用大肠杆菌表达FMDV NSP3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立 被引量：14

1

作者 曹轶梅 卢曾军 +1 位作者 刘在新 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期381-386,共6页

用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样... 用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价。当效价小于012为阴性,介于012～013之间为可疑,大于013为阳性。根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性。研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体。这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达 鉴别 间接ELISA方法 FMDV 感染动物 判定标准 动物血清 血清样品 疫苗注射 注射疫苗 方法应用 疫情监测 阳性 敏感性 健康牛 检测 效价 抗原 后作 免疫 抗体

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大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展 被引量：34

2

作者 祁浩 刘新利 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期4-6,52,共4页

由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶... 由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 外源基因 宿主菌株

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抗生素肽FALL-39基因大肠杆菌表达载体的构建

3

作者 冯云 黄宁 王伯瑶 《四川生理科学杂志》 2000年第4期43-43,共1页

细菌对传统抗生素产生耐药性是当今临床医学中的全球性难题之一。内源性抗生素肽是多细胞生物天然进化产生的抵御外源性感染的生物活性肽，历经数百万年而无耐受产生，且其作用迅速、强力、广谱。但是天然获取、固相合成和重组真核表达... 细菌对传统抗生素产生耐药性是当今临床医学中的全球性难题之一。内源性抗生素肽是多细胞生物天然进化产生的抵御外源性感染的生物活性肽，历经数百万年而无耐受产生，且其作用迅速、强力、广谱。但是天然获取、固相合成和重组真核表达抗生素肽量少而造价极其昂贵，因此，利用微生物作为生物反应器通过基因工程技术生产抗菌肽，是进行抗菌肽研究开发的最有前途的选择之一。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达 抗生素肽 FALL-39 天然 基因 外源性感染 耐受 多细胞生物 抗菌肽 进化

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新型高抗草甘膦N-乙酰转移酶基因的分离及其在大肠杆菌中的表达 被引量：5

4

作者 顿宝庆 陆伟 +6 位作者 平淑珍 张维 陈明 徐玉泉 金丹 赵仲麟 林敏 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期943-947,共5页

利用草甘膦极端污染土壤总DNA,构建了元基因组文库,筛选到一个高抗草甘膦的N-乙酰转移酶（N-acetyltransferase,GAT）基因,并利用原核表达系统对该基因进行了功能鉴定,发现其在大肠杆菌BL21中能耐受高达300 mM的草甘膦.研究结果为进行N... 利用草甘膦极端污染土壤总DNA,构建了元基因组文库,筛选到一个高抗草甘膦的N-乙酰转移酶（N-acetyltransferase,GAT）基因,并利用原核表达系统对该基因进行了功能鉴定,发现其在大肠杆菌BL21中能耐受高达300 mM的草甘膦.研究结果为进行N-乙酰化途径高抗草甘膦机理研究和新型高抗草甘膦转基因作物的开发提供了理论基础. 展开更多

关键词 元基因组 功能筛选 N-乙酰转移酶基因 大肠杆菌表达

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His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：4

5

作者 朱江 曹广力 +7 位作者 姜秀英 王雪峰 朱艳 邓忠斌 李新平 沈颂东 马泓冰 贡成良 《科技通报》 2005年第1期63-68,共6页

将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH... 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。 展开更多

关键词 猪生长激素基因 大肠杆菌表达 纯化 抗体IGG

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耐热木聚糖酶基因xyn11^(EM)在大肠杆菌中的表达 被引量：2

6

作者 何瑶 殷欣 +1 位作者 吴芹 邬敏辰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期935-940,共6页

将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11^(EM)克隆至表达质粒p ET-28a(+)中,获得重组质粒p ET-28a-xyn11^(EM)。将其转化Escherichia coli BL21(DE3),构建表达耐热木聚糖酶的重组工程菌E.coli BL21/xyn11^(EM)。用IPTG诱... 将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11^(EM)克隆至表达质粒p ET-28a(+)中,获得重组质粒p ET-28a-xyn11^(EM)。将其转化Escherichia coli BL21(DE3),构建表达耐热木聚糖酶的重组工程菌E.coli BL21/xyn11^(EM)。用IPTG诱导表达重组木聚糖酶Xyn11^(EM)(re Xyn11^(EM)),酶活性可达47.5 U/m L。SDS-PAGE分析显示,re Xyn11^(EM)的表观相对分子质量为24 800。re Xyn11^(EM)的最适反应温度为70℃,在70℃以下稳定。最适反应p H为6.5~7.0,在p H5.0~8.0范围内稳定。大多数金属离子和EDTA对该重组酶的活性影响不大。re Xyn11^(EM)的Km和Vmax值分别为7.2 mg/m L和54.7 U/mg。结果表明xyn11^(EM)成功在E.coli中实现了异源表达,其良好的热稳定性具有较好的工业应用潜力。 展开更多

关键词 耐热木聚糖酶 大肠杆菌表达 酶学性质

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甘薯β—淀粉酶cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：2

7

作者 张勇为 张义正 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第9期29-33,共5页

用RT-PCR技术从甘薯新大紫(Ipornoea batatas Lam cv．Xindazi)块根总RNA中扩增出预期大小的DNA片段(约1．5kb)。将该片段克隆至pMD—T载体，经酶切分析和序列测定后，正向插入的重组子命名为pMD—cAmy，插入片段长1521bp，编码499个氨... 用RT-PCR技术从甘薯新大紫(Ipornoea batatas Lam cv．Xindazi)块根总RNA中扩增出预期大小的DNA片段(约1．5kb)。将该片段克隆至pMD—T载体，经酶切分析和序列测定后，正向插入的重组子命名为pMD—cAmy，插入片段长1521bp，编码499个氨基酸残基的多肽，分子量55998kD。克隆的β—淀粉酶cDNA与报道的甘薯另一品种Kokei No．14的mRNA有99％的序列相同，与Calystegia sepiumβ—淀粉酶mRNA有87％相同。重组子pMD—cAmy经IPTG诱导后，胞内可溶性提取物经凝胶电泳和活性染色，出现明显的淀粉酶活性带。SDS—PAGE表明，大肠杆菌表达的β-淀粉酶亚基的分子量约为50kD。重组子pMD—cAmy在淀粉平板上形成明显的水解圈，说明甘薯β-淀粉酶cDNA不仅能在大肠杆菌表达，而且能将有活性的β-淀粉酶分泌到胞外。对重组子pMD—cAmy和甘薯块根可溶性提取物的比较发现，大肠杆菌表达的β-淀粉酶与甘薯块根的β-淀粉酶除迁移率不同外，对淀粉酶活性抑制剂EDTA和β-巯基乙醇的敏感性相同。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达 Β-淀粉酶 提取物 RNA RT-PCR技术 β-巯基乙醇 可溶性 甘薯 块根 薯块 CDNA克隆

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利用自剪切融合蛋白在大肠杆菌中表达并纯化兔防御素

8

作者 李霞 沈昕 +4 位作者 王义琴 张利明 赵世民 李文彬 孙勇如 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期67-70,共4页

将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达.然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白.蛋白电泳检测到以二聚体形式存... 将源自兔嗜中性细胞的防御素基因NP-1插入原核表达载体pTYB2,并将重组质粒pTYB2-NP1转入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导使防御素以融合蛋白的形式表达.然后,通过亲和层析利用自剪切融合蛋白分离提纯目的蛋白.蛋白电泳检测到以二聚体形式存在的防御素,但此蛋白没有对大肠杆菌的抑菌活性.同时,对该表达纯化系统的特点和用原核生物大肠杆菌表达真核生物防御素的问题进行了分析和讨论. 展开更多

关键词 融合蛋白 兔防御素 剪切 原核表达载体 大肠杆菌表达 防御素基因 NP-1 重组质粒 IPTG 目的蛋白 分离提纯 亲和层析 电泳检测 抑菌活性 真核生物 原核生物 纯化系统 性细胞 体形

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中慢生型天山根瘤菌CCBAU060A自体诱导物合酶基因的筛选及其在大肠杆菌中的表达

9

作者 曹慧娟 郑会明 +2 位作者 杨梦华 钟增涛 朱军 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期117-121,共5页

细菌在高细胞密度下可以产生化学信号分子调控细菌相关基因的表达,这种信号分子被称为自体诱导物(Autoinducer,AI)。采用检测菌株JZA1在中慢生型天山根瘤菌CCBAU060A(Mesorhizobium tianshanenseCCBAU060A)培养上清液中检测到了高活性... 细菌在高细胞密度下可以产生化学信号分子调控细菌相关基因的表达,这种信号分子被称为自体诱导物(Autoinducer,AI)。采用检测菌株JZA1在中慢生型天山根瘤菌CCBAU060A(Mesorhizobium tianshanenseCCBAU060A)培养上清液中检测到了高活性的自体诱导物;利用转座子随机突变的方法获得了AI缺失突变株,并克隆得到了相关的自体诱导物合酶基因;将自体诱导物合酶基因在大肠杆菌中进行表达,对大肠杆菌重组菌株进行自体诱导物检测发现,该合酶基因在大肠杆菌中能够合成四种自体诱导物分子。 展开更多

关键词 群体感应 中慢生型天山根瘤菌CCBAU060A 自体诱导物合酶 大肠杆菌重组表达

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解肝磷脂土地杆菌(Pedobacter heparinus)源唾液酸醛缩酶基因的异源表达及其活性研究

10

作者 郭娟 曹翠 +2 位作者 李玉泉 刘丽 Josef Voglmeir 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第5期136-143,共8页

为发掘新型唾液酸醛缩酶,使其在大肠杆菌中得到高效表达,本研究首次从菌株Pedobacter heparinus中克隆疑似编码唾液酸醛缩酶的PhNeuLy3300基因片段,并构建可自主表达异源蛋白的组成型表达载体pRSF-EM5。在此基础上将克隆的目的基因分别... 为发掘新型唾液酸醛缩酶,使其在大肠杆菌中得到高效表达,本研究首次从菌株Pedobacter heparinus中克隆疑似编码唾液酸醛缩酶的PhNeuLy3300基因片段,并构建可自主表达异源蛋白的组成型表达载体pRSF-EM5。在此基础上将克隆的目的基因分别导入该pRSF-EM5载体和常用的诱导型载体p ET-30a,构建重组质粒pET30aPhNeuLy3300和pRSF-EM5-PhNeuLy3300,经大肠杆菌表达系统异源表达目的蛋白,并进一步对两种重组蛋白酶进行电泳分析和活性研究。结果表明:编码唾液酸醛缩酶的基因片段全长为945 bp,共编码314个氨基酸残基;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两种重组蛋白表观分子量约为36.4 kDa,纯化后的pET30a-Ph Neu Ly3300重组蛋白浓度为3.29 mg/mL,证明经异源表达获得了两种重组目的蛋白酶;活性研究显示两种重组唾液酸醛缩酶均能在1 h内催化N-乙酰神经氨酸生成N-乙酰甘露糖胺,证明两种重组蛋白酶均具有较高的活性。 展开更多

关键词 唾液酸醛缩酶 诱导型启动子 组成型启动子 大肠杆菌表达 活性鉴定

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PD0721单链抗体的体外原核表达条件优化及蛋白质鉴定 被引量：4

11

作者 张煜彬 叶路芬 +6 位作者 吴忠秀 薛维娜 何彬 杨畅 李勇军 王永林 刘亭 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期42-49,共8页

为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重... 为了构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)的单链抗体PD0721的大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,作者研究了PD0721重组蛋白在大肠杆菌BL21中的最佳表达条件,并建立相应的重组蛋白质纯化方法。首先构建重组表达质粒PD0721-pET-22b(+)并转化至大肠杆菌BL21中,再利用SDS-PAGE研究不同诱导剂IPTG浓度、不同诱导温度、不同诱导时间和不同菌体浓度对PD0721重组蛋白表达的影响。利用镍柱亲和层析开发PD0721重组蛋白的纯化方法,并使用蛋白质印迹法以及N端测序法对纯化后的蛋白质进行鉴定。菌落PCR及琼脂糖凝胶电泳表明,PD0721-pET-22b(+)重组质粒及PD0721重组大肠杆菌BL21构建成功.PD0721重组蛋白在体外原核表达的最佳诱导剂浓度为0.6μmol/L,最佳温度为15℃,最佳诱导时间为12 h,最佳菌体浓度OD600约为0.6。经过Ni2+柱亲和层析后,当咪唑的浓度为150 mmol/L,可以得到纯度较高的PD0721重组蛋白。SDS-PAGE电泳和Western Blotting结果表明,重组蛋白质产物的相对分子质量约为31000,与理论相对分子质量一致,蛋白质的N端测序也与设计序列一致。作者成功构建了抗EGFRvⅢ抗体PD0721重组蛋白的体外原核表达体系,优化了最佳表达条件,并提供了纯化重组PD0721蛋白的可行方法。 展开更多

关键词 大肠杆菌表达系统 EGFRvⅢ 表达条件优化 亲和层析 蛋白质印迹法

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猪传染性胃肠炎病毒YK株N基因的原核表达与N蛋白的生物学活性检测

12

作者 张雷 卫广森 《中国兽药杂志》 2005年第5期10-12,19,共4页

将猪传染性胃肠炎病毒的N基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中。通过筛选表达温度和IPTG的浓度,使N基因在原核表达系统中表达并使目的表达产物产量达到最高值。将诱导表达的产物进行SDS-PAGE蛋白电泳和Wester... 将猪传染性胃肠炎病毒的N基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中。通过筛选表达温度和IPTG的浓度,使N基因在原核表达系统中表达并使目的表达产物产量达到最高值。将诱导表达的产物进行SDS-PAGE蛋白电泳和Western检验,证明该表达产物是猪传染性胃肠炎病毒的N蛋白。试验结果说明,猪传染性胃肠炎病毒N基因能够在原核表达系统中大量表达,而且表达的蛋白质具有生物学活性。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 N基因 N蛋白 活性检测 大肠杆菌表达系统 原核表达系统 Western 表达产物 生物学活性 表达载体 基因克隆 IPTG 蛋白电泳 PAGE 诱导表达 试验结果 SDS 蛋白质

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DEPTO R蛋白的表达纯化条件及与mTOR-TRD2亚结构域的相互作用 被引量：1

13

作者 王男 程小桁 +2 位作者 郑积敏 陈光巨 贾宗超 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第5期912-919,共8页

测试并优化了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的FAT结构域及其亚结构域TRD2和DEPTOR蛋白在大肠杆菌中的表达条件,获得了TRD2和DEPTOR蛋白成功表达并大量纯化的条件.结果表明,麦芽糖结合蛋白(MBP)融合m TOR的TRD2亚结构域可以在菌株BL21(D... 测试并优化了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的FAT结构域及其亚结构域TRD2和DEPTOR蛋白在大肠杆菌中的表达条件,获得了TRD2和DEPTOR蛋白成功表达并大量纯化的条件.结果表明,麦芽糖结合蛋白(MBP)融合m TOR的TRD2亚结构域可以在菌株BL21(DE3)中大量表达.DEPTOR-G270P突变比野生型DEPTOR在BL21(DE3)中的表达量提高约5倍,且该突变并不影响DEPTOR自身的二级结构.通过凝胶过滤实验发现,m TOR的TRD2亚结构域和DEPTOR之间可能存在相互作用. 展开更多

关键词 mTOR蛋白 TRD2亚结构域 DEPTOR蛋白 G270P突变 大肠杆菌表达

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红鳍东方鲀组织蛋白酶L表达载体的构建及表达结果验证

14

作者 李妍钰 汤奇龙 +3 位作者 张鲁嘉 谢静莉 王文利 刘源 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第20期1-5,共5页

红鳍东方鲀味道鲜美,已从其体内发掘了系列鲜味肽,但其形成机制尚未明确。组织蛋白酶L可通过降解肌原纤维蛋白及肌钙蛋白发挥着重要的滋味形成作用。为了探索其对红鳍东方鲀呈味肽的形成机制,本研究通过查找NCBI数据库得到一条全长为1 3... 红鳍东方鲀味道鲜美,已从其体内发掘了系列鲜味肽,但其形成机制尚未明确。组织蛋白酶L可通过降解肌原纤维蛋白及肌钙蛋白发挥着重要的滋味形成作用。为了探索其对红鳍东方鲀呈味肽的形成机制,本研究通过查找NCBI数据库得到一条全长为1 336 bp的红鳍东方鲀组织蛋白酶L的序列,从红鳍东方鲀肌肉中提取RNA并转录为cDNA作为模板克隆,选择p ET-28a(+)作为表达载体、E.coli BL21作为重组工程菌进行克隆表达,成功得到大小为36 k D的重组组织蛋白酶L,并验证了其可在大肠杆菌表达系统中成功克隆表达。本研究为进一步研究红鳍东方鲀组织蛋白酶L酶学特性及其对滋味形成提供了理论支持。 展开更多

关键词 红鳍东方鲀 组织蛋白酶L 呈味肽 大肠杆菌表达系统

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乳源抗高血压七肽串联基因的合成及表达

15

作者 李名远 韩建春 李杰 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2010年第8期4-7,共4页

分析了抗高血压肽结构和功能之间的关系,人工合成具有较高活性的抗高血压肽基因序列,并进一步串联为11拷贝抗高血压肽,克隆至表达载体pET-32b(+)上并转化宿主菌BL21。重组菌经诱导培养、细胞破碎,表达蛋白经胰蛋白酶酶解,测定酶解产物抑... 分析了抗高血压肽结构和功能之间的关系,人工合成具有较高活性的抗高血压肽基因序列,并进一步串联为11拷贝抗高血压肽,克隆至表达载体pET-32b(+)上并转化宿主菌BL21。重组菌经诱导培养、细胞破碎,表达蛋白经胰蛋白酶酶解,测定酶解产物抑制ACE酶活性。表达蛋白的胰蛋白酶酶解产物抑制ACE酶活性达到77.23%。成功合成了串联的11拷贝抗高血压七肽基因,并实现了其在大肠杆菌中的高效表达,表达蛋白的胰蛋白酶酶解产物具有抗高血压肽活性。 展开更多

关键词 抗高血压肽 血管紧张素转换酶抑制剂 大肠杆菌表达

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弓形虫SAG2表面抗原的克隆与原核表达

16

作者 李聪颖 许应天 +1 位作者 张西臣 方东山 《黑龙江科技信息》 2010年第10期127-127,285,共2页

目的:扩增弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,在大肠杆菌中表达。方法:设计并合成引物,经PCR法扩增SAG2基因序列,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-SAG2质粒,经酶切鉴定、测序,与pGEX-4T-1载体连接,构建pGEX-4T-1-SAG2质粒。将... 目的:扩增弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,在大肠杆菌中表达。方法:设计并合成引物,经PCR法扩增SAG2基因序列,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-SAG2质粒,经酶切鉴定、测序,与pGEX-4T-1载体连接,构建pGEX-4T-1-SAG2质粒。将重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果:扩增出约561bp的SAG2基因序列,成功构建pGEX-4T-1-SAG2质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%。SDS-PAGE电泳显示pGEX-4T-1-SAG2的融合蛋白的分子量约为45kd。Western-blot显示融合蛋白有良好的抗原性。结论表达质粒在大肠杆菌中得到高效表达,为进一步研究弓形虫病的诊断做好准备。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原基因 大肠杆菌表达

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定

17

作者 王鑫 张洪亮 +6 位作者 秦志华 郑乾坤 黄娟 董绍明 杨瑞梅 曲光刚 单虎 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期106-111,共6页

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目... 为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5蛋白特异性纳米抗体VHHGP5基因片段为模板,使用PCR对目的片段进行扩增,将扩增的片段经双酶切处理后连接到pColdSUMO-FLAG载体上,随后转化至E.coli TOP 10感受态细胞。经菌液PCR鉴定,将构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG作为诱导剂对目的蛋白进行诱导表达,表达产物通过Ni-NTA亲和层析柱纯化。通过SDA-PAGE凝胶电泳分析表达及纯化后的蛋白,同时使用ELISA方法检测纯化后的纳米抗体效价,并使用Western blot鉴定纯化后的蛋白。SDS-PAGE结果显示,成功获得了大小约36 kDa的重组蛋白,利用原核表达系统制备的PRRSV GP5特异性纳米抗体重组蛋白以可溶性形式表达;ELISA结果显示,该纳米抗体结合抗原的效价为1:50000;Western blot结果显示,该纳米抗体具有较好的反应性和特异性。本试验为PRRSV检测用及治疗用新型抗体开发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 大肠杆菌表达系统 纳米抗体

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杆状病毒表达的帽猴ZP糖蛋白-3羧基端片段抑制ZP3介导的精子胞吐作用

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作者 倪蓉 《国外医学（计划生育．生殖健康分册）》 2006年第1期50-50,共1页

关键词 杆状病毒表达 胞吐作用 P糖蛋白 人精子 ZP3 羧基端片段 大肠杆菌表达 氨基酸残基 猴 介导

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猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究 被引量：12

19

作者 刘建杰 陈焕春 +4 位作者 何启盖 吴斌 李冲 徐晓娟 陈汉阳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期177-180,共4页

利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ,提取表达产物包涵体,再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌,和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫 BALB/c小鼠,间隔 2 周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒... 利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ,提取表达产物包涵体,再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌,和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫 BALB/c小鼠,间隔 2 周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的ELISA抗体和7型菌的血凝抗体,第2 次免疫 2 周后用 5LD50的猪胸膜肺炎放线杆菌1型、7型菌株进行攻毒。结果发现第2次免疫后抗体水平显著升高,用2种血清型进行攻毒后其保护力分别为83.3%和91.7%,从死亡小鼠的体内分离到了攻毒菌株,初步的动物试验表明此种新型亚单位菌苗对同型和异型的APP菌株具有较好的保护力,为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。 展开更多

关键词 亚单位 小鼠 免疫后 菌苗 保护力 加强免疫 大肠杆菌表达 猪胸膜肺炎放线杆菌 猪传染性胸膜肺炎 菌株

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非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p54的表位定位研究 被引量：4

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作者 张爱琼 贺志昊 《猪业科学》 2020年第5期18-19,共2页

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,对全球养猪业造成严重威胁,给中国以及东南亚在内的一些国家造成了严重的经济损失。急性型ASF感染的猪只在感染后的临床表现为昏睡、厌食、高烧和死亡;在... 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,对全球养猪业造成严重威胁,给中国以及东南亚在内的一些国家造成了严重的经济损失。急性型ASF感染的猪只在感染后的临床表现为昏睡、厌食、高烧和死亡;在慢性型ASF中,猪只临床症状要轻得多。由于现今没有有效的非洲猪瘟疫苗对猪只进行免疫来避免该病毒的感染。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 结构蛋白 p54 糖基化位点 抗原捕获 酶联免疫吸附试验 大肠杆菌表达系统 定位研究

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