高剂量组PASMCs增殖水平显著降低,低、中、高剂量组ROCK1、ROCK2表达低于模型组,以高剂量组降低显著;低、中剂量组ROCK1、ROCK2表达均低于抑制剂组(P<0.05或P<0.01)。结论:川芎平喘合剂可明显抑制COPD相关肺动脉高压大鼠PASMCs增殖,与降低Rho相关蛋白表达有关。 展开更多
关键词 川芎平喘合剂 COPD 肺动脉高压 肺动脉平滑肌细胞
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四乙铵对正常及肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞外向钾电流作用的比较 被引量:7
11
作者 张庆利 李智 +2 位作者 丛华 李金鸣 赫梅生 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期98-100,共3页
以全细胞膜片钳制技术观察了正常及慢性常压低氧肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞外向钾电流,并进行了四乙铵(TEA)对两种动脉外向钾电流作用的量效关系比较.结果表明:将细胞膜电位钳制在-50mV,当指令电位大于-50mV时... 以全细胞膜片钳制技术观察了正常及慢性常压低氧肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞外向钾电流,并进行了四乙铵(TEA)对两种动脉外向钾电流作用的量效关系比较.结果表明:将细胞膜电位钳制在-50mV,当指令电位大于-50mV时,可以记录到电压依赖性的外向钾电流,且慢性常压低氧肺动脉高压时该电流较正常时为小;当指令电位为+70mV。 展开更多
关键词 肺动脉高压 四乙铵 肺动脉 平滑肌细胞
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一氧化碳调节低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡 被引量:6
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作者 宫丽敏 杜军保 +1 位作者 石云 唐朝枢 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期242-246,共5页
目的 :探讨一氧化碳对低氧大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 :将大鼠随机分为 4组 :常氧对照组 (n =7)、低氧组 (n =6 )、低氧 +锌原卟啉组 (低氧 +ZnPP组 ,n =6 )及低氧 +低浓度一氧化碳组 (低氧+低浓度CO组 ,n =5 )。应... 目的 :探讨一氧化碳对低氧大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 :将大鼠随机分为 4组 :常氧对照组 (n =7)、低氧组 (n =6 )、低氧 +锌原卟啉组 (低氧 +ZnPP组 ,n =6 )及低氧 +低浓度一氧化碳组 (低氧+低浓度CO组 ,n =5 )。应用Bcl 2、Caspase 3多克隆抗体和NF κΒ单克隆抗体经免疫组织化学检测技术及原位缺口末端标记法 (TUNEL)对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行凋亡定位及半定量分析。结果 :(1)低氧组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase 3表达积分低于对照组 ,NF κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl 2表达积分明显高于对照组 ;(2 )低氧 +ZnPP组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数明显低于对照组和低氧组 ,平滑肌细胞Caspase 3表达积分明显低于对照组 ,与低氧组无差异 ;NF κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl 2表达积分明显高于对照组和低氧组 ;(3)低氧 +低浓度CO组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase 3表达积分明显高于对照组、低氧组及低氧 +ZnPP组 ,NF κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl 2表达积分明显低于低氧组及低氧 +ZnPP组 ,与对照组差异无显著性。结论 :CO促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡 ,同时还伴有Bcl 2和NF 展开更多
关键词 一氧化碳 低氧 大鼠 肺动脉平滑肌细胞 药理学 细胞凋亡
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不同方法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞的差异 被引量:12
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作者 易斌 钱桂生 +1 位作者 白莉 王关嵩 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第24期2425-2427,共3页
目的比较酶消化法、组织贴块法所培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterialsmoothmusclecell,PASMC)的生长曲线、蛋白质含量、胞内[Ca2+]含量上的差异性,探讨不同方法是否可以用于同一系列的信号通路研究。方法酶消化法、组织贴块法... 目的比较酶消化法、组织贴块法所培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterialsmoothmusclecell,PASMC)的生长曲线、蛋白质含量、胞内[Ca2+]含量上的差异性,探讨不同方法是否可以用于同一系列的信号通路研究。方法酶消化法、组织贴块法分别培养PASMC,经过纯化以及免疫组化鉴定后,采用改良Lowry法测定蛋白质含量,采用荧光指示剂法测定胞内[Ca2+]含量,光镜下观察生长曲线。结果两种方法均顺利建立了纯PASMC系,但是在生长曲线和蛋白质含量上存在一定程度的差异,在胞内[Ca2+]含量上差异有显著性意义(P<0.05)。结论在同一系列的信号通路研究中应该尽量采用其中一种细胞培养方法。 展开更多
关键词 肺动脉平滑肌细胞 细胞培养 蛋白质含量
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衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响 被引量:5
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作者 沈丹彤 傅向阳 +2 位作者 黄巧冰 黄绪亮 王士雯 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期562-565,共4页
目的探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组,应用MTT比色法、3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果同年轻组比较,老年... 目的探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组,应用MTT比色法、3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果同年轻组比较,老年组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,增殖细胞核抗原(PCNA)增加;同常氧组比较,缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入先受抑制,后明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,PCNA增加。结论衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖,衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。 展开更多
关键词 衰老 缺氧 培养 大鼠 肺动脉 平滑肌细胞 增殖
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重楼皂苷Ⅶ抑制内皮素1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移 被引量:6
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作者 赵方允 王紫微 +4 位作者 张春芳 张悦 徐双兰 邢西迁 杨姣 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1477-1478,共2页
肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是由于肺血管收缩反应性增强及肺血管结构重建,最终引起肺动脉压力升高为特征的一组病理生理综合征[1-2]。其中,由肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增... 肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是由于肺血管收缩反应性增强及肺血管结构重建,最终引起肺动脉压力升高为特征的一组病理生理综合征[1-2]。其中,由肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖、迁移所引起的肺血管结构重建,是PAH形成的中心环节[3-5]。重楼为百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎,主要成分重楼皂苷具有抗肿瘤、止血、抗炎、镇痛、镇静、抑制血管生成、免疫调节、抗氧化等功效[6-7]。其中,抗炎及抑制血管生成的作用可能会对PAH的防治起一定作用。该文主要研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllinⅦ,PPⅦ)对内皮素-1(endothilin-1,ET-1)诱导的大鼠PASMCs增殖和迁移的作用。 展开更多
关键词 重楼皂苷Ⅶ 内皮素-1 肺动脉平滑肌细胞 肺动脉高压 增殖 迁移 凋亡
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一氧化氮诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡机制研究 被引量:9
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作者 田宏 杜军保 +2 位作者 范瑾 赵卫红 唐朝枢 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期870-874,共5页
目的 :研究一氧化氮 (NO)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)凋亡的作用机制。方法 :体外培养Wistar大鼠PASMC ,加入NO供体硝普钠 (SNP)于常氧和低氧条件下孵育 12h或 2 4h ,通过流式细胞术碘化丙啶染色法观察PASMC细胞周期时段及凋亡亚... 目的 :研究一氧化氮 (NO)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)凋亡的作用机制。方法 :体外培养Wistar大鼠PASMC ,加入NO供体硝普钠 (SNP)于常氧和低氧条件下孵育 12h或 2 4h ,通过流式细胞术碘化丙啶染色法观察PASMC细胞周期时段及凋亡亚二倍体峰变化 ,应用细胞免疫化学法检测PASMCcaspase - 3和NF -κB的表达 ,同时行DNA断裂琼脂糖凝胶电泳。结果 :SNP作用后PASMC出现剂量 -依赖性促凋亡作用 (P <0 .0 1) ,表现为凋亡指数与caspase - 3表达的不同程度的增强。随凋亡的进展 ,出现PASMC凋亡核小体DNAladder,同时PASMCNF-κB阳性核表达较对照组少 (P <0 .0 1)。结论 :外源性NO诱导大鼠PASMC凋亡 ,caspase - 3与NF 展开更多
关键词 一氧化氮 肺动脉 平滑 血管 细胞凋亡 大鼠
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NHE-1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响 被引量:6
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作者 陆俊羽 姚伟 +1 位作者 钱桂生 吴国明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1282-1284,共3页
目的 探讨NHE 1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)凋亡的影响。方法 构建NHE 1核酶基因逆转录病毒载体 ,转染体外培养的大鼠PASMC ,应用半定量RT PCR法 (sqRT PCR)测定细胞内NHE 1mRNA的表达、BCECF法测定pHi、流式细胞仪... 目的 探讨NHE 1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)凋亡的影响。方法 构建NHE 1核酶基因逆转录病毒载体 ,转染体外培养的大鼠PASMC ,应用半定量RT PCR法 (sqRT PCR)测定细胞内NHE 1mRNA的表达、BCECF法测定pHi、流式细胞仪测细胞周期、电镜及原位细胞凋亡检测 (TUNEL法 )观察细胞凋亡情况。结果 转染NHE 1核酶基因的细胞 ,NHE 1mRNA表达量及pHi较空载体转染细胞及未转染细胞显著降低 ,细胞凋亡率显著增加 ,电镜示细胞凋亡 ,凋亡小体形成。结论 NHE 1核酶基因转染可通过NHE 1抑制、细胞内酸化 ,显著诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 肺动脉平滑肌细胞 NHE-1 细胞凋亡 核酶 细胞转染
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三七皂苷R1对肺高压大鼠肺动脉平滑肌细胞SOCE的抑制作用 被引量:14
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作者 王瑞幸 戴耄 +5 位作者 穆云萍 江娇 黄秋虹 吴枝娟 焦海霞 林默君 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1463-1468,共6页
目的探讨三七皂苷R1(notoginsenoside R1)对慢性低氧(chronic hypoxia,CH)及野百合碱(monocrotaline,MCT)致肺高压(pulmonary hypertension,PH)大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)钙池操纵性钙内流(s... 目的探讨三七皂苷R1(notoginsenoside R1)对慢性低氧(chronic hypoxia,CH)及野百合碱(monocrotaline,MCT)致肺高压(pulmonary hypertension,PH)大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)钙池操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)的作用。方法制备CH及MCT致PH大鼠模型,通过Mn2+淬灭Fura-2荧光和Fluo-3荧光检测胞质游离Ca2+浓度(intracellular free calcium concentration,[Ca2+]i)观察三七皂苷R1对CH及MCT致PH大鼠PASMCs SOCE的作用。结果成功制备CH及MCT致PH大鼠模型;在硝苯地平预处理情况下,10μmol·L-1三七皂苷R1可明显降低环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱导CH及MCT致PH大鼠PASMCs Mn2+淬灭幅度、Mn2+最大淬灭率、胞膜Ca2+内流量和静息[Ca2+]i。结论三七皂苷R1对CH及MCT致PH大鼠PASMCs具有抑制SOCE和降低静息[Ca2+]i的作用。 展开更多
关键词 肺高压 慢性低氧 野百合碱 三七皂苷R1 钙池操纵性钙内流 肺动脉平滑肌细胞
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芍药苷对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响 被引量:6
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作者 钱国清 褚金国 +2 位作者 李国祥 尹凤英 王良兴 《中华中医药学刊》 CAS 2013年第12期2709-2710,I0027,I0028,共4页
目的:研究芍药苷对低氧大鼠肺动脉平滑肌凋亡的影响及其机制。方法:酶消化法联合组织贴块法培养肺动脉平滑肌细胞后随机分为:正常组、低氧组、低氧加芍药苷(0.2、2和20μmol/L)组。采用CCK-8法检测芍药苷对低氧肺动脉平滑肌细胞生长抑... 目的:研究芍药苷对低氧大鼠肺动脉平滑肌凋亡的影响及其机制。方法:酶消化法联合组织贴块法培养肺动脉平滑肌细胞后随机分为:正常组、低氧组、低氧加芍药苷(0.2、2和20μmol/L)组。采用CCK-8法检测芍药苷对低氧肺动脉平滑肌细胞生长抑制情况;流式细胞术检测细胞周期;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:芍药苷对低氧肺动脉平滑肌细胞抑制率与其浓度呈正相关;芍药苷使肺动脉平滑肌细胞凋亡率增加,使肺动脉平滑肌细胞发生G2/M期阻滞;芍药苷抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达。结论:芍药苷可能通过阻滞细胞周期、调节Bcl-2和Bax蛋白表达,诱导低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 芍药苷 低氧 肺动脉平滑肌细胞 凋亡
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Diazoxide对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖的作用 被引量:8
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作者 胡红玲 汪涛 +2 位作者 张珍祥 赵建平 徐永健 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期2002-2006,共5页
目的:研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide和线粒体膜电位(ΔΨm)在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用,探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法:取大鼠正... 目的:研究线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide和线粒体膜电位(ΔΨm)在缺氧导致的大鼠肺动脉平滑肌细胞内氧自由基的变化及细胞增殖/凋亡失衡中的作用,探索缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压形成的发生机制。方法:取大鼠正常肺组织,分离出肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)进行常氧或慢性缺氧培养。将样本分为6组:①正常对照组;②线粒体膜上ATP敏感钾通道(MitoKATP)开放剂diazoxide组;③MitoKATP阻断剂5-HD组;④慢性缺氧(CH)组;⑤CH+diazoxide组;⑥CH+5-HD组。利用激光共焦显微镜(Leica SP-1 USA)成像检测线粒体膜电位,荧光染色检测细胞内氧自由基含量,流式细胞仪检测细胞周期和MTT法检测细胞增殖情况。结果:①Diazoxide作用24 h后,R-123荧光强度明显强于正常对照组,线粒体膜电位去极化,细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组,细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组,P<0.05;而5-HD作用24 h后,上述指标与正常对照组相比较,均无显著差异,P>0.05;②慢性缺氧24 h,结果与di-azoxide组相似,R-123荧光强度明显强于正常对照组,线粒体膜电位去极化,细胞内氧自由基含量明显高于正常对照组,细胞增殖明显多于正常对照组、凋亡少于正常对照组,P<0.05;CH+diazoxide组,R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显强于缺氧组,细胞内氧自由基含量明显高于缺氧组,细胞增殖明显多于缺氧组、凋亡少于缺氧组,P<0.05;CH+5-HD组,R-123荧光强度和线粒体膜电位去极化明显弱于缺氧组,细胞内氧自由基含量明显低于缺氧组,细胞增殖明显少于缺氧组、凋亡多于缺氧组,P<0.05;R-123荧光强度、MTT的A值与细胞内氧自由基含量均呈显著正相关;凋亡细胞百分比与细胞内氧自由基含量呈显著负相关。结论:本实验结果显示,diazox-ide能够通过开放线粒体膜上ATP敏感的钾通道,引起ΔΨm去极化,ΔΨm的变化影响细胞内氧自由基的含量,氧自由基可能作为信号分子通过影响肺动脉平滑肌细胞的增殖/凋亡的平衡,参与了缺氧性肺动脉重建和肺动脉高压的发生和发展过程。 展开更多
关键词 肺动脉 平滑肌细胞 缺氧 线粒体膜电位 线粒体ATP敏感性钾通道 活性氧
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