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逆转录病毒载体构建的hNT-3基因在大鼠成纤维细胞中的表达 被引量:1
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作者 欧阳立明 周涛 +2 位作者 薛冲 刘志敏 张嗣良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期55-58,共4页
为了检验重组逆转录病毒对体外培养细胞的感染能力和效率 ,用逆转录病毒载体构建的人神经营养因子 3(pLXSN NT3)感染大鼠原代成纤维细胞 ,经G4 18筛选获得了稳定整合有外源hNT 3的工程细胞株 .RT PCR证实了外源基因hNT 3已整合到宿主... 为了检验重组逆转录病毒对体外培养细胞的感染能力和效率 ,用逆转录病毒载体构建的人神经营养因子 3(pLXSN NT3)感染大鼠原代成纤维细胞 ,经G4 18筛选获得了稳定整合有外源hNT 3的工程细胞株 .RT PCR证实了外源基因hNT 3已整合到宿主细胞基因组 ,并可合成其mRNA ;PCR检测方法证明细胞株不含具有感染能力的病毒 ;Western印迹证明了细胞能正确表达hNT 3;大乳鼠背根神经节检测了细胞上清液中的NT 3生物活性 . 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 人神经营养因子-3 基因治疗 基因表达 大鼠成纤维细胞
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高密度脂蛋白介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出的机制
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作者 尹春燕 吴满平 +2 位作者 楼滨 陈佩芳 杨小琪 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第4期320-323,共4页
目的 研究高密度脂蛋白 3(HDL3 )介导大鼠皮肤成纤维细胞胆固醇 (ch)流出机制。方法 用N 乙酰咪唑修饰HDL ,阻断HDL与细胞受体相互作用 ,观察其对HDL3 介导细胞ch流出的影响。用FITC标记HDL示踪HDL3 在介导细胞ch流出中自身代谢过... 目的 研究高密度脂蛋白 3(HDL3 )介导大鼠皮肤成纤维细胞胆固醇 (ch)流出机制。方法 用N 乙酰咪唑修饰HDL ,阻断HDL与细胞受体相互作用 ,观察其对HDL3 介导细胞ch流出的影响。用FITC标记HDL示踪HDL3 在介导细胞ch流出中自身代谢过程。结果 牛血清白蛋白 (对照组 )介导 4.74%细胞ch流出 ,HDL3组和N 乙酰咪唑HDL组分别为 31 .85 %和 8.41 %。FITC HDL3 与细胞 37℃培养 3h后 ,细胞内吞荧光强度(FS)占细胞结合FS的 6 5 .78% ,其中 93.5 %FS存在于TCA可沉淀部分。细胞进一步 37℃培养 2h后 ,细胞释放FS占内吞Fs 80 .77% ,其中 92 .7%FS存在于TCA可沉淀部分。结论 HDL3 通过与细胞受体相互作用 ,介导细胞ch流出。其可能机制是HDL3 通过受体进入胞内 ,在胞内不经历溶酶体分解过程。它接受胞内ch后通过逆向胞饮形式流出胞外。 展开更多
关键词 高密度脂蛋白- 大鼠成纤维细胞 细胞胆固醇流出
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SMYD2特异性抑制剂对高糖环境下大鼠肾成纤维细胞活化的影响及其机制 被引量:1
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作者 陈思羽 左思洋 +8 位作者 彭睿 李霞 杨元 龙合花 陈敏 杨丹 邹雪 郭兵 刘丽荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期417-424,共8页
目的:明确赖氨酸甲基转移酶SMYD2(SET and MYND domain containing 2)特异性抑制剂对体外高糖(HG)环境下大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)活化的影响并探索其可能机制。方法:采用CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂LLY507对体外培养的NRK-49F细胞... 目的:明确赖氨酸甲基转移酶SMYD2(SET and MYND domain containing 2)特异性抑制剂对体外高糖(HG)环境下大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)活化的影响并探索其可能机制。方法:采用CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂LLY507对体外培养的NRK-49F细胞活力的影响。实验分组为正常糖(NG;含5.5 mmol/L葡萄糖)组、HG(含30 mmol/L葡萄糖)组、NG+LLY507(1.5μmol/L)组和HG+LLY507(1.5μmol/L)组,37℃培养48 h后收集各组细胞蛋白。采用Western blot实验检测SMYD2、组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)、纤维连接蛋白(fibronectin)、I型胶原蛋白(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB p-p65、白细胞介素6(IL-6)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3蛋白水平。结果:LLY507浓度低于1.6μmol/L对NRK-49F细胞的活力无显著影响;与NG组相比,HG组SMYD2、H3K4me3、fibronectin、Col I、α-SMA、TGF-β1、p-Smad3,TNF-α、NF-κB p-p65、NF-κB p65、IL-6、p-STAT3和STAT3蛋白水平均显著升高(P<0.05);与HG组相比,HG+LLY507组SMYD2、H3K4me3、fibronectin、Col I、α-SMA、TGF-β1、p-Smad3、TNF-α、NF-κB p-p65、NF-κB p65、IL-6、p-STAT3和STAT3蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论:SMYD2特异性抑制剂LLY507可明显抑制HG诱导的NRK-49F细胞活化和细胞外基质分泌,其机制可能与阻断TGF-β1/Smad3、NF-κB和STAT3细胞信号通路激活相关。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 大鼠纤维细胞 SMYD2蛋白 LLY507 细胞外基质
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白介素⁃17A通过自噬调控支气管成纤维细胞胶原降解 被引量:4
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作者 姚培学 杨胜红 +1 位作者 陈杰 欧阳瑶 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期423-427,共5页
目的探讨白介素⁃17A(interleukin⁃17A,IL⁃17A)对大鼠支气管成纤维细胞(bronchial fibro⁃blasts,BF)增殖、自噬及自噬后胶原降解的影响。方法采用酶联合消化法+组织块贴壁法培养BF并鉴定,CCK⁃8法检测细胞增殖能力;实验分组:对照组、雷帕... 目的探讨白介素⁃17A(interleukin⁃17A,IL⁃17A)对大鼠支气管成纤维细胞(bronchial fibro⁃blasts,BF)增殖、自噬及自噬后胶原降解的影响。方法采用酶联合消化法+组织块贴壁法培养BF并鉴定,CCK⁃8法检测细胞增殖能力;实验分组:对照组、雷帕霉素组、雷帕霉素+IL⁃17A组、IL⁃17A组;透射电镜观察细胞自噬泡的形成情况;Western blot检测BF中自噬标记蛋白LC3、p62的表达;ELISA法检测各组中基质金属蛋白酶⁃1(matrix metalloproteinase⁃1,MMP⁃1)与基质金属蛋白酶抑制剂(matrix metalloproteinase inhibitor,TIMP⁃1)的表达。结果IL⁃17A浓度为20 ng/mL时BF细胞增殖能力最佳。IL⁃17A组中自噬泡数量明显减少,LC3⁃Ⅱ/LC3⁃I的比值及MMP⁃1的表达水平明显下调,p62及TIMP⁃1的表达水平明显上调(P<0.05)。雷帕霉素部分逆转了IL⁃17A的作用。结论(1)IL⁃17A可促进BF细胞增殖;(2)IL⁃17A通过抑制自噬,发挥抑制胶原降解的作用,促进气道重塑的发生发展。 展开更多
关键词 白介素⁃17A 大鼠支气管纤维细胞 自噬 增殖 胶原
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转化生长因子-β1受体依赖的心肌纤维化伴随大电导钙激活钾通道的表达和功能下调 被引量:5
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作者 李磊 董亚辉 +4 位作者 杨探 李秋芳 聂永梅 李光 于风旭 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期612-618,共7页
目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β... 目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β1基础上加入不同浓度TGF-β1受体特异阻断剂SB431542(0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组)进行分组,处理后提取蛋白及RNA,应用蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组TGF-β1受体蛋白,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、BKCa蛋白和信使RNA(mRNA)的表达情况。单通道及全细胞膜片钳技术记录TGF-β1作用24 h前后的BKCa电流特点及其变化情况。结果:TGF-β15 ng/ml组和10 ng/ml组均上调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,10 ng/ml组TGF-β1下调BKCa蛋白和mRNA的表达。与TGF-β110 ng/ml组相比,在10 ng/ml TGF-β1基础上加入SB4315421μmol/L组、10μmol/L组下调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,加入SB43154210μmol/L组上调BKCa蛋白和mRNA的表达,差异均具有统计学意义。此外,单通道及全细胞膜片钳技术记录结果表明TGF-β1预处理24 h后可明显抑制成纤维细胞上BKCa电流。结论:BKCa可能参与了TGF-β1诱导乳大鼠心室成纤维细胞纤维化通路,其机制可能是TGF-β1抑制了成纤维细胞上BKCa的电流。这提示BKCa可能是防治心肌纤维化的潜在靶点。 展开更多
关键词 心肌纤维 转化生长因子Β1 转化生长因子β1受体阻断剂SB431542 大电导钙激活钾通道 大鼠心室纤维细胞
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