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一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化 被引量:7
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作者 张迹 李智 +1 位作者 张宇 袁巧云 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期529-532,共4页
大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法... 大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法制备对BL21菌株的适用性,并对转化过程中的关键参数进行探索和优化。结果表明,该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。 展开更多
关键词 感受态细胞制备 一步法 大肠杆菌bl21(DE3) 转化条件
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人乳铁蛋白在原核中的融合表达 被引量:8
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作者 李树芹 章立群 +5 位作者 孙雪梅 贾士乾 周伟明 张建华 吕加平 张列兵 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2002年第3期3-5,共3页
设计了特异引物,通过PCR扩增人乳铁蛋白(HLF)基因,将扩增的DNA片段重组到原核表达载体pGEX-4T3中,重组体转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,得到了高效融合表达。分析结果表明,获得了特异表达的乳铁蛋白。
关键词 人乳 铁蛋白 PCR 融合表达 大肠杆菌bl21菌株
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印度芥菜BjJ10-2基因原核表达载体构建及抗盐功能的鉴定 被引量:5
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作者 郝梦雨 郎明林 杨学举 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期247-252,共6页
利用RT-PCR技术克隆了印度芥菜核糖体相关膜蛋白RAMP4家族成员BjJ10-2基因的开放读码框,成功构建了pET32a-BjJ10-2原核表达载体,通过热激法将其转化到原核表达菌株BL21(DE3)plysS中,得到重组大肠杆菌BL21(pET32a-BjJ10-2)。SDS-PAGE凝... 利用RT-PCR技术克隆了印度芥菜核糖体相关膜蛋白RAMP4家族成员BjJ10-2基因的开放读码框,成功构建了pET32a-BjJ10-2原核表达载体,通过热激法将其转化到原核表达菌株BL21(DE3)plysS中,得到重组大肠杆菌BL21(pET32a-BjJ10-2)。SDS-PAGE凝胶电泳检测到在IPTG诱导下BjJ10-2在BL21菌株中获得表达。利用分光光度计检测重组大肠杆菌BL21(pET32a-BjJ10-2)和对照菌株BL21(pET32a)的抗盐性,结果表明,过表达BjJ10-2的BL21菌株的抗盐性明显高于对照菌株,其抗NaCl的浓度可高达0.8mol/L。半定量RT-PCR的结果表明BjJ10-2基因响应盐胁迫,在印度芥菜根部其mRNA转录丰度显著增强,在8~12h达到峰值。说明BjJ10-2是一个新的盐胁迫响应基因,可能在植物抗盐生理过程中扮演重要角色。 展开更多
关键词 印度芥菜 BjJ10-2 原核表达载体 大肠杆菌bl21菌株 抗盐性 半定量RT-PCR
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基于Riboswitch的细胞与门构建
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作者 陈梅 张路 许进 《北京大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期411-415,共5页
利用Riboswitch调控原理,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中构建一个细胞与门。该与门以实验室常见的阿拉伯糖和异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)为输入信号,黄色荧光蛋白YFP为输出信号,流式细胞仪检测结果显示该细胞与门成功地实现与逻辑... 利用Riboswitch调控原理,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中构建一个细胞与门。该与门以实验室常见的阿拉伯糖和异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)为输入信号,黄色荧光蛋白YFP为输出信号,流式细胞仪检测结果显示该细胞与门成功地实现与逻辑运算。该与门利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株的特性,减少了基因线路的负载。此外,该与门还具有可复用的特点。 展开更多
关键词 生物分子计算 逻辑门 大肠杆菌bl21(DE3) 核糖开关
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