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枸杞糖肽激活CAMKK2/AMPK/MCU信号通路改善大鼠卵巢颗粒细胞衰老
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作者 刘晓丹 凌晨 +5 位作者 刘璐 蒲静 马海滨 马会明 张文萍 陈冬梅 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1116-1125,共10页
目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)改善大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老的作用机制。方法大鼠原代卵巢颗粒细胞分为正常组,DOX组及DOX加入4种不同浓度的LbGP治疗组干预后,通过CCK-8、EDU和Ki67检测细胞增殖情况、免疫荧光... 目的探讨枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LbGP)改善大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老的作用机制。方法大鼠原代卵巢颗粒细胞分为正常组,DOX组及DOX加入4种不同浓度的LbGP治疗组干预后,通过CCK-8、EDU和Ki67检测细胞增殖情况、免疫荧光法、蛋白免疫印迹法检测衰老标志和线粒体功能相关因子。结果CCK-8、EDU、Ki67与DOX组相比,经LbGP治疗可明显提高细胞活力(P<0.05),促进增殖(P<0.05);与DOX组相比,LbGP治疗后细胞中β-半乳糖苷酶阳性面明显减少(P<0.05);免疫荧光结果显示:与DOX组相比,LbGP治疗后p21、γH2A.X下降(P<0.05)、pRB升高(P<0.05);Western blot结果显示,与DOX组相比,LbGP治疗组衰老表型蛋白p21、p53明显减少(P<0.05),pRB升高(P<0.05);线粒体释放到胞质中的cyt C和活化的caspase-9明显减少(P<0.05);CAMKK2、pAMPK和线粒体钙稳态调节蛋白MCU水平升高(P<0.05);细胞核中能量代谢相关蛋白SIRT1、PGC1α/β和ATP5A1明显升高(P<0.05);与DOX组相比,LbGP治疗后ROS水平明显下降(P<0.05)。结论LbGP可改善DOX诱导的大鼠原代卵巢颗粒细胞衰老,其机制可能是通过上调CAMKK2/AMPK信号通路,进而改善线粒体钙稳态,提高细胞能量代谢相关调节蛋白的表达水平实现的。为LbGP能够辅助改善卵巢功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 枸杞糖肽 衰老 CAMKK2/AMPK信号通路 线粒体钙稳态 能量代谢 大鼠原代卵巢颗粒细胞
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过表达SLC7A5基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制
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作者 张京顺 邹颖刚 郑连文 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1526-1534,共9页
目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色... 目的:探讨过表达溶质载体家族7成员5(SLC7A5)基因对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并阐明其相关机制。方法:4只3周龄SPF级SD雌性大鼠,提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,分为阴性对照组(NC组)和促卵泡激素受体(FSHR)染色组(FSHR组)。免疫荧光染色法观察大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR蛋白表达情况,鉴定原代大鼠卵巢颗粒细胞是否成功分离。将大鼠卵巢颗粒细胞分为对照组(转染空载体质粒)和OE-SLC7A5组(转染SLC7A5过表达质粒),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证细胞转染效率。流式细胞术检测2组卵巢颗粒细胞凋亡率,流式细胞术检测2组不同细胞周期卵巢颗粒细胞百分率,RT-qPCR法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组卵巢颗粒细胞中SLC7A5、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8和TNF-α蛋白表达水平。结果:荧光显微镜下卵巢颗粒细胞呈长梭形或者不规则形,特异性表达FSHR,NC组未见FSHR绿色荧光表达,FSHR组可见FSHR绿色荧光表达,提示大鼠原代卵巢颗粒细胞成功分离。与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中SLC7A5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),提示SLC7A5过表达质粒成功转染卵巢颗粒细胞。流式细胞术检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OE-SLC7A5组S期卵巢颗粒细胞百分率明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,OE-SLC7A5组卵巢颗粒细胞中TNF-α、Caspase-8、cleaved Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-3和SLC7A5蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:SLC7A5蛋白表达增加能够通过上调TNF-α、Caspase-8和Caspase-3凋亡通路表达,促进颗粒细胞凋亡。 展开更多
关键词 溶质载体家族7成员5 大鼠卵巢颗粒细胞 细胞凋亡 肿瘤坏死因子α 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶8
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哈蟆油通过激活PI3K/Akt/NF-κB途径保护氧化应激损伤的大鼠卵巢颗粒细胞 被引量:10
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作者 零小妹 张绪慧 +2 位作者 杨晶晶 吴新荣 梁磊 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期941-946,共6页
本文探讨哈蟆油含药血清对H_2O_2致大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。将大鼠原代卵巢颗粒细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2模型组、阳性药对照组、哈蟆油含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测哈蟆油含药血清对H_2O_... 本文探讨哈蟆油含药血清对H_2O_2致大鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤的保护作用与分子机制。将大鼠原代卵巢颗粒细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2模型组、阳性药对照组、哈蟆油含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测哈蟆油含药血清对H_2O_2致颗粒细胞氧化应激损伤细胞活力的影响;实时荧光RT-PCR法检测PI3K、AKT3 mRNA的表达水平;Western blot检测p-Akt(Ser473)、NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果发现与正常对照组相比,H_2O_2刺激后细胞活性明显下降,哈蟆油含药血清能够提高颗粒细胞存活率。机制研究发现,哈蟆油含药血清通过恢复H_2O_2诱导细胞增殖相关PI3K、AKT3 mRNA水平,上调p-Akt(Ser473)、IKKβ、NF-κB(p65)蛋白的表达,下调IκBα蛋白的表达。以上结果表明,哈蟆油对H_2O_2诱导卵巢颗粒细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路密切相关。这可能是其抗氧化的作用机制之一。 展开更多
关键词 哈蟆油 大鼠卵巢颗粒细胞 氧化应激 H2O2
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黄芪多糖调控Sirt1/FoxO1通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的研究 被引量:10
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作者 阳丽 吴湘 +1 位作者 李昂 何薇薇 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第10期93-98,共6页
目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增... 目的探究黄芪多糖(APS)调控沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1(Sirt1/FoxO1)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的影响。方法大鼠中分离卵巢颗粒细胞并经促卵泡刺激素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,且CCK8检测APS对卵巢颗粒细胞增殖的影响。10-5mol/L丙酸睾丸酮、10μmol/L C2-神经酰胺作用大鼠卵巢颗粒细胞24 h诱导PCOS大鼠颗粒细胞自噬模型,CCK8检测细胞增殖情况;透射电镜观察自噬体情况;免疫印迹法检测细胞中Sirt1、Fox O1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示,FSHR蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的平均阳性表达量93.18%>90%,可进行接下来实验。0、100、200、400μg/mL APS处理正常卵巢颗粒细胞,在贴壁0、24 h比较,细胞OD450差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,模型组细胞核附近出现大量自噬小体,双层、单层膜包裹胞质形成封闭、圆形结构,部分自噬小体内膜溶解,自噬小体周围可见单层膜结构包裹着一些被降解的胞浆、类似自噬小体结构;100μg/mL APS组与模型组细胞结构类似,随着APS剂量的升高,自噬小体数量减少,在400μg/m L APS组时细胞正常。正常组、模型组、100、200、400μg/mL APS组在细胞贴壁0 h时,细胞OD450差异无统计学意义(P>0.05)。细胞贴壁24 h,与正常组相比,模型组细胞OD450降低(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,100、200、400μg/mL APS组细胞OD450升高(P<0.05),细胞中Sirt1、Fox O1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平降低(P<0.05)。结论APS可以抑制PCOS大鼠颗粒细胞自噬,可能是通过抑制自噬通路Sirt1/FoxO1实现的。 展开更多
关键词 黄芪多糖 沉默信息调节因子1/叉头状转录因子O1通路 多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬
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