呼吸道合胞病毒对大鼠原代气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素的影响 被引量：6

1

作者 乔建瓯 王健 周龙女 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第21期3865-3868,共4页

目的:探讨分离和培养大鼠原代气道上皮细胞(primary rat airway epithelial cell,PRAEC)的方法,研究呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)对PRAEC表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymicstromal lymphopoietin,TSLP)的影响。方... 目的:探讨分离和培养大鼠原代气道上皮细胞(primary rat airway epithelial cell,PRAEC)的方法,研究呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)对PRAEC表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymicstromal lymphopoietin,TSLP)的影响。方法:采用改良的酶消化法分离PRAEC,并在专用的支气管上皮培养基中培养。在培养成功的原代细胞中加入RSV以感染PRAEC。应用Real-time PCR检测正常的和受到RSV感染的PRAEC中TSLP基因表达。结果:获得纯度较高(约为97%)的PRAEC,细胞成活率为90%,获得细胞量为(1.02±0.33)×106个细胞/鼠,且存活时间较长。正常PRAEC表达少量的TSLP,但是在受到RSV感染后其TSLP表达出现增高,且TSLP的表达在一定范围内与RSV的滴度成正相关。结论:本实验成功地分离并培养了PRAEC,在此基础上进行的实验证实了RSV感染确实能够促进气道上皮细胞表达TSLP,为进一步研究RSV感染在哮喘发病中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 胸腺基质淋巴细胞生成素 大鼠原代气道上皮细胞

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水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响 被引量：3

2

作者 沈瑶 白春学 陈智鸿 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期225-230,共6页

目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建... 目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞。蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异。结果气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性。PMA 20ng/mL刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P<0.05),两者差异有统计学意义。PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌。原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化。结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌。 展开更多

关键词 水通道蛋白5(AQP5) 黏蛋白 卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA) 原代小鼠气道上皮细胞

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胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养 被引量：9

3

作者 付红敏 许峰 +4 位作者 黄波 杨鸣 符跃强 方芳 匡凤梧 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期586-589,共4页

目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速... 目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AECⅡ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant proteinc,SPC)的表达。结果:每3～5只胎鼠可获得AECⅡ(36±5)×106,活力98%±2%。镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形。透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上。结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AECⅡ,能满足体外进一步实验的需要。 展开更多

关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 分离

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哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞凋亡及布地奈德的干预作用 被引量：7

4

作者 郑仰明 李昌崇 +1 位作者 张维溪 管小俊 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2006年第2期106-112,共7页

目的①研究哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞的凋亡情况;②观察布地奈德对气道上皮细胞的凋亡和气道重塑的干预作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分为哮喘重塑组(A组)、布地奈德治疗组(B组)和正常对照组(C组),每组 10只,A、B组均给予鸡卵清白... 目的①研究哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞的凋亡情况;②观察布地奈德对气道上皮细胞的凋亡和气道重塑的干预作用。方法 30只雄性SD大鼠随机分为哮喘重塑组(A组)、布地奈德治疗组(B组)和正常对照组(C组),每组 10只,A、B组均给予鸡卵清白蛋白和氢氧化铝致敏并激发12周,建立大鼠气道重塑模型;B组激发前30 min,雾化吸入布地奈德1 mg;C组给予生理盐水,致敏和激发时间点同A、B组。肺组织行苏木精-伊红染色、Masson三色染色和过碘酸希夫染色,观察气道周围炎症细胞浸润和气道结构改变。结果①光镜下发现A组明显的气道重塑的病理改变,B组较A组有所减轻;②透射电镜观察均发现A组明显胶原沉积,B组较A组有所减轻;③图像分析结果(Image-Pro Plus 5．0):支气管壁厚度比较,A组[(110．0±13．8)μm]明显高于C组[(77．2±7．6)μm](P<0．01),B组[(92．8±15．2)μm]明显低于 A组(P<0．05),但高于C组(P<0．05);平滑肌厚度比较,A组[(45．4±7．5)μm]明显高于C组[(25．7±4．0)μm](P< 0．01),B组[(36．5±4．7)μm]明显低于A组(P<0．05),但高于C组(P<0．01);各组大鼠肺组织胶原百分比比较:A组 [(12．8±3．8)％]明显高于C组[(3．2±0．9)％](P<0．01),B组[(9．1±1．5)％]明显低于A组(P<0．05),但B组仍明显高于C组(P<0．01);④图像分析免疫组化结果(Image-Pro Plus 5．0软件测阳性细胞数):1 mm单位长度基底膜上气道上皮平均cleaved caspase-3阳性细胞数的比较,A组大气道和中小气道上皮阳性细胞数分别为(10．5±2．8)和(9．6± 1．9)．明显高于C组(2．9±1．2)和(2．4±1．0)(P均<0．01),B组分别为[(10．6±2．561)和(10．6±2．4),与A组差异无统计学意义(P均>0．05),但明显高于C组(P均<0．01)。结论①哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞表达cleaved caspase-3显著增加,表明气道上皮凋亡在气道重塑组中明显增加;②布地奈德不能抑制哮喘大鼠气道上皮细胞发生凋亡; ③布地奈德能部分抑制气道重塑。 展开更多

关键词 哮喘 大鼠 气道重塑 上皮细胞 凋亡 布地奈德

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SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定 被引量：4

5

作者 周治彦 梁培育 +1 位作者 欧善际 李浩勇 《海南医学院学报》 CAS 2010年第5期540-544,共5页

目的：建立一种良好的SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。方法：选用4周龄SD幼鼠的肾皮质进行细胞培养,采用机械研磨、胰酶消化、过滤,Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后,选择含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代... 目的：建立一种良好的SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。方法：选用4周龄SD幼鼠的肾皮质进行细胞培养,采用机械研磨、胰酶消化、过滤,Percoll密度梯度离心法分离纯化肾小管后,选择含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行原代培养及传代。制作细胞爬片,用免疫细胞化学（Cytokeratin 18表达阳性）进行鉴定。结果：肾小管上皮细胞围绕肾小管节段呈岛屿状向四周生长,4-5 d后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强。结合形态学及免疫细胞化学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肾小管上皮细胞。结论：采用此方法分离培养的肾小管上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性操作良好。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞 原代培养 PERCOLL 密度梯度离心法 大鼠

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大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养与鉴定 被引量：1

6

作者 黄省利 师蔚 +1 位作者 姚璐 贺西京 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期176-179,189,共5页

目的建立一种简便、实用的大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养方法,以便进一步对其进行体外实验研究。方法无菌条件下取1～9d的Sprague-Dawley大鼠脉络丛组织,经机械分离后将细胞种植于含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,定期进行形... 目的建立一种简便、实用的大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养方法,以便进一步对其进行体外实验研究。方法无菌条件下取1～9d的Sprague-Dawley大鼠脉络丛组织,经机械分离后将细胞种植于含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,定期进行形态学观察并摄片。在培养第9天左右,采用电子显微镜及Hematoxylin&Eosin(HE)染色进行形态学观察,免疫细胞化学染色法鉴定并计算脉络丛上皮细胞的纯度。结果培养的脉络丛上皮细胞呈梭形或多角形,电子显微镜下有微绒毛,细胞纯度在95%以上。结论利用机械分散法分离新生大鼠脉络丛上皮细胞,进行原代培养可获得高纯度的脉络丛上皮细胞,该方法简便实用。 展开更多

关键词 脉络丛上皮细胞 原代培养 大鼠 免疫细胞化学 电子显微镜

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大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究 被引量：1

7

作者 黄桂君 农江 +3 位作者 马壮 钱桂生 李淑萍 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期73-75,共3页

目的　构建重组大鼠γ 干扰素真核表达载体 ,探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞 (AM)和气道上皮细胞的可行性及表达水平。方法　采用RT PCR技术克隆了大鼠γ 干扰素 ,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上 ,构成真核表达重组载体。将重组载... 目的　构建重组大鼠γ 干扰素真核表达载体 ,探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞 (AM)和气道上皮细胞的可行性及表达水平。方法　采用RT PCR技术克隆了大鼠γ 干扰素 ,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上 ,构成真核表达重组载体。将重组载体转染培养的AM和气道上皮细胞。用PCR法鉴定重组载体整合在细胞基因组DNA中。并检测细胞培养上清中γ 干扰素浓度和活性。结果　DNA测序证明 ,构建的重组载体中γ 干扰素的基因方向正确 ,DNA序列与GeneBank中大鼠的γ 干扰素cDNA序列相同。转染后AM和气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的重组载体DNA片段条带。pLXSN IFN载体组的AM和气道上皮细胞培养上清中大鼠γ 干扰素浓度和活性显著高于pLXSN空载体组 (P <0 .0 1)。结论　本研究构建的大鼠γ 干扰素重组表达载体可成功地转染大鼠AM和气道上皮细胞 ,整合入基因组DNA ,并分泌有活性的γ 干扰素 。 展开更多

关键词 Γ-干扰素 基因转染 肺泡巨噬细胞 气道上皮细胞 大鼠

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大鼠颌下腺上皮细胞原代培养转染实验 被引量：1

8

作者 汤晓飞 高文涛 +3 位作者 孙宏晨 张泽兵 徐辉 欧阳喈 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第2期149-152,共4页

目的 :转染质粒pSV2neo、pSV3neo ,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化 ,进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系。方法 :采用改良磷酸钙沉淀法 ,将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo转染大鼠颌下腺上皮细胞 ,G4 18筛选 ,Southern印迹杂交、透射电镜、免疫... 目的 :转染质粒pSV2neo、pSV3neo ,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化 ,进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系。方法 :采用改良磷酸钙沉淀法 ,将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo转染大鼠颌下腺上皮细胞 ,G4 18筛选 ,Southern印迹杂交、透射电镜、免疫组化及软琼脂培养检测所筛选阳性细胞的性质。结果 :经质粒pSV2neo、pSV3neo转染分离的大鼠颌下腺上皮细胞仍保留上皮细胞的形态 ,生存期延长。经pSV3neo转染的上皮细胞 ,Southern印迹杂交证明整合有SV4 0T抗原 (LT) ;免疫组化和透射电镜观察显示存在有大量的肌上皮细胞和少量的腺泡细胞 ;软琼脂培养无克隆形成。结论 展开更多

关键词 大鼠 颌下腺 肌上皮细胞 原代培养 胶原酶消化法 透射电镜 免疫组织化学

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小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、原代培养及鉴定

9

作者 陈坤 邓世雄 +2 位作者 刘芳君 李虹 蒋朴 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期62-65,共4页

目的:建立系统可靠的小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养、纯化及鉴定技术,为进一步研究肺纤维化及肺肿瘤等疾病的发病机制奠定基础.方法:应用低质量分数胰酶联合胶原酶的方法消化小鼠胎鼠肺组织块,经差速离心和差速贴壁的方法纯化... 目的:建立系统可靠的小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养、纯化及鉴定技术,为进一步研究肺纤维化及肺肿瘤等疾病的发病机制奠定基础.方法:应用低质量分数胰酶联合胶原酶的方法消化小鼠胎鼠肺组织块,经差速离心和差速贴壁的方法纯化肺泡Ⅱ型上皮,进行原代培养.用改良巴氏染色法和透射电镜观察对所分离的细胞进行鉴定.结果:每只胎鼠可获得(5±2)×106的细胞产量,细胞活力为95%±2%,纯度达到92%±2%,改良巴氏法镜下观察可见胞质内含较多深色颗粒,透射电镜观察到特征性的嗜锇小体即板层小体和细胞膜上有明显的微绒毛.结论:该方法能成功分离出小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,且产量大、纯度高,能满足体外研究的需要. 展开更多

关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 鉴定

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Wistar大鼠乳鼠晶体上皮细胞的原代培养与鉴定 被引量：1

10

作者 秦虹 赵光喜 +1 位作者 吴惠群 何海鹰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 1995年第3期2-4,共3页

关键词 晶体上皮细胞 原代培养 鉴定 乳鼠

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Dectin-1在热处理光滑假丝酵母菌刺激大鼠气道上皮细胞中的作用及对IL-10和TNF-α表达的影响 被引量：1

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作者 赵莹 骆雪萍 +1 位作者 张雪 宋文洺 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期10-15,共6页

目的探讨树突状细胞相关C型凝集素-1(Dectin-1)在热处理光滑假丝酵母菌刺激大鼠气道上皮细胞(RTECs)中的作用及对IL-10和TNF-α表达的影响。方法将体外培养的RTECs随机分为3组:对照组(RTECs+无菌生理盐水)、真菌刺激组(RTECs+热处理光... 目的探讨树突状细胞相关C型凝集素-1(Dectin-1)在热处理光滑假丝酵母菌刺激大鼠气道上皮细胞(RTECs)中的作用及对IL-10和TNF-α表达的影响。方法将体外培养的RTECs随机分为3组:对照组(RTECs+无菌生理盐水)、真菌刺激组(RTECs+热处理光滑假丝酵母菌)、抑制剂干预组(RTECs+昆布多糖+热处理光滑假丝酵母菌),分别孵育0、2、4、6 h后终止,MTT法检测细胞存活率,Western Blot法检测Dectin-1表达,ELISA法检测IL-10和TNF-α的表达。结果热处理光滑假丝酵母菌破坏细胞结构,降低细胞存活率。在培养开始时(0h),3组RTECs细胞存活率以及Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。培养2、4、6 h后,真菌刺激组、抑制剂干预组Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平均高于对照组,抑制剂干预组Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平均低于真菌刺激组(均P<0.05)。除抑制剂干预组0h与2 h IL-10表达量比较,差异无统计学意义之外,真菌刺激组和抑制剂干预组组内不同时间段Dectin-1、IL-10、TNF-α表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 Dectin-1是RTECs识别热处理光滑假丝酵母菌的重要受体,并诱导其释放IL-10和TNF-α,介导炎症反应的发生。 展开更多

关键词 Dectin-1受体 热处理光滑假丝酵母菌 大鼠气道上皮细胞 昆布多糖 IL-10 TNF-Α

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原代培养大鼠前列腺细胞建立前列腺增生筛药模型 被引量：5

12

作者 吴建辉 李军 +4 位作者 苏欣 闫晗 桂博 蒋秀蓉 孙祖越 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第5期10-14,I0002-I0004,共8页

目的建立原代培养大鼠前列腺上皮细胞体外筛药模型。方法无菌状态下取雄性SD大鼠腹侧叶前列腺,称量后,剪成1 mm3小块,经Ⅱ型胶原酶消化1 h后,过滤、离心获取前列腺细胞,接种于24孔板培养并对细胞进行形态学和免疫组织化学鉴定。获取的... 目的建立原代培养大鼠前列腺上皮细胞体外筛药模型。方法无菌状态下取雄性SD大鼠腹侧叶前列腺,称量后,剪成1 mm3小块,经Ⅱ型胶原酶消化1 h后,过滤、离心获取前列腺细胞,接种于24孔板培养并对细胞进行形态学和免疫组织化学鉴定。获取的大鼠前列腺上皮细胞分别接种于96孔板和24孔板培养12 d后给予系列剂量(0.1～1000μmol/L)的他莫昔芬和阳性药物爱普列特处理72 h,利用CCK-8法检测前列腺上皮细胞存活率并计算药物IC50值,并进一步通过Giemsa染色后观察细胞生长及形态变化。结果细胞鉴定结果显示,获取的细胞具典型上皮细胞形态特征,细胞角蛋白和前列腺特异性抗原表达阳性,提示所获细胞为前列腺上皮细胞。爱普列特与前列腺上皮细胞孵育72 h后,CCK-8法检测结果显示能够明显抑制前列腺上皮细胞生长,其IC50值为42.7μM,进一步镜下观察结果显示,爱普列特未明显改变大鼠前列腺上皮细胞形态,但能导致存活细胞数减少。他莫昔芬则对大鼠前列腺上皮细胞生长无明显抑制作用,镜下观察前列腺上皮细胞数量和形态未见明显改变。结论利用原代培养SD大鼠前列腺上皮细胞可以成功建立前列腺增生体外筛选模型。 展开更多

关键词 前列腺增生 模型 上皮细胞 原代培养 药物筛选 大鼠

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胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞生长状况及ABCA3表达变化的初步研究 被引量：1

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作者 张盼 张晓群 +3 位作者 邱洁 杨洋 周晓玉 周晓光 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1488-1492,共5页

目的:观察原代培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cell,AECⅡ)的生长状况及AECⅡ特异性蛋白ATP结合盒转运蛋白A3(ATP binding cassette transporter A3,ABCA3)的表达变化,为有关新生儿肺发育及肺部疾病的研究奠定一... 目的:观察原代培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cell,AECⅡ)的生长状况及AECⅡ特异性蛋白ATP结合盒转运蛋白A3(ATP binding cassette transporter A3,ABCA3)的表达变化,为有关新生儿肺发育及肺部疾病的研究奠定一定基础。方法:采用胰酶联合胶原酶消化肺组织,差速离心及差速贴壁法纯化细胞;电子显微镜鉴定AECⅡ细胞;倒置相差显微镜观察不同时间点细胞生长状态;MTT法绘制细胞生长曲线;免疫荧光技术观察ABCA3动态表达变化。结果:电镜下观察到AECⅡ特征性板层小体,大小及数量不等,胞膜外缘分布有刺状微绒毛;MTT法测得铺板后第24、36、48、72、96、120 h的吸光度值分别为0.177±0.009,0.193±0.011,0.212±0.019,0.253±0.019,0.243±0.012,0.192±0.011。光学显微镜下细胞形态逐渐拉长,变扁平,细胞内颗粒逐渐减少。免疫荧光示ABCA3表达逐渐下降。结论:原代培养的胎鼠AECⅡ在培养早期生长状况最佳,ABCA3表达最丰富,故在早期(即培养72 h以内)进行肺发育疾病相关机制的研究较为理想。 展开更多

关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 细胞增殖 ATP结合盒转运蛋白A3

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NAC/RvD1抑制H_(2)O_(2)诱导的COPD患者气道上皮细胞炎症性黏液高分泌的作用及机制研究 被引量：5

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作者 吴旭 季爽 +1 位作者 郭燕 费广鹤 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第12期1853-1859,共7页

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)或消退素D1(RvD1)抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者原代气道上皮细胞(DHBE)炎症反应和黏液高分泌的分子机制。方法DHBE细胞的分离、鉴定和培养,以最佳H_(2)O_(2)浓度刺激DHBE细胞... 目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)或消退素D1(RvD1)抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者原代气道上皮细胞(DHBE)炎症反应和黏液高分泌的分子机制。方法DHBE细胞的分离、鉴定和培养,以最佳H_(2)O_(2)浓度刺激DHBE细胞制备体外氧化应激模型,利用NAC和RvD1进行干预。采用免疫荧光技术、流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测IKKβ和NF-κB蛋白表达及磷酸化水平;qRT-PCR和ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-8的表达水平;qRT-PCR和免疫荧光技术检测黏蛋白5AC(MUC5AC)表达水平。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)刺激DHBE细胞后,ROS表达水平升高(P<0.05),p-IKKβ和p-NF-κB表达呈浓度依赖性升高(P<0.05),细胞内TNF-α、IL-8 mRNA水平及细胞培养上清液中TNF-α、IL-8蛋白水平增多(P<0.05),MUC5AC的表达量增多(P<0.05)。NAC或RvD1抑制H_(2)O_(2)诱导的TNF-α、IL-8和MUC5AC的表达(P<0.05)。结论NAC、RvD1可能通过NF-κB信号通路在氧化应激对DHBE细胞炎症和黏液高分泌反应中发挥保护效应。 展开更多

关键词 原代气道上皮细胞 消退素D1 炎症反应 氧化应激 黏液高分泌

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褪黑素对内毒素致大鼠急性肺损伤的保护作用

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作者 董宇杰 丁春华 +2 位作者 张智 谷玮玮 马蕴蕾 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期1967-1967,共1页

关键词 急性肺损伤 褪黑素 大鼠 肺组织形态学 血管内皮细胞 模型组 信号通路 阳性细胞 炎症细胞 气道上皮细胞

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