枸杞糖肽激活CAMKK2/AMPK/MCU信号通路改善大鼠卵巢颗粒细胞衰老

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作者 刘晓丹 凌晨 +5 位作者 刘璐 蒲静 马海滨 马会明 张文萍 陈冬梅 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1116-1125,共10页

目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)改善大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老的作用机制。方法大鼠原代卵巢颗粒细胞分为正常组,DOX组及DOX加入4种不同浓度的LbGP治疗组干预后,通过CCK-8、EDU和Ki67检测细胞增殖情况、免疫荧光... 目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)改善大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老的作用机制。方法大鼠原代卵巢颗粒细胞分为正常组,DOX组及DOX加入4种不同浓度的LbGP治疗组干预后,通过CCK-8、EDU和Ki67检测细胞增殖情况、免疫荧光法、蛋白免疫印迹法检测衰老标志和线粒体功能相关因子。结果CCK-8、EDU、Ki67与DOX组相比,经LbGP治疗可明显提高细胞活力(P<0.05),促进增殖(P<0.05);与DOX组相比,LbGP治疗后细胞中β-半乳糖苷酶阳性面明显减少(P<0.05);免疫荧光结果显示:与DOX组相比,LbGP治疗后p21、γH2A.X下降(P<0.05)、pRB升高(P<0.05);Western blot结果显示,与DOX组相比,LbGP治疗组衰老表型蛋白p21、p53明显减少(P<0.05),pRB升高(P<0.05);线粒体释放到胞质中的cyt C和活化的caspase-9明显减少(P<0.05);CAMKK2、pAMPK和线粒体钙稳态调节蛋白MCU水平升高(P<0.05);细胞核中能量代谢相关蛋白SIRT1、PGC1α/β和ATP5A1明显升高(P<0.05);与DOX组相比,LbGP治疗后ROS水平明显下降(P<0.05)。结论LbGP可改善DOX诱导的大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老,其机制可能是通过上调CAMKK2/AMPK信号通路,进而改善线粒体钙稳态,提高细胞能量代谢相关调节蛋白的表达水平实现的。为LbGP能够辅助改善卵巢功能提供了实验基础。 展开更多

关键词 枸杞糖肽 衰老 CAMKK2/AMPK信号通路 线粒体钙稳态 能量代谢 大鼠原代卵巢颗粒细胞

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卵巢储备功能减退患者颗粒细胞聚集体的分离纯化方法比较

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作者 牟彦郦 胡安春 +5 位作者 须文驰 陈盼盼 陈浩 赵淑云 黄官友 陈小娟 《科学技术与工程》 北大核心 2025年第26期11079-11090,共12页

对比分析了两种卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)分离提纯技术,旨在为卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者提供高效、简便的GCs获取方案。研究收集了160例行体外受精或卵胞质单精子显微注射的DOR患者卵泡液,随机分... 对比分析了两种卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)分离提纯技术,旨在为卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者提供高效、简便的GCs获取方案。研究收集了160例行体外受精或卵胞质单精子显微注射的DOR患者卵泡液,随机分为改良传统密度梯度离心法组(P/DG组)和颗粒细胞聚集体洗涤法组(W/Agg组),通过纯度鉴定、增殖评估及病理学、形态学与统计学分析。结果表明,两组提取的GCs多聚集成簇,细胞间通过丝状突起相互作用,显微镜下可见脂滴,细胞于24~48 h开始贴壁生长。流式细胞术显示,W/Agg组悬浮液纯度略低,但总耗时减少,细胞数和活性增加(P<0.05)。HE染色和FSHR免疫荧光鉴定显示,两组GCs形态完整,呈梭形或星形,W/Agg组GCs生长密度更聚集(P<0.05)。CCK-8动态监测显示,W/Agg组在第6天增殖高峰更高(P<0.05)。可见,W/Agg技术在操作效率、细胞数量和活性方面表现更优,尽管初始纯度稍低,但在后续培养中可达到更高的细胞密度和纯度,为优化DOR患者的GCs分离提纯和体外培养技术提供了宝贵的科学依据。 展开更多

关键词 卵巢颗粒细胞 分离提纯 原代细胞培养 卵巢储备功能减退

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过表达SLC7A5基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制

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作者 张京顺 邹颖刚 郑连文 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1526-1534,共9页

目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色... 目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色法观察大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR蛋白表达情况,鉴定原代大鼠卵巢颗粒细胞是否成功分离。将大鼠卵巢颗粒细胞分为对照组(转染空载体质粒)和OE-SLC7A5组(转染SLC7A5过表达质粒),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证细胞转染效率。流式细胞术检测2组卵巢颗粒细胞凋亡率,流式细胞术检测2组不同细胞周期卵巢颗粒细胞百分率,RT-qPCR法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8和TNF-α蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下卵巢颗粒细胞呈长梭形或者不规则形,特异性表达FSHR,NC组未见FSHR绿色荧光表达,FSHR组可见FSHR绿色荧光表达,提示大鼠原代卵巢颗粒细胞成功分离。与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中SLC7A5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),提示SLC7A5过表达质粒成功转染卵巢颗粒细胞。流式细胞术检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OE-SLC7A5组S期卵巢颗粒细胞百分率明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-8、cleaved Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-3和SLC7A5蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:SLC7A5蛋白表达增加能够通过上调TNF-α、Caspase-8和Caspase-3凋亡通路表达,促进颗粒细胞凋亡。 展开更多

关键词 溶质载体家族7成员5 大鼠卵巢颗粒细胞 细胞凋亡 肿瘤坏死因子Α 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶8

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慢病毒介导的Bcl-2基因对磷酰胺氮芥诱导人原代卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用 被引量：5

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作者 王雪峰 何援利 +1 位作者 付霞霏 彭冬先 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期932-936,共5页

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对磷酰胺氮芥诱导体外培养的原代人卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法利用分子生物学技术,成功构建携带Bcl-2基因慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒体外感染人卵巢原代颗粒细胞,再加入浓度30μm... 目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对磷酰胺氮芥诱导体外培养的原代人卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。方法利用分子生物学技术,成功构建携带Bcl-2基因慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒体外感染人卵巢原代颗粒细胞,再加入浓度30μmol/L的磷酰胺氮芥诱导细胞凋亡。分为4组进行实验:(a)实验组:pGC-FU-Bcl-2+磷酰胺氮芥(PM);(b)空载对照组:pGC-FU-EGFP+PM;(c)实验对照组:只加PM;(d)空白对照组:不加PM及病毒。采用流式细胞仪、Hoechst 33258染色检测卵巢颗粒细胞凋亡情况;利用Western blot检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果空白对照组(GCs),凋亡峰不明显,颗粒细胞凋亡率为(1.93±0.28)%,实验组(GCs+PM+pGC-FU-Bcl-2)出现微弱的凋亡峰,颗粒细胞凋亡率为(6.99±0.55)%,比实验对照组(GCs+PM)及空载对照组(GCs+PM+pGC-FU-EGFP)显著低,但显著高于空白对照组(P<0.05)。实验组Bcl-2蛋白的表达明显增高,显著高于其余各对照组(P<0.05)。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后可以过度分泌Bcl-2蛋白,显著抑制卵巢颗粒细胞的凋亡,保护PM对颗粒细胞的理化损伤。 展开更多

关键词 BCL-2基因 慢病毒 化疗药物 细胞凋亡 原代卵巢颗粒细胞

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多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞中DR5、DcR2的表达变化 被引量：3

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作者 张娟 王立群 +3 位作者 周月希 刁波 周蓉 解迪 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期33-39,共7页

目的观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制。方法大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT-q PCR分析观... 目的观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制。方法大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT-q PCR分析观察并比较DR5、DcR2在PCOS组和对照组大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况。结果免疫组织化学结果显示,在PCOS组大鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞中,DR5的表达较对照组均显著增强(P<0.05),在PCOS组大鼠卵巢窦前卵泡和窦状卵泡颗粒细胞中,DcR2的表达较对照组同级别卵泡显著增强(P<0.05),在始基卵泡颗粒细胞的表达差异无显著性(P>0.05)。RT-q PCR分析显示,DR5 mRNA和DcR2 mRNA在两组中都有表达,且二者在PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞中的表达较正常对照组均明显增强(P<0.05)。结论DR5和DcR2在颗粒细胞中的异常表达可能对PCOS大鼠卵泡的异常发育起到了一定作用,它们可能是通过参与颗粒细胞凋亡过程而对卵泡的发育造成了一定影响。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合征 大鼠 颗粒细胞 DR5 DcR2

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药物对大鼠卵巢颗粒细胞的影响 被引量：7

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作者 魏美娟 王静 俞瑾 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第6期511-513,共3页

目的　探讨阿米卡星、清热活血中药对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的形态和功能影响。方法　收集 30日龄SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞 ,分别加入不同药物进行细胞培养 ,并取培养液作放射免疫测定性激素 ,颗粒细胞作透射电镜观察细胞器。结果　阿米... 目的　探讨阿米卡星、清热活血中药对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的形态和功能影响。方法　收集 30日龄SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞 ,分别加入不同药物进行细胞培养 ,并取培养液作放射免疫测定性激素 ,颗粒细胞作透射电镜观察细胞器。结果　阿米卡星、莪术组的颗粒细胞核周见空泡 ,胞器基本消失 ,孕激素低于生理盐水组 (P <0 .0 1) ,阿米卡星组的雌二醇也低于各组 (P <0 .0 5 )。结论　阿米卡星。 展开更多

关键词 雌性大鼠 颗粒细胞培养 卵巢功能 药物影响

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携带人bcl-2基因的慢病毒表达载体的构建及其在人原代卵巢颗粒细胞中的表达 被引量：4

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作者 王雪峰 何援利 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1856-1859,1863,共5页

目的构建及鉴定bcl-2基因慢病毒表达载体,并观察在体外人卵巢原代颗粒细胞中的表达。方法采用PCR技术从含有人bcl-2基因的质粒克隆模板pCMV-SPORT6钓取bcl-2基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU(含EGFP基因)中,构建慢病毒载体... 目的构建及鉴定bcl-2基因慢病毒表达载体,并观察在体外人卵巢原代颗粒细胞中的表达。方法采用PCR技术从含有人bcl-2基因的质粒克隆模板pCMV-SPORT6钓取bcl-2基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU(含EGFP基因)中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-bcl-2,通过酶切、测序验证bcl-2基因后,将pGC-FU-bcl-2质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelp-er2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带bcl-2基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-bcl-2,并转染靶细胞人卵巢原代颗粒细胞。通过检测标志蛋白增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和目的蛋白bcl-2进一步验证pGC-FU-bcl-2在靶细胞中的表达。结果(1)pGC-FU-bcl-2中携有正确的bcl-2基因,并能在人类细胞中表达;pGC-FU-bcl-2共转染包装细胞293T能产生重组病毒GC-FU-bcl-2;(2)目的基因bcl-2能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞人卵巢原代颗粒细胞,并达到稳定的表达,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Westernblotting能检测到bcl-2蛋白在靶细胞中的表达。结论成功构建了携带bcl-2基因的重组慢病毒载体,转染人卵巢原代颗粒细胞后能够稳定表达bcl-2基因,为进一步研究bcl-2的功能和细胞凋亡相关疾病的治疗奠定基础。 展开更多

关键词 BCL-2 慢病毒载体 基因转移 人卵巢原代颗粒细胞

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黄芪多糖调控Sirt1/FoxO1通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的研究 被引量：10

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作者 阳丽 吴湘 +1 位作者 李昂 何薇薇 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第10期93-98,共6页

目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增... 目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增殖的影响。10-5mol/L丙酸睾丸酮、10μmol/L C2-神经酰胺作用大鼠卵巢颗粒细胞24 h诱导PCOS大鼠颗粒细胞自噬模型,CCK8检测细胞增殖情况;透射电镜观察自噬体情况;免疫印迹法检测细胞中Sirt1、Fox O1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示,FSHR蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的平均阳性表达量93.18%>90%,可进行接下来实验。0、100、200、400μg/mL APS处理正常卵巢颗粒细胞,在贴壁0、24 h比较,细胞OD450差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,模型组细胞核附近出现大量自噬小体,双层、单层膜包裹胞质形成封闭、圆形结构,部分自噬小体内膜溶解,自噬小体周围可见单层膜结构包裹着一些被降解的胞浆、类似自噬小体结构;100μg/mL APS组与模型组细胞结构类似,随着APS剂量的升高,自噬小体数量减少,在400μg/m L APS组时细胞正常。正常组、模型组、100、200、400μg/mL APS组在细胞贴壁0 h时,细胞OD450差异无统计学意义(P>0.05)。细胞贴壁24 h,与正常组相比,模型组细胞OD450降低(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,100、200、400μg/mL APS组细胞OD450升高(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平降低(P<0.05)。结论APS可以抑制PCOS大鼠颗粒细胞自噬,可能是通过抑制自噬通路Sirt1/FoxO1实现的。 展开更多

关键词 黄芪多糖 沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1通路 多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬

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氯丙嗪对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响 被引量：1

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作者 邬静 袁慧 彭双清 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期517-520,F0003,共5页

为研究大鼠卵巢颗粒细胞(GC)的分泌功能,用氯丙嗪染毒体外培养的大鼠GC,采用MTT法检测细胞相对活力,ELISA法检测收集培养液中孕酮(P)和雌二醇(E2)的含量,半定量RT-PCR检测激素分泌相关调控基因FSHR、StAR、P450scc和P450arom mRNA的表达... 为研究大鼠卵巢颗粒细胞(GC)的分泌功能,用氯丙嗪染毒体外培养的大鼠GC,采用MTT法检测细胞相对活力,ELISA法检测收集培养液中孕酮(P)和雌二醇(E2)的含量,半定量RT-PCR检测激素分泌相关调控基因FSHR、StAR、P450scc和P450arom mRNA的表达,免疫细胞化学染色法检测细胞中特异卵泡刺激素受体的表达。结果表明:经0.1、1.0和10.0μmol/L氯丙嗪染毒24 h后,与对照组相比,细胞相对活力分别为87.95%、83.96%和74.48%,E2的分泌量和StAR mRNA相对表达水平分别从对照组的6.16 pg/μg、2.014显著下降到3.70 pg/μg、0.311,呈现明显的剂量?效应关系,表明转运蛋白StAR可能是氯丙嗪影响颗粒细胞激素分泌的关键位点之一。 展开更多

关键词 大鼠 氯丙嗪 卵巢颗粒细胞 激素分泌 细胞活力

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经后增殖方对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞Fas通路的影响 被引量：2

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作者 陈艳婷 郭新宇 +1 位作者 袁秋虹 邓伟民 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期548-551,共4页

目的研究经后增殖方对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响,探讨中药改善卵母细胞质量的作用机制。方法建立超排卵大鼠模型,30只大鼠随机分为空白组、阳性组和中药组。实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测大鼠卵巢组织中Fas、Fasl、Ca... 目的研究经后增殖方对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞Fas凋亡通路的影响,探讨中药改善卵母细胞质量的作用机制。方法建立超排卵大鼠模型,30只大鼠随机分为空白组、阳性组和中药组。实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测大鼠卵巢组织中Fas、Fasl、Caspase-8、Caspase-3基因及蛋白的表达。结果阳性组各基因及蛋白表达均增高,与空白组比较差异具有显著性(P<0.05)。中药组各基因及蛋白表达均低于阳性组,其中Fas、Fasl、Caspase-8表达水平与阳性组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而Caspase-3表达水平与阳性组无统计学差异(P>0.05)。中药组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论经后增殖方能抑制超排卵大鼠卵巢组织Fas、Fasl、Caspase-8、Caspase-3的表达,抑制颗粒细胞凋亡,推测Fas通路可能是经后增殖方改善卵母细胞质量的作用机制之一。 展开更多

关键词 经后增殖方 控制性超排卵大鼠 卵巢颗粒细胞 Fas通路

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哈蟆油通过激活PI3K/Akt/NF-κB途径保护氧化应激损伤的大鼠卵巢颗粒细胞 被引量：11

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作者 零小妹 张绪慧 +2 位作者 杨晶晶 吴新荣 梁磊 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期941-946,共6页

本文探讨哈蟆油含药血清对H_2O_2致大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。将大鼠原代卵巢颗粒细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2模型组、阳性药对照组、哈蟆油含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测哈蟆油含药血清对H_2O_... 本文探讨哈蟆油含药血清对H_2O_2致大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。将大鼠原代卵巢颗粒细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2模型组、阳性药对照组、哈蟆油含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测哈蟆油含药血清对H_2O_2致颗粒细胞氧化应激损伤细胞活力的影响;实时荧光RT-PCR法检测PI3K、AKT3 mRNA的表达水平;Western blot检测p-Akt(Ser473)、NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果发现与正常对照组相比,H_2O_2刺激后细胞活性明显下降,哈蟆油含药血清能够提高颗粒细胞存活率。机制研究发现,哈蟆油含药血清通过恢复H_2O_2诱导细胞增殖相关PI3K、AKT3 mRNA水平,上调p-Akt(Ser473)、IKKβ、NF-κB(p65)蛋白的表达,下调IκBα蛋白的表达。以上结果表明,哈蟆油对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路密切相关。这可能是其抗氧化的作用机制之一。 展开更多

关键词 哈蟆油 大鼠卵巢颗粒细胞 氧化应激 H2O2

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水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定 被引量：4

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作者 高亚可 陆凤花 +3 位作者 马帆 乔树叶 陈施蓓 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期140-144,共5页

研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%... 研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24h后开始零星增殖,3～5d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。 展开更多

关键词 水牛 卵巢颗粒细胞 原代培养 培养基 增殖 凋亡

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补肾活血方联合微囊化颗粒细胞移植对大鼠血清FSH、LH及E_2的影响 被引量：3

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作者 严青 刘慧萍 +3 位作者 付灵梅 彭胡战 梁艳梅 曾柳庭 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第9期2147-2149,I0004,共4页

目的:探讨补肾活方联合微囊化细胞移植技术对大鼠生殖内分泌的影响。方法:将50只SD雌性大鼠随机分成5组:空白组(A组)、去卵巢组(B组)、微囊化GC细胞移植组(C组)、低剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组(D组)、高剂量补肾中药+微囊化GC细胞... 目的:探讨补肾活方联合微囊化细胞移植技术对大鼠生殖内分泌的影响。方法:将50只SD雌性大鼠随机分成5组:空白组(A组)、去卵巢组(B组)、微囊化GC细胞移植组(C组)、低剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组(D组)、高剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组(E组)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测治疗前后血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)浓度。结果:微囊化GC细胞移植后,C组大鼠血清E_2水平与B组比较显著升高(P<0.05);FSH、LH水平均明显降低(P<0.01);补肾活血方联合微囊化GC细胞移植后,D、E组E_2水平与C组比较显著升高(P<0.05),FSH、LH水平均明显降低(P<0.05)。结论:与单纯移植微囊化GC细胞相比,补肾活血方联合微囊化细胞移植技术能改善去卵巢大鼠激素分泌状态,其作为临床中医药预防和治疗卵巢早衰的一种手段具有良好的应景前景。 展开更多

关键词 补肾活血方 微囊化颗粒细胞 卵巢早衰 去卵巢大鼠

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益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响 被引量：3

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作者 肖潇 刘艳霞 +2 位作者 危一飞 邢玉 滕秀香 《世界中医药》 CAS 2022年第22期3148-3153,共6页

目的:探讨益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:分离大鼠卵巢颗粒细胞,使用不同含量的肾疏肝汤含药血清以及不同浓度的雷公藤多苷含药血清处理细胞48 h后,使用CCK-8法检测细胞存活率,... 目的:探讨益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:分离大鼠卵巢颗粒细胞,使用不同含量的肾疏肝汤含药血清以及不同浓度的雷公藤多苷含药血清处理细胞48 h后,使用CCK-8法检测细胞存活率,筛选益肾疏肝汤含药血清和雷公藤多苷含药血清剂量。并将细胞分为正常组(正常培养的细胞)、损伤组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组(雌二醇)。分别采用CCK-8法、TUNEL法、蛋白质印迹法检测细胞增殖、细胞凋亡、凋亡及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:与正常组比较,损伤组细胞增殖、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达均显著受到抑制(P<0.05),而细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、裂解胱天蛋白酶-3(cl-caspase-3)蛋白水平均显著增加(P<0.05);与损伤组比较,阳性对照组及中药低、中药中剂量组、中药高剂量组细胞增殖、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著增加(P<0.05),而细胞凋亡率、Bax、cl-caspase-3蛋白水平均显著抑制(P<0.05);且中药组呈剂量依赖。结论:益肾疏肝汤含药血清可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡。 展开更多

关键词 益肾疏肝汤 雷公藤多苷 大鼠 卵巢颗粒细胞 增殖 凋亡 PI3K/AKT/mTOR信号通路 雌二醇

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携带Bcl-2基因的慢病毒对磷酰胺氮芥抑制卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响

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作者 王雪峰 何援利 +1 位作者 蔡慧华 朱洪磊 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第15期2490-2492,共3页

目的:探讨携带Bcl-2基因的慢病毒抑制磷酰胺氮芥(PM)对体外培养的人原代卵巢颗粒细胞(GCs)的凋亡情况及其分泌功能的影响。方法:实验分4组:实验组,pGC-FU-Bcl-2+PM;空载对照组,pGC-FU-EGFP+PM;实验对照组,只加PM;正常对照组,不加PM及病... 目的:探讨携带Bcl-2基因的慢病毒抑制磷酰胺氮芥(PM)对体外培养的人原代卵巢颗粒细胞(GCs)的凋亡情况及其分泌功能的影响。方法:实验分4组:实验组,pGC-FU-Bcl-2+PM;空载对照组,pGC-FU-EGFP+PM;实验对照组,只加PM;正常对照组,不加PM及病毒。采用DNA ladder检测GCs凋亡情况,利用放射免疫法检测细胞培养上清液中雌二醇及孕酮的浓度。结果:实验对照组及空载对照组的DNA ladder表现为明显的梯状带形,正常对照组及实验组DNA ladder无明显的梯状带形。各组之间雌二醇及孕酮的基础浓度经统计学分析表明差异无显著性,实验组与相应时间点实验对照组及空载对照组相比差异均存在显著性(P<0.01),实验对照组与空载对照组相比差异无显著性(P=0.990,P=0.523)。结论:携带Bcl-2基因的慢病毒感染人原代卵巢GCs后,显著降低了PM诱导的细胞凋亡,改善了GCs在体外分泌雌二醇及孕酮的功能。 展开更多

关键词 基因 BCL-2 慢病毒 化疗 分泌功能 原代卵巢颗粒细胞

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甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成及增殖的影响 被引量：7

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作者 宋丹 吴国云 +3 位作者 丁威 邢军 魏全伟 石放雄 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期357-363,共7页

[目的]本试验旨在探究甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成功能以及增殖的影响。[方法]首先采用免疫组化法鉴定甲状腺素受体(TRα/β)在猪卵巢组织的表达情况,随后体外培养猪卵巢原代颗粒细胞,选取低(10-8mol·L^(-1))、中(... [目的]本试验旨在探究甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成功能以及增殖的影响。[方法]首先采用免疫组化法鉴定甲状腺素受体(TRα/β)在猪卵巢组织的表达情况,随后体外培养猪卵巢原代颗粒细胞,选取低(10-8mol·L^(-1))、中(10-7mol·L^(-1))、高(10-6mol·L^(-1))3种浓度的甲状腺素(T4)孵育24 h,采用酶联免疫法检测细胞培养液中孕酮(P4)和雌二醇(E2)水平,并采用蛋白印迹法检测颗粒细胞内激素合成相关酶蛋白(3β-HSD、CYP19)的表达情况。采用MTT法检测各浓度甲状腺素对细胞活力的影响,利用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光染色验证不同浓度甲状腺素对颗粒细胞增殖的影响。[结果]免疫组化结果显示:TRα/β在猪卵巢不同发育阶段卵泡的颗粒细胞、膜细胞中有广泛表达,在卵母细胞的胞质中也有分布,在闭锁卵泡中也见明显表达。猪卵巢原代颗粒细胞经甲状腺素处理后,细胞培养液中的孕酮和雌激素水平都显著低于空白对照组(P<0.05),并且各剂量处理组间孕酮呈现出剂量依赖性降低趋势;雌激素在低浓度和高浓度甲状腺素处理组较中浓度处理组高。蛋白免疫印迹结果显示:与对照组相比,3β-HSD和CYP19蛋白在较高浓度甲状腺素(10-7和10-6mol·L^(-1))处理组的表达量均显著降低(P<0.05);而在低浓度甲状腺素(10-8mol·L^(-1))处理组,CYP19蛋白表达量显著降低(P<0.05),但3β-HSD蛋白表达无显著差异。此外,MTT细胞毒性和增殖试剂盒检测结果显示:不同浓度甲状腺素处理并不影响细胞活力,这与PCNA免疫荧光强度统计结果一致,进一步证实了甲状腺素对原代颗粒细胞增殖没有影响。[结论]甲状腺素能够作用于卵巢颗粒细胞,干扰类固醇激素的合成,其作用机制可能是通过改变激素合成相关蛋白3β-HSD和CYP19的表达来完成的。而甲状腺素对颗粒细胞激素合成的干扰效应并不影响细胞增殖状态。 展开更多

关键词 猪卵巢 原代颗粒细胞 甲状腺素 类固醇合成 增殖

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