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大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
5
1
作者
牛夏忆
李淼
+2 位作者
张倩
陈云雨
刘晓平
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第16期1992-1998,共7页
目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(D...
目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定。用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性。结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化。荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性。ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1∶128 000。Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性。结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础。
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关键词
Β-CATENIN
原核表达
亲和层析
荧光偏振
大鼠多克隆抗体
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职称材料
题名
大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
5
1
作者
牛夏忆
李淼
张倩
陈云雨
刘晓平
机构
皖南医学院药物筛选与评价研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第16期1992-1998,共7页
基金
国家自然科学基金(81703546)
安徽省自然科学基金(1808085QH265)
+2 种基金
吉林省科技发展计划(20160520045JH)
皖南医学院博士科研启动基金(RCQD201617)
皖南医学院大学生科研资助金(WK2018S54)资助项目
文摘
目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体。方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定。用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性。结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化。荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性。ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1∶128 000。Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性。结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础。
关键词
Β-CATENIN
原核表达
亲和层析
荧光偏振
大鼠多克隆抗体
Keywords
β-catenin
Bacterial expression
Affinity chromatography
Fluorescence polarization
Rat polyclonal antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定
牛夏忆
李淼
张倩
陈云雨
刘晓平
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
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