大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展 被引量：37

1

作者 祁浩 刘新利 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期4-6,52,共4页

由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶... 由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 外源基因 宿主菌株

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人白细胞介素-2突变体在大肠杆菌中的克隆表达与鉴定 被引量：4

2

作者 宋小双 聂盼 +1 位作者 马永鹏 刘堰 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期93-97,共5页

根据GenBank报道的人白细胞介素-2(hIL-2)基因分析设计并合成引物,以本室构建的pPIC9K/IL-2突变体(编码125位半胱氨酸→丙氨酸、18位亮氨酸→蛋氨酸、19位亮氨酸→丝氨酸)为模板,PCR扩增出突变型人白细胞介素-2基因.用EcoRI和BamHⅠ对... 根据GenBank报道的人白细胞介素-2(hIL-2)基因分析设计并合成引物,以本室构建的pPIC9K/IL-2突变体(编码125位半胱氨酸→丙氨酸、18位亮氨酸→蛋氨酸、19位亮氨酸→丝氨酸)为模板,PCR扩增出突变型人白细胞介素-2基因.用EcoRI和BamHⅠ对目的基因进行双酶切后,插入大肠杆菌表达载体pBV220,转化宿主菌JM109,经菌落PCR筛选阳性重组子、酶切鉴定,DNA序列分析证实,重组质粒pBV220/IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放阅读框.经42℃热诱导表达,SDS-PAGE电泳显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为15kD的外源蛋白产生,经Western印迹证明为rhIL-2.成功建立了突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因的大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础. 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 白细胞介素-2突变体 克隆 表达载体pBV220

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人工合成人表皮生长因子在大肠杆菌中的表达

3

作者 余榕捷 林剑 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第2期1-6,共6页

目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达... 目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达。计算机分析两者mRNA的翻译起始区 (translationinitiationregion ,TIR)的结构。结果 :融合蛋白表达产量为 2 7%,非融合蛋白的表达用SDS -PAGE检测不到 ,两者均具有促细胞增殖的活性。融合蛋白mRNA的TIR的ΔG值较非融合蛋白的高。结论 :在pET - 3c :BL2 1(DE3)大肠杆菌表达系统中 ,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子 ,表达效率高且不影响其活性。此外 ,mRNA的TIR的结构可能是影响外源基因在本研究的表达系统的表达效率的一个重要因素。 展开更多

关键词 人表皮生长因子 融合蛋白 非融合蛋白 大肠杆菌表达系统

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大肠杆菌表达病毒样颗粒的研究进展 被引量：7

4

作者 李生军 张海霞 冯若飞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1526-1532,共7页

病毒样颗粒是由结构蛋白组装而成,形态结构与天然病毒高度相似的一种多聚蛋白纳米结构,但不包含任何遗传物质,因此是一种理想的疫苗形式。大肠杆菌表达系统因具有良好的安全性、生产周期短、易于放大培养等优点,被广泛应用于基因工程药... 病毒样颗粒是由结构蛋白组装而成,形态结构与天然病毒高度相似的一种多聚蛋白纳米结构,但不包含任何遗传物质,因此是一种理想的疫苗形式。大肠杆菌表达系统因具有良好的安全性、生产周期短、易于放大培养等优点,被广泛应用于基因工程药物的生产,在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。本文综述了利用大肠杆菌系统表达的病毒样颗粒及其组装、表位结构特征和临床试验结果等研究进展,以期为病毒样颗粒疫苗的生产提供可靠的数据支持和设计思路。 展开更多

关键词 疫苗 病毒样颗粒 大肠杆菌表达系统

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大肠杆菌可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原的制备及应用 被引量：2

5

作者 陈春野 刘剑 +7 位作者 朱瑞 李姝璇 叶江辉 王玮 潘德全 徐飞海 程通 夏宁邵 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期252-258,共7页

旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法。基于pGEX-6P-1载体和大肠杆菌E.coliER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,... 旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法。基于pGEX-6P-1载体和大肠杆菌E.coliER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,评价纯化抗原活性,筛选特异性单克隆抗体,初步建立并评价SCCAg抗原检测方法。结果显示,pGEX-6P-1载体和E.coliER2566菌株可用于建立较高效的可溶性表达和纯化SCCAg抗原的方法,获得了具有较高纯度和活性的重组SCCAg抗原,筛选获得特异性单克隆抗体并初步建立了SCCAg管式化学发光检测方法。建立了有效的基于大肠杆菌表达系统的可溶性表达和纯化SCCAg的方法。 展开更多

关键词 人鳞状上皮细胞癌抗原 大肠杆菌表达系统 可溶性表达 单克隆抗体

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人源溶菌酶在大肠杆菌中的表达与复性研究 被引量：2

6

作者 张春晨 胡双艳 阮海华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期153-161,共9页

人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题。优化人源溶菌酶编... 人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题。优化人源溶菌酶编码基因密码子,提高其在大肠杆菌中的适应度和表达量;将优化的基因克隆至大肠杆菌表达质粒pET21a,并将其在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达;利用8 mol/L尿素溶液对包涵体进行溶解变性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式以及复性液中谷胱甘肽氧化还原对(GSSG/GSH)、精氨酸、甘油等复性物的浓度对重组人源溶菌酶复性的效果,获得最佳的复性方案。研究结果表明:37℃诱导温度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功诱导了分子量约为14.7 kD的重组人源溶菌酶的表达,包涵体表达量约为380 mg/L(湿重)。包涵体经一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式复性后,测得比活力值分别为147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳复性方法为梯度透析复性法。进一步探索了复性液中GSSG/GSH比值、精氨酸浓度、甘油浓度对人源溶菌酶复性效果的影响,表明当复性液中同时添加浓度比为1∶2的GSSG/GSH、4 mmol/L精氨酸和6%甘油时,复性后人源溶菌酶的最佳比活力值为1170 U/mg,显著高于3种复性物均不加时溶菌酶335 U/mg的比活力值,但低于溶菌酶标准品1732 U/mg的比活力值。成功地将人源溶菌酶基因在大肠杆菌中表达,并通过包涵体复性体系成功获得高活性重组人源溶菌酶。 展开更多

关键词 人源溶菌酶 大肠杆菌表达系统 包涵体 包涵体体外复性 溶壁微球菌

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外源基因表达系统的研究进展 被引量：38

7

作者 郭广君 吕素芳 王荣富 《科学技术与工程》 2006年第5期582-587,592,共7页

最近20多年来,随着重组DNA技术的迅速发展,对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入,并积累了相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统,它们各有优缺点,在选择时应衡量使用。

关键词 原核表达系统 真核表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细 胞表达系统

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RNA解螺旋酶A表达系统的探究及其动力学研究

8

作者 刘红蕊 吴诚诚 +6 位作者 单衍可 谢青云 邢刚 雷静 施志玉 孙海凤 刘斐 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期831-837,共7页

[目的]RNA解螺旋酶A（RNA helicase A,RHA）参与许多细胞生物学过程中,并能促进艾滋病病毒1型（HIV-1）等一些病毒的复制,本试验旨在探究温度、p H值对RHA的动力学影响。[方法]利用PCR扩增全长RHA基因,构建重组载体p ET-28a-RHA和p Cold... [目的]RNA解螺旋酶A（RNA helicase A,RHA）参与许多细胞生物学过程中,并能促进艾滋病病毒1型（HIV-1）等一些病毒的复制,本试验旨在探究温度、p H值对RHA的动力学影响。[方法]利用PCR扩增全长RHA基因,构建重组载体p ET-28a-RHA和p Cold-Ⅰ-RHA,分别转化至BL21 star（DE3）和BL21、Rosetta2菌株中,加IPTG分别在28℃和15℃中诱导表达。将全长RHA基因重组到p Fast Bac Dual载体中,然后将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,通过转座作用,将RHA基因整合到杆状病毒基因组中。提取重组杆状病毒基因组（重组杆粒DNA）,将重组杆粒DNA转染到sf9细胞中,收集细胞,纯化蛋白,可以得到完整的RHA。建立体外解螺旋反应体系,改变温度、p H值,检测RHA活性的变化。[结果]完整RHA在BL21、Rosetta2中可微量可溶表达。sf9可以表达有活性的完整RHA。反应温度降低时,解螺旋速率变小,RHA活性降低。p H值在6.5-8.0范围内,随着p H值升高,RHA活性升高;当p H值大于8.0时,RHA活性降低。[结论]完整的RHA在BL21、Rosetta2中可微量表达;有3＇-tailed解旋极性的RHA活性受温度、p H影响较大。 展开更多

关键词 RNA HELICASE A 大肠杆菌表达系统 杆状病毒表达系统 温度 pH 分子机制

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非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备 被引量：7

9

作者 李杰 张星星 +6 位作者 郭晶 孟庆玲 乔军 张国武 王晓婷 李妍 才学鹏 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期126-130,共5页

为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片... 为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片段克隆入p ET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体p ET-p30-54,转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体。SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47. 1 ku; Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性。将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p30-54融合蛋白 大肠杆菌表达系统 多克隆抗体 反应原性

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PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定 被引量：4

10

作者 张煜彬 叶路芬 +6 位作者 吴忠秀 薛维娜 何彬 杨畅 李勇军 王永林 刘亭 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期42-49,共8页

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化 亲和层析 蛋白质印迹法

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猪传染性胃肠炎病毒YK株N基因的原核表达与N蛋白的生物学活性检测

11

作者 张雷 卫广森 《中国兽药杂志》 2005年第5期10-12,19,共4页

将猪传染性胃肠炎病毒的N基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中。通过筛选表达温度和IPTG的浓度,使N基因在原核表达系统中表达并使目的表达产物产量达到最高值。将诱导表达的产物进行SDS-PAGE蛋白电泳和Wester... 将猪传染性胃肠炎病毒的N基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中。通过筛选表达温度和IPTG的浓度,使N基因在原核表达系统中表达并使目的表达产物产量达到最高值。将诱导表达的产物进行SDS-PAGE蛋白电泳和Western检验,证明该表达产物是猪传染性胃肠炎病毒的N蛋白。试验结果说明,猪传染性胃肠炎病毒N基因能够在原核表达系统中大量表达,而且表达的蛋白质具有生物学活性。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N基因 N蛋白 活性检测 大肠杆菌表达系统 原核表达系统 Western 表达产物 生物学活性 表达载体 基因克隆 IPTG 蛋白电泳 PAGE 诱导表达 试验结果 SDS 蛋白质

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表达纯化糖原合成酶激酶3β的两种方法比较 被引量：1

12

作者 许少飞 徐杰 黎明涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期397-402,共6页

目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。... 目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。结果大肠杆菌表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为54%,昆虫细胞表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为96%;昆虫细胞来源的目的蛋白比大肠杆菌来源的目的蛋白活性高一倍左右。结论相比大肠杆菌表达的糖原合成酶激酶3β,昆虫细胞表达的目的蛋白具有更高的纯度和活性。 展开更多

关键词 糖原合成酶激酶3Β 大肠杆菌表达系统 杆状病毒昆虫细胞表达系统

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定 被引量：3

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作者 王鑫 张洪亮 +6 位作者 秦志华 郑乾坤 黄娟 董绍明 杨瑞梅 曲光刚 单虎 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期106-111,共6页

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目... 为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目的片段进行扩增,将扩增的片段经双酶切处理后连接到pColdSUMO-FLAG载体上,随后转化至E.coli TOP 10感受态细胞。经菌液PCR鉴定,将构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG作为诱导剂对目的蛋白进行诱导表达,表达产物通过Ni-NTA亲和层析柱纯化。通过SDA-PAGE凝胶电泳分析表达及纯化后的蛋白,同时使用ELISA方法检测纯化后的纳米抗体效价,并使用Western blot鉴定纯化后的蛋白。SDS-PAGE结果显示,成功获得了大小约36 kDa的重组蛋白,利用原核表达系统制备的PRRSV GP5特异性纳米抗体重组蛋白以可溶性形式表达;ELISA结果显示,该纳米抗体结合抗原的效价为1:50000;Western blot结果显示,该纳米抗体具有较好的反应性和特异性。本试验为PRRSV检测用及治疗用新型抗体开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 大肠杆菌表达系统 纳米抗体

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红鳍东方鲀组织蛋白酶L表达载体的构建及表达结果验证

14

作者 李妍钰 汤奇龙 +3 位作者 张鲁嘉 谢静莉 王文利 刘源 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第20期1-5,共5页

红鳍东方鲀味道鲜美,已从其体内发掘了系列鲜味肽,但其形成机制尚未明确。组织蛋白酶L可通过降解肌原纤维蛋白及肌钙蛋白发挥着重要的滋味形成作用。为了探索其对红鳍东方鲀呈味肽的形成机制,本研究通过查找NCBI数据库得到一条全长为1 3... 红鳍东方鲀味道鲜美,已从其体内发掘了系列鲜味肽,但其形成机制尚未明确。组织蛋白酶L可通过降解肌原纤维蛋白及肌钙蛋白发挥着重要的滋味形成作用。为了探索其对红鳍东方鲀呈味肽的形成机制,本研究通过查找NCBI数据库得到一条全长为1 336 bp的红鳍东方鲀组织蛋白酶L的序列,从红鳍东方鲀肌肉中提取RNA并转录为cDNA作为模板克隆,选择p ET-28a(+)作为表达载体、E.coli BL21作为重组工程菌进行克隆表达,成功得到大小为36 k D的重组组织蛋白酶L,并验证了其可在大肠杆菌表达系统中成功克隆表达。本研究为进一步研究红鳍东方鲀组织蛋白酶L酶学特性及其对滋味形成提供了理论支持。 展开更多

关键词 红鳍东方鲀 组织蛋白酶L 呈味肽 大肠杆菌表达系统

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非洲猪瘟病毒MGF505-5R蛋白表达与纯化 被引量：5

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作者 张素玲 吴芃 +5 位作者 岳亚男 白晨雨 郝丽影 李向东 逄文强 田克恭 《河南农业科学》 北大核心 2020年第10期130-136,共7页

为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体,分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接,构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R... 为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体,分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接,构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R,并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,研究最佳表达条件;采用麦芽糖亲和层析和Ni2+亲和层析对表达的重组蛋白进行纯化,并将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体;应用Western blot方法对制备的多克隆抗体进行鉴定。结果显示,MBP-MGF505-5R重组蛋白能够在大肠杆菌中可溶性表达,在20℃条件下,IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导12 h时,重组蛋白可溶性表达量最高;纯化后可获得纯度达90%以上的MGF505-5R蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体能够与MGF505-5R蛋白发生特异性反应。综上,利用大肠杆菌表达系统实现了ASFV MGF505-5R蛋白的可溶性表达,且纯化后重组蛋白纯度较高,具有生物学活性。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 MGF505-5R蛋白 大肠杆菌表达系统 可溶性表达 纯化

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植酸酶基因在原核细胞中表达及植酸酶应用进展

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作者 卢珊 张守纯 +1 位作者 朱航 梁志刚 《现代畜牧兽医》 2007年第7期51-54,共4页

植酸酶（Phytase）是催化植酸及其盐类物质水解成肌醇和磷酸的一类酶的总称，广泛存在于微生物、麦芽、种子等中。植酸酶可使单胃动物对饲料中磷的利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，另外还可降低植酸的抗营养作用。因此植酸... 植酸酶（Phytase）是催化植酸及其盐类物质水解成肌醇和磷酸的一类酶的总称，广泛存在于微生物、麦芽、种子等中。植酸酶可使单胃动物对饲料中磷的利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，另外还可降低植酸的抗营养作用。因此植酸酶在饲料工业中的应用对提高养殖业效益和降低环境污染有重要意义。生产植酸酶的表达系统包括真核表达系统和原核表达系统。真核表达系统主要有丝状真菌表达系统和酵母表达系统；原核表达系统主要是大肠杆菌表达系统。 展开更多

关键词 植酸酶 酶应用 原核细胞 原核表达系统 大肠杆菌表达系统 真核表达系统 基因 本科

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包涵体的形成原因及其处理方法 被引量：20

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作者 邝爱丽 陈圆圆 +5 位作者 彭志峰 郑鹿平 付仁一 徐雪 郭伦涛 王川庆 《上海畜牧兽医通讯》 2009年第1期62-63,共2页

关键词 大肠杆菌表达系统 包涵体 原因 基因重组技术 外源基因 工程细胞 外源蛋白 遗传背景

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非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用 被引量：11

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作者 郝丽影 王彦伟 +6 位作者 孙玉洁 曹红梅 黄甜 逄文强 李向东 邓均华 田克恭 《河南农业科学》 北大核心 2020年第10期124-129,共6页

为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫学诊断试剂,利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白,制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体,建立检测ASFV的胶体金免疫层析法(GICA)。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET28a-P30,实现了重组P30蛋白的可溶性表... 为研发非洲猪瘟病毒(ASFV)的免疫学诊断试剂,利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白,制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体,建立检测ASFV的胶体金免疫层析法(GICA)。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET28a-P30,实现了重组P30蛋白的可溶性表达,且该重组蛋白与ASFV阳性血清可发生特异性反应;制备了10株稳定分泌P30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价均高于1∶40000,与ASFV具有良好的反应性,且不与其他常见猪源病毒反应;利用2株单克隆抗体建立胶体金免疫层析法,可用于ASFV的检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 P30蛋白 大肠杆菌表达系统 单克隆抗体 胶体金免疫层析法

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非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p54的表位定位研究 被引量：4

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作者 张爱琼 贺志昊 《猪业科学》 2020年第5期18-19,共2页

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,对全球养猪业造成严重威胁,给中国以及东南亚在内的一些国家造成了严重的经济损失。急性型ASF感染的猪只在感染后的临床表现为昏睡、厌食、高烧和死亡;在... 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,对全球养猪业造成严重威胁,给中国以及东南亚在内的一些国家造成了严重的经济损失。急性型ASF感染的猪只在感染后的临床表现为昏睡、厌食、高烧和死亡;在慢性型ASF中,猪只临床症状要轻得多。由于现今没有有效的非洲猪瘟疫苗对猪只进行免疫来避免该病毒的感染。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 结构蛋白 p54 糖基化位点 抗原捕获 酶联免疫吸附试验 大肠杆菌表达系统 定位研究

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解密圆环疫苗新时代风向标——圆柯欣 被引量：2

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作者 周盼伊 《中国动物保健》 2018年第2期20-22,共3页

猪圆环病毒（Porcine circoviruses,PCV）是单股环状的DNA病毒,基因组长度约为1.7kb长,是最小的动物病毒之一。已经确定有两种类型的PCV,即圆环病毒1型（PCV1）和圆环病毒2型（PCV2）。PCV1对猪只没有致病性,PCV2于1998年首次报道,其在... 猪圆环病毒（Porcine circoviruses,PCV）是单股环状的DNA病毒,基因组长度约为1.7kb长,是最小的动物病毒之一。已经确定有两种类型的PCV,即圆环病毒1型（PCV1）和圆环病毒2型（PCV2）。PCV1对猪只没有致病性,PCV2于1998年首次报道,其在临床条件下能引起猪只的猪圆环病毒相关疾病（Porcine circovirus associated diseases,PCVAD）,主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、肺炎、 展开更多

关键词 灭活疫苗 圆环病毒 病毒样颗粒 大肠杆菌表达系统 PCVAD 基因工程亚单位疫苗 风向标

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