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丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究
被引量：
4
1
作者
张岩
伍辉军
+1 位作者
周晓辉
高学文
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期6-12,共7页
采用PCR方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株中分别克隆到大小为1 026和1 038 bp的hrpZ基因(hrpZPsgA1和hrpZPsgS1),对该基因进行了原核表达和功能研究。SDS-PAGE显示其表达产物为相对分子质量62...
采用PCR方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株中分别克隆到大小为1 026和1 038 bp的hrpZ基因(hrpZPsgA1和hrpZPsgS1),对该基因进行了原核表达和功能研究。SDS-PAGE显示其表达产物为相对分子质量62×103的融合蛋白,harpinZPsgA1和harpinZPsgS1的相对分子质量约为35×103。harpinZPsgS1的粗提蛋白经GSTrap FF纯化后质量浓度可达1.1 mg.mL-1。生物活性检测表明,该蛋白对热稳定,对蛋白酶K敏感,可以在非寄主植物烟草上激发过敏反应,过敏反应可以被真核生物代谢抑制剂抑制,并且对烟草有明显的促生作用。序列比对发现,来自丁香假单胞大豆致病变种的hrpZ基因可分为2类,一类以hrpZPsgA1为代表,包括hrpZPsg12,另一类以hrpZPsgS1为代表,包括来自r0和Race4菌株的hrpZ基因。这2类hrpZ基因的核苷酸同源性为79%,氨基酸同源性为77%,均富含甘氨酸,不含半胱氨酸,与假单胞菌属以外的其他革兰氏阴性植物病原细菌harpin编码基因不存在相似性。
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关键词
丁香假单胞
大豆
致病
变种
harpin编码基因
GST融合表达
烟草
过敏性反应
促生
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职称材料
丁香假单胞大豆致病变种不同HrpZ蛋白差异区域功能研究
被引量：
2
2
作者
张阳
伍辉军
+2 位作者
张宏月
赵小珍
高学文
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期89-96,共8页
[目的]丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株编码产生的Hrp Z蛋白差异序列主要集中在C端的3个区域,并且这2个蛋白诱导非寄主HR的能力也存在差异。本研究将探究Hrp Z蛋白这3个差异区域在烟草上诱导HR(hyp...
[目的]丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株编码产生的Hrp Z蛋白差异序列主要集中在C端的3个区域,并且这2个蛋白诱导非寄主HR的能力也存在差异。本研究将探究Hrp Z蛋白这3个差异区域在烟草上诱导HR(hypersensitive response)和抑制烟草花叶病毒(TMV)中所起的作用。[方法]采用常规PCR及重叠PCR方法将这2个hrp Z基因的3个差异区域分别进行互换,构建了相应的重组表达载体,表达并纯化得到了6个重组蛋白,相对分子质量均在41×103左右。并检测了其诱导HR活性、诱导植物抗病性。[结果]检测结果表明:重组蛋白Hrp ZS(S2→A2)和Hrp ZA(A3→S3)诱导HR的能力相比亲本都有所增强,6个重组蛋白诱导烟草抗TMV的活性都明显强于亲本,其中,Hrp ZA(A3→S3)和Hrp ZS(S3→A3)的活性最强。[结论]此试验表明Hrp Z蛋白的这些差异区域(第7、8、9个α-螺旋)是过敏反应能力的主要调控区域,同时C-端第8、9个α-螺旋区域与诱导植物抗病性也显著相关。本研究为改造Hrp Z类harpin蛋白激发子,提高其诱导抗性及功能域研究提供了理论依据。
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关键词
丁香假单胞
大豆
致病
变种
HRP
Z
差异序列分析
过敏性反应
诱导抗病性
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职称材料
题名
丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究
被引量：
4
1
作者
张岩
伍辉军
周晓辉
高学文
机构
南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期6-12,共7页
基金
国家863计划项目(2012AA101504)
国家公益性行业(农业)科研专项(201303015)
+3 种基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08004-004)
国家自然科学基金项目(31100056)
教育部高校博士点基金项目(20100097120011)
国家博士后科研基金项目(2012M511770)
文摘
采用PCR方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株中分别克隆到大小为1 026和1 038 bp的hrpZ基因(hrpZPsgA1和hrpZPsgS1),对该基因进行了原核表达和功能研究。SDS-PAGE显示其表达产物为相对分子质量62×103的融合蛋白,harpinZPsgA1和harpinZPsgS1的相对分子质量约为35×103。harpinZPsgS1的粗提蛋白经GSTrap FF纯化后质量浓度可达1.1 mg.mL-1。生物活性检测表明,该蛋白对热稳定,对蛋白酶K敏感,可以在非寄主植物烟草上激发过敏反应,过敏反应可以被真核生物代谢抑制剂抑制,并且对烟草有明显的促生作用。序列比对发现,来自丁香假单胞大豆致病变种的hrpZ基因可分为2类,一类以hrpZPsgA1为代表,包括hrpZPsg12,另一类以hrpZPsgS1为代表,包括来自r0和Race4菌株的hrpZ基因。这2类hrpZ基因的核苷酸同源性为79%,氨基酸同源性为77%,均富含甘氨酸,不含半胱氨酸,与假单胞菌属以外的其他革兰氏阴性植物病原细菌harpin编码基因不存在相似性。
关键词
丁香假单胞
大豆
致病
变种
harpin编码基因
GST融合表达
烟草
过敏性反应
促生
Keywords
Pseudomonas syringae pv.glycinea
harpin-encoding gene
GST fusion expression
tobacco
hypersensitive response
growth promotion
分类号
S432.42 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
丁香假单胞大豆致病变种不同HrpZ蛋白差异区域功能研究
被引量：
2
2
作者
张阳
伍辉军
张宏月
赵小珍
高学文
机构
南京农业大学植物保护学院/华东作物有害生物综合治理农业部重点实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期89-96,共8页
基金
国家863计划项目(2012AA101106)
国家公益性行业(农业)科研专项(20130315)
+1 种基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08004-004)
江苏省重点研发计划(现代农业)(BE2015354)
文摘
[目的]丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株编码产生的Hrp Z蛋白差异序列主要集中在C端的3个区域,并且这2个蛋白诱导非寄主HR的能力也存在差异。本研究将探究Hrp Z蛋白这3个差异区域在烟草上诱导HR(hypersensitive response)和抑制烟草花叶病毒(TMV)中所起的作用。[方法]采用常规PCR及重叠PCR方法将这2个hrp Z基因的3个差异区域分别进行互换,构建了相应的重组表达载体,表达并纯化得到了6个重组蛋白,相对分子质量均在41×103左右。并检测了其诱导HR活性、诱导植物抗病性。[结果]检测结果表明:重组蛋白Hrp ZS(S2→A2)和Hrp ZA(A3→S3)诱导HR的能力相比亲本都有所增强,6个重组蛋白诱导烟草抗TMV的活性都明显强于亲本,其中,Hrp ZA(A3→S3)和Hrp ZS(S3→A3)的活性最强。[结论]此试验表明Hrp Z蛋白的这些差异区域(第7、8、9个α-螺旋)是过敏反应能力的主要调控区域,同时C-端第8、9个α-螺旋区域与诱导植物抗病性也显著相关。本研究为改造Hrp Z类harpin蛋白激发子,提高其诱导抗性及功能域研究提供了理论依据。
关键词
丁香假单胞
大豆
致病
变种
HRP
Z
差异序列分析
过敏性反应
诱导抗病性
Keywords
Pseudomonas syringae pv.glycinea
Hrp Z
protein sequence analysis
hypersensitive response（HR）
disease resistance
分类号
S432.42 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究
张岩
伍辉军
周晓辉
高学文
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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职称材料
2
丁香假单胞大豆致病变种不同HrpZ蛋白差异区域功能研究
张阳
伍辉军
张宏月
赵小珍
高学文
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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