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对一株耐头孢哌酮的大肠杆菌质粒的研究 被引量:9
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作者 刘必刚 包定元 +2 位作者 舒煦 吴俊辉 范昕建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期184-189,共6页
从一严重感染、经多种抗生素治疗无效而死亡病人的肺部分离到一株多重耐药物性的大肠杆菌。这株菌对头孢哌酮及其它几种抗生素高度耐药。通过对此菌进行染色体原位电泳、转化实验、限制性内切酶谱分析及MIC值的测定.从此菌中分离出... 从一严重感染、经多种抗生素治疗无效而死亡病人的肺部分离到一株多重耐药物性的大肠杆菌。这株菌对头孢哌酮及其它几种抗生素高度耐药。通过对此菌进行染色体原位电泳、转化实验、限制性内切酶谱分析及MIC值的测定.从此菌中分离出四个具有不同分子量及耐药性的质粒。其中三个质粒都对头孢哌酮表现高水平的耐药性;三个质粒对β-内酰胺类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂也耐药。提示:此大肠杆菌对多种抗生素的耐药性是由质粒介导的。对其中二个质粒构建了其DNA物理图谱。 展开更多
关键词 大肠杆菌质粒 耐药性 头孢哌酮
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不同质粒在大肠杆菌宿主细胞中的不稳定性研究 被引量:2
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作者 杨海燕 方呈祥 +1 位作者 张珞珍 陶天申 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第2期190-193,197,共5页
对几种不同的质粒在相同宿主中的稳定性进行检测,结果表明,在非选择性压力下,4种不同的质粒在大肠杆菌宿主细胞中的稳定性有明显的差异,其中pUCG418最稳定,该质粒失去的速率仅为0.5%;pEMBLYe23R次之;pUC9很不稳定,在群体细胞... 对几种不同的质粒在相同宿主中的稳定性进行检测,结果表明,在非选择性压力下,4种不同的质粒在大肠杆菌宿主细胞中的稳定性有明显的差异,其中pUCG418最稳定,该质粒失去的速率仅为0.5%;pEMBLYe23R次之;pUC9很不稳定,在群体细胞中,无质粒细胞高达65.8%;而质粒pG418最不稳定,当细胞增殖到29代时,细胞丢失该质粒的比例高达100%.DNA琼脂糖凝胶电泳的结果表明,这几种质粒的不稳定为分离不稳定性. 展开更多
关键词 质粒大肠杆菌 不稳定性
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表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究 被引量:5
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作者 李岩 鲍朗 +2 位作者 张会东 李娅莎 朱海龙 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期923-926,共4页
目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将... 目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分枝杆菌mc2155中。以SDS-PAGE检测ESAT-6蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平,裂解巨噬细胞,计数胞内存活细菌数。结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,经热诱导后可以表达相对分子质量约为6000的蛋白,与预期值一致。重组耻垢分枝杆菌能够诱导ANA-1细胞活化表达iNOS,并增强巨噬细胞的杀伤活性,重组耻垢分枝杆菌在胞内存活数低于对照组(P<0.05)。结论表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌具有免疫原性,为构建新型结核疫苗提供了实验基础。 展开更多
关键词 ESAT-6 大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒 重组耻垢分枝杆菌 巨噬细胞
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重组穿梭质粒pIMP1-eHER2/neu的构建及其生孢梭菌稳定转化株的筛选与鉴定
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作者 张艳丽 张文卿 +3 位作者 王秋波 丁守怡 吕锐 孟林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1184-1187,共4页
目的:制备人原癌基因HER2/neu的细胞外区域(ECD)基因修饰的重组生孢梭菌,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:利用SOE-PCR将HER2/neu ECD基因连接到厌氧菌的内β1,4-葡聚糖酶的启动子和信号肽基因(eg-lAp)下游,构建融合基因eglAp-H... 目的:制备人原癌基因HER2/neu的细胞外区域(ECD)基因修饰的重组生孢梭菌,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:利用SOE-PCR将HER2/neu ECD基因连接到厌氧菌的内β1,4-葡聚糖酶的启动子和信号肽基因(eg-lAp)下游,构建融合基因eglAp-HER2/neu;将其插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,构建重组质粒;首先将重组质粒导入大肠杆菌DH5α内并进行鉴定;然后用电穿孔法将重组质粒导入生孢梭菌。利用红霉素抗性筛选重组生孢梭菌;采用菌液PCR鉴定阳性克隆。结果:酶切和测序结果显示,插入质粒pIMP1内的eglAp-HER2/neu融合基因序列及读框正确。菌液PCR结果表明,重组质粒pIMP1-eHER2/neu成功转化生孢梭菌;经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带pIMP1-eHER2/neu。结论:成功制备了重组质粒pIMP1-eHER2/neu生孢梭菌的稳定转化株,为其进一步的抗肿瘤作用研究奠定基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒 生孢梭菌 HER2/NEU ECD pIMP1
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