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谷氨酸促进大鼠海马神经元的内钙升高 被引量:3
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作者 酒亚明 高尚邦 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期1-3,共3页
谷氨酸能影响大鼠海马神经元胞内钙信号的变化,进而影响海马神经元神经冲动的发放和学习记忆过程。运用荧光测钙技术实时监测了大鼠海马神经元内钙信号的动态变化,同时分析了谷氨酸对其胞内钙信号的影响。试验表明:谷氨酸能够显著提高... 谷氨酸能影响大鼠海马神经元胞内钙信号的变化,进而影响海马神经元神经冲动的发放和学习记忆过程。运用荧光测钙技术实时监测了大鼠海马神经元内钙信号的动态变化,同时分析了谷氨酸对其胞内钙信号的影响。试验表明:谷氨酸能够显著提高胞内游离钙离子的浓度;细胞外钙离子的存在、谷氨酸刺激时间及刺激频率的增加都能引起胞内钙信号不同程度的升高;但谷氨酸的过度刺激会引起钙离子浓度的超负荷,从而导致神经元结构和功能的损坏。 展开更多
关键词 谷氨酸 大鼠海马神经元 胞内钙信号
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5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响 被引量:1
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作者 王杰琼 高冬梅 +2 位作者 于艳红 张媛媛 张惠云 《世界科学技术-中医药现代化》 2015年第4期794-799,共6页
目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重... 目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为:非转染细胞(NTC)和转染细胞(TC),转染细胞分为:转染组(TC+5-HTR2C质粒)、空质粒组(TC+空质粒)、激动剂组(TC+激动剂);为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western-blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性。结果:海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率最高;体外培养的海马神经元中加入激动剂m CPP后5 min至60 min,MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC+5-HTR2C质粒和TC+激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高。结论:5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞。激动剂组可在m CPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞。通过比较TC+5-HTR2C质粒组及TC+激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强。因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功。 展开更多
关键词 5-HTR2C重组质粒 电转染 大鼠海马神经元 抑郁症
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糖皮质激素在MCAO大鼠海马神经元凋亡中的作用及健脑安干预的研究 被引量:2
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作者 魏翠柏 田金洲 +1 位作者 白晶 唐一鹏 《中医药学刊》 2004年第5期812-814,共3页
目的 :观察脑缺血再灌注后 2 4h内的内源性糖皮质激素对海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预。方法 :应用大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型 ,采取甲苯胺兰、TUNEL和免疫组化实验方法 ,动态观察脑缺血再灌注后 2 4h内的内源性糖皮质激素对... 目的 :观察脑缺血再灌注后 2 4h内的内源性糖皮质激素对海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预。方法 :应用大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型 ,采取甲苯胺兰、TUNEL和免疫组化实验方法 ,动态观察脑缺血再灌注后 2 4h内的内源性糖皮质激素对大鼠海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预。结果 :TUNEL阳性细胞从再灌注 2h开始表达 ,再灌注 6h阳性细胞表达继续增加 ,再灌注 12h达高峰 ,再灌注 2 4h下降。治疗组、对照组、拮抗剂组与模型组在再灌注各时点均有显著性差别 (P <0 .0 5 ,) ,其中治疗组和拮抗剂组差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :健脑安可有效抑制脑缺血再灌注 2 4内 ,内源性糖皮质激素对海马神经元的促凋亡作用。 展开更多
关键词 糖皮质激素 MCAO大鼠海马神经元 细胞凋亡 健脑安 中药干预 卒中
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低氧预适应减轻缺氧所致大鼠海马神经元线粒体膜改变
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作者 陈堃 张志发 +4 位作者 廖明锋 李璐 罗爱林 田玉科 王学仁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期500-503,共4页
目的通过观察低氧预适应处理对缺氧引起的神经元bcl-2表达、线粒体膜电位变化的影响,探讨低氧预适应处理对神经元缺氧性损伤保护作用的机制。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,分组处理后,采用免疫组织化学法对细胞bcl-2表达进行检测;采... 目的通过观察低氧预适应处理对缺氧引起的神经元bcl-2表达、线粒体膜电位变化的影响,探讨低氧预适应处理对神经元缺氧性损伤保护作用的机制。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,分组处理后,采用免疫组织化学法对细胞bcl-2表达进行检测;采用罗丹明123染色测定线粒体膜电位,激光共聚焦扫描显微镜观察缺氧条件下各组细胞的线粒体膜电位变化。结果低氧预处理组海马神经细胞在急性缺氧1h复氧后,bcl-2表达阳性率为(74.5±9.8)%,较缺氧对照组(69.5±10.3)%明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);线粒体膜电位测定发现,与缺氧对照组比较,低氧预处理组从缺氧第80s开始,各时间点线粒体膜电位均高于缺氧对照组(均P<0.05)。结论低氧预适应处理对原代培养大鼠海马神经元缺氧性损伤保护作用可能是通过增加缺氧后bcl-2表达,从而稳定线粒体膜,减慢神经元急性缺氧时线粒体膜电位降低的速度来实现的。 展开更多
关键词 低氧预处理 大鼠海马神经元 BCL-2 线粒体膜电位
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OGD动态处理后大鼠海马神经元线粒体裂解及凋亡相关蛋白的变化 被引量:3
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作者 李学涵 刘学良 +3 位作者 王平 吕志宇 吴勇 陈秀 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期793-797,820,共6页
目的大鼠海马神经元经过不同时间糖氧剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)处理后,观察其线粒体形态改变与凋亡相关蛋白的变化。方法将原代培养大鼠海马神经元随机分为5组:空白对照组(对照组)与OGD处理30min组、45min组、60min组及... 目的大鼠海马神经元经过不同时间糖氧剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)处理后,观察其线粒体形态改变与凋亡相关蛋白的变化。方法将原代培养大鼠海马神经元随机分为5组:空白对照组(对照组)与OGD处理30min组、45min组、60min组及90min组,采用激光共聚焦显微镜观察线粒体形态;JC-1检测线粒体膜电位变化;Western blot检测胞质内磷酸化线粒体动力相关蛋白(P-Drp1蛋白)、细胞色素C(CytC)及含半胱氨酸的天冬氨酸水解蛋白3(caspase 3)蛋白的表达。结果随着OGD处理时间延长,(1)P-Drp1蛋白表达下降,线粒体裂解率逐渐增加(P<0.05);(2)线粒体膜电位下降越严重;(3)与对照组相比,60min组及90min组CytC、caspase 3蛋白的表达显著增加(P<0.05)。结论随着OGD处理延长,线粒体裂解增加,膜电位下降,膜通透性增加,且在OGD处理60min时伴随凋亡发生。 展开更多
关键词 大鼠海马神经元 糖氧剥夺处理 Drp1蛋白 CYTC caspase 3
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中药更年春方通过ERβ及PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元损伤的保护作用 被引量:16
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作者 张阳 高玲芸 王文君 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期66-75,共10页
目的观察中药更年春方(Gengnianchun formula,GNC)通过雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)及PI3K/Akt信号通路对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)致大鼠胎鼠海马神经元细胞损伤的保护作用。方法采用Aβ25-35作用人神经母细胞瘤SH-S... 目的观察中药更年春方(Gengnianchun formula,GNC)通过雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)及PI3K/Akt信号通路对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)致大鼠胎鼠海马神经元细胞损伤的保护作用。方法采用Aβ25-35作用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系,通过CCK-8法检测细胞活力摸索Aβ25-35及GNC含药血清(GNC serum,GS)处理神经细胞的合适浓度及时间。采用Aβ25-35作用大鼠胎鼠海马神经元构建阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的体外模型,分为无血清对照组、模型组、GS组、空白血清对照(normal saline serum,NS)组和PHTPP(选择性ERβ拮抗剂)组。利用正置显微镜观察细胞形态、CCK-8法检测细胞活力及LDH释放法检测细胞损伤。利用Hoest33258/PI双重荧光染色实验、qRT-PCR及Western blot实验检测细胞凋亡相关指标。结果与无血清对照组相比,模型组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触出现明显的收缩崩解和细胞碎片、细胞活力下降、LDH释放升高。与模型组和NS组相比,GS组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触的收缩崩解和细胞碎片减少、细胞活力上升、LDH释放减少、PI阳性神经元细胞数目下降、神经元bax/bcl-2mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase 3、cyt-c蛋白表达水平下降、p-Akt蛋白表达水平上升。与GS组相比,PHTPP组大鼠胎鼠海马神经元bax/bcl-2 mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase3、cyt-c蛋白表达水平上升、p-Akt蛋白表达水平下降。结论GNC对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元的损伤具有保护作用,此作用是通过ERβ及PI3K/Akt信号通路介导的。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病(AD) 更年春方(GNC) 雌激素受体β(ERβ) PI3K/AKT信号通路 大鼠海马神经元 SH-SY5Y细胞系
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5-羟甲基糠醛对过氧化氢致大鼠海马神经细胞损伤的保护作用研究 被引量:7
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作者 顾海 姜泽群 +3 位作者 姜海英 丁霞 詹瑧 王明艳 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期437-440,共4页
目的观察山茱萸活性成分5-羟甲基糠醛(5-HMF)对H2O2诱导损伤的大鼠海马神经细胞增殖、凋亡及LDH、SOD表达的影响。方法常规方法进行乳大鼠海马神经元的原代培养,建立体外H2O2氧化损伤模型,采用光镜和电镜进行形态学观察,MTT法对比不同浓... 目的观察山茱萸活性成分5-羟甲基糠醛(5-HMF)对H2O2诱导损伤的大鼠海马神经细胞增殖、凋亡及LDH、SOD表达的影响。方法常规方法进行乳大鼠海马神经元的原代培养,建立体外H2O2氧化损伤模型,采用光镜和电镜进行形态学观察,MTT法对比不同浓度5-HMF对大鼠海马神经元增殖的影响,黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞上清液中LDH、SOD的活力。结果光镜结果显示5-HMF大、中剂量组的细胞形态基本正常;电镜结果显示5-HMF大剂量组对细胞有一定程度保护作用。MTT结果显示5-HMF大、中剂量组OD值比H2O2模型组明显增高(P<0.05);LDH和SOD检测结果表明5-HMF大、中剂量组能明显降低培养液中LDH活性、升高SOD活性。结论山茱萸活性成分5-HMF大、中剂量组对H2O2损伤的大鼠海马神经元有一定保护作用。 展开更多
关键词 山茱萸 羟甲基糠醛 大鼠海马神经元
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滋肾活血方对糖氧剥夺/再灌注诱导的海马神经元线粒体自噬的影响 被引量:3
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作者 刘桐赫 伍大华 +5 位作者 赵梓婷 施佳仪 张博璟 马倩柔 张闰程 张秀丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1189-1194,共6页
目的探究滋肾活血方对糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的原代海马神经元损伤的保护机制。方法分离的原代海马神经元经免疫荧光鉴定后,OGD/R诱导神经元损伤,激光共聚焦扫描显微镜观测不同再灌注时... 目的探究滋肾活血方对糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的原代海马神经元损伤的保护机制。方法分离的原代海马神经元经免疫荧光鉴定后,OGD/R诱导神经元损伤,激光共聚焦扫描显微镜观测不同再灌注时间自噬流的变化。OGD/R诱导的原代海马神经元再经滋肾活血方含药血清干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察自噬体,Western blot检测自噬相关蛋白表达。结果10%的滋肾活血方含药血清可以明显提升细胞活力及降低细胞凋亡比例,增加神经元中自噬体的数量,并上调自噬相关蛋白PINK1、Parkin、p-ATG16L1的表达。结论滋肾活血方能有效抵抗OGD/R诱导的原代海马神经元凋亡,其作用可能与调控PINK1-Parkin通路促进线粒体自噬有关。 展开更多
关键词 滋肾活血方 原代大鼠海马神经元 OGD/R 线粒体自噬 含药血清 细胞凋亡
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G-蛋白Rab3a对神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元细胞生长作用的影响 被引量:2
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作者 庞立岩 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1069-1074,共6页
为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GIF)的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用MTT还原法定量研究了Rab3a对GIF神经生长活性的影响,发现Rab3a可以替代脑提取物而使GIF发挥神经生长抑制活性.接着又利用多克隆抗体方法研究... 为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GIF)的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用MTT还原法定量研究了Rab3a对GIF神经生长活性的影响,发现Rab3a可以替代脑提取物而使GIF发挥神经生长抑制活性.接着又利用多克隆抗体方法研究了GIF与Rab3a的相互作用,结果说明Rab3a是GIF发挥神经生长抑制活性所必需的蛋白质,并且它们的相互作用受空间位置的因素影响较大.在随后对它们相互作用的机理和可能的生物学意义进行了讨论. 展开更多
关键词 RAB3A GIF 相互作用 大鼠海马神经元细胞培养 MTT还原测定法
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氯胺酮通过改变Fos和Bcl-2表达减轻缺氧对大鼠海马群峰电位的抑制
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作者 彭坚 陈堃 +6 位作者 廖明锋 张志发 徐萍 李璐 吴娅琴 龙思 王学仁 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期515-518,共4页
目的通过观察氯胺酮处理对缺氧引起的大鼠海马诱发群峰电位、神经元Fos、Bcl-2表达的影响,探讨氯胺酮对神经元缺氧性损伤保护作用机制。方法脑片以及培养细胞随机分为3组:对照组(不进行缺氧处理)、缺氧组和氯胺酮组(缺氧前于培养液中加... 目的通过观察氯胺酮处理对缺氧引起的大鼠海马诱发群峰电位、神经元Fos、Bcl-2表达的影响,探讨氯胺酮对神经元缺氧性损伤保护作用机制。方法脑片以及培养细胞随机分为3组:对照组(不进行缺氧处理)、缺氧组和氯胺酮组(缺氧前于培养液中加入氯胺酮,终浓度为20μmol/L,其它处理同缺氧组)。脑片记录:成年雄性Wistar大鼠麻醉后取海马切片,进行CA3区Schaffer侧支刺激,记录CA1区椎体细胞诱发电位。新生大鼠海马神经元培养7~11d,分组处理后进行免疫组化染色,计算Fos、Bcl-2阳性细胞率。结果氯胺酮预处理后,海马脑片群峰电位开始减小和完全消失的时间延迟;培养海马神经细胞Fos表达阳性率、平均吸光度值与缺氧组比较明显减少(均P<0.05);海马神经细胞Bcl-2表达阳性率、平均吸光度值与缺氧组比较明显增加(均P<0.05)。结论氯胺酮预处理对大鼠海马群峰电位的保护作用可能是通过减少缺氧后Fos表达、增加Bcl-2表达来实现的。 展开更多
关键词 氯胺酮 大鼠海马神经元 FOS Bcl-2 群峰电位 缺氧
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