大肠杆菌细胞膜固定相萃取辣木籽抗菌肽

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作者 和丽 许映月 +2 位作者 陈凤敏 黄艾祥 王雪峰 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期65-69,95,共6页

制备大肠杆菌细胞膜固定相(E.coli cell membrane stationary phase,ECMSP),研究其对辣木籽抗菌肽的萃取效果。研究超声时间、超声功率对大肠杆菌破壁效果的影响,分析大肠杆菌细胞膜与大孔硅胶的吸附特征及ECMSP对辣木籽抗菌肽的吸附效... 制备大肠杆菌细胞膜固定相(E.coli cell membrane stationary phase,ECMSP),研究其对辣木籽抗菌肽的萃取效果。研究超声时间、超声功率对大肠杆菌破壁效果的影响,分析大肠杆菌细胞膜与大孔硅胶的吸附特征及ECMSP对辣木籽抗菌肽的吸附效果,明确萃取前后抑菌活力变化及反相-高效液相色谱(RP-HPLC)差异峰。结果表明:在超声功率500 W、超声时间30 min条件下,大肠杆菌破壁效果较好;大孔硅胶对大肠杆菌细胞膜的饱和吸附值(C_(s)^(max))为9.98μg/mg、吸附常数(K^(*))为171.02μg/mL;萃取前后抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果差异明显,RP-HPLC分析表明萃取前后出现了3个差异峰。研究结果可为辣木籽抗菌肽的后续开发利用提供理论基础和应用参考。 展开更多

关键词 大肠杆菌 大肠杆菌细胞膜固定相 辣木籽抗菌肽 萃取 抑菌率

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古细菌Pyrococcus furiosus嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：2

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作者 沈微 王正祥 +1 位作者 刘吉泉 诸葛健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期10-14,共5页

用PCR方法从嗜热古细菌Pyrococcusfuriosus的基因组DNA中扩增出胞外α 淀粉酶完整结构基因 ,插入表达载体pET2 8a中构建成质粒 pET amy(sig+) ,以质粒pET amy(sig +)为底物扩增出不含信号序列的α 淀粉酶成熟肽基因片断 ,获得质粒 pET a... 用PCR方法从嗜热古细菌Pyrococcusfuriosus的基因组DNA中扩增出胞外α 淀粉酶完整结构基因 ,插入表达载体pET2 8a中构建成质粒 pET amy(sig+) ,以质粒pET amy(sig +)为底物扩增出不含信号序列的α 淀粉酶成熟肽基因片断 ,获得质粒 pET amy(sig ) ,将重组质粒分别转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)。在T7启动子和lac操纵子控制下 ,通过IPTG的诱导在重组大肠杆菌细胞内分别表达出含信号肽和不含信号肽的融合蛋白。其中不含信号肽的融合蛋白具有与P .furio sus产生的胞外α 淀粉酶相似的酶学性质 :最适pH为 5 .0 ,最适温度约为 95℃ ,在 1 2 1℃下热处理 1h酶活仍能保持 50 %以上 ; 展开更多

关键词 “Pyrococcus furiosus” 嗜热α-淀粉酶 基因 PCR方法 融合表达 大肠杆菌细胞 酶学性质

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美国研制出快速检测食品中大肠杆菌的装置

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《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期95-95,共1页

美国研究人员成功研制出一种能快速检测食品中致病大肠杆菌的手持检测装置。这种装置使用方便且灵敏度高，消费者能借助它轻松了解食品安全性。利用传统方法检测食品中的大肠杆菌既耗时又费事，不仅需要大量样本，而且检测结果通常需要... 美国研究人员成功研制出一种能快速检测食品中致病大肠杆菌的手持检测装置。这种装置使用方便且灵敏度高，消费者能借助它轻松了解食品安全性。利用传统方法检测食品中的大肠杆菌既耗时又费事，不仅需要大量样本，而且检测结果通常需要等上24小时甚至更长时间。美国德雷克塞尔大学研究人员研制出的新装置，不仅10分钟内就可令致病大肠杆菌“原形毕露”，而且灵敏度很高，在浓度为每毫升4个大肠杆菌细胞的食品样本中仍能发现“目标”。 展开更多

关键词 大肠杆菌细胞 食品安全性 快速检测 检测装置 美国 研究人员 传统方法 检测结果 灵敏度 消费者

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产葡萄糖异构酶细胞的固定化 被引量：5

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作者 邓辉 陈晟 +1 位作者 陈坚 吴敬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期164-169,共6页

采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化... 采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化性质、动力学常数进行测定。结果表明:最佳的固定化条件为在高密度发酵液中添加0.6%硅藻土和5mmol/L Mg2+,经60℃热处理30min后,在壳聚糖终质量分数0.1‰、pH5.5、充分搅拌条件下絮凝,酶活回收率达98%;絮凝产物在戊二醛体积分数0.25%、pH6.5、轻微搅拌条件下交联3h,以未交联的样品作参照(100%),交联样品的酶活保留率达80%。相对于游离GIase,此条件下制备的固定化GIase的最适温度仍为80℃、最适pH值从10降低至9;在工业生产应用条件下,固定化GIase的初始酶活力达到356U/g,半衰期为61d,能够满足高果糖浆工业的生产要求。 展开更多

关键词 葡萄糖异构酶 重组大肠杆菌细胞 固定化 壳聚糖絮凝 戊二醛交联

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β_2肾上腺素受体基因的改造及在无细胞合成体系中的表达

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作者 王健 刘媛 +5 位作者 王玮 刘洋 韩正政 曲丽洁 杨立亭 王若敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第12期179-184,共6页

依据大肠杆菌密码子偏好性,设计合成β_2肾上腺素受体(β_2 adrenergic receptor,β_2AR)基因序列,应用大肠杆菌无细胞系统对其进行高效表达,经负载镍离子的顺磁颗粒Magne His?Ni-Particles纯化后,对受体蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯... 依据大肠杆菌密码子偏好性,设计合成β_2肾上腺素受体(β_2 adrenergic receptor,β_2AR)基因序列,应用大肠杆菌无细胞系统对其进行高效表达,经负载镍离子的顺磁颗粒Magne His?Ni-Particles纯化后,对受体蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和活性鉴定。结果表明:改造后的β_2AR基因密码子适应指数(codon adaptation index,CAI)为0.96,GC含量从58%降低到46.17%,更有利于该基因在大肠杆菌系统中的表达。表达体系中优化后的Mg^(2+)浓度为22 mmol/L,此时表达量为1 250μg/mL。SDS-PAGE分析显示,纯化蛋白在47 k Da左右出现清晰的特异性条带,与预期结果一致,纯度大于90%。直接酶受体分析检测结果显示,当纯化受体蛋白1∶500稀释包被时,该重组受体与盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的酶标记物结合的OD值分别为0.976、0.836和0.728,亲和活性依次降低。β_2AR蛋白在无细胞体系中的成功表达,为研发基于受体的β激动剂多残留快速检测技术提供了理论支持。 展开更多

关键词 Β2肾上腺素受体 密码子优化 大肠杆菌无细胞合成体系 表达 β激动剂检测

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基因文库的构建与使用 被引量：4

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作者 王德枝 《生物学教学》 北大核心 2010年第12期65-66,共2页

基因工程中，需要将某种生物的遗传信息贮存在可以长期保存的稳定的重组体中，通常是将目的基因用适当的工具酶连接到低等微生物如细菌的质粒、噬菌体等载体上，克隆得到重组DNA，由此构成该生物的基因文库。例如，带有人类所有基因克... 基因工程中，需要将某种生物的遗传信息贮存在可以长期保存的稳定的重组体中，通常是将目的基因用适当的工具酶连接到低等微生物如细菌的质粒、噬菌体等载体上，克隆得到重组DNA，由此构成该生物的基因文库。例如，带有人类所有基因克隆的大肠杆菌细胞构成了人类基因文库，可从这个文库中筛选、鉴定和研究人类的各种基因。 展开更多

关键词 基因文库 大肠杆菌细胞 基因克隆 重组DNA 微生物 基因工程 长期保存 信息贮存

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人可溶性APRIL基因的克隆、表达及生物学活性检测 被引量：5

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作者 戴双双 何凤田 +4 位作者 杨朝辉 彭家和 李蓉芬 张艳 陈麟凤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期61-64,共4页

为探索人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL)在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人sAPRIL基因 .经克隆测序后进行同源性比较 ,证实所克隆的基因即为sAPRIL .将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,... 为探索人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL)在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人sAPRIL基因 .经克隆测序后进行同源性比较 ,证实所克隆的基因即为sAPRIL .将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达 ,表达量达4 3 6 % .纯化蛋白后进行3 H TdR参入实验 ,表明sAPRIL有明显促进肿瘤的形成及肿瘤细胞的增殖与存活的作用 . 展开更多

关键词 增殖诱导配体 基因克隆 大肠杆菌表达 肿瘤细胞增殖

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天津工生所探索丁二酸合成新途径

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《石油化工》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1355-1355,共1页

中科院天津工业生物技术研究所结合理性遗传改造和进化代谢技术，构建高效生产丁二酸的微生物细胞工厂，将可再生的生物质资源高效转化为丁二酸，在丁二酸细胞工厂构建及高效合成机制解析上取得进展。该所构建出高效生产丁二酸的大肠杆... 中科院天津工业生物技术研究所结合理性遗传改造和进化代谢技术，构建高效生产丁二酸的微生物细胞工厂，将可再生的生物质资源高效转化为丁二酸，在丁二酸细胞工厂构建及高效合成机制解析上取得进展。该所构建出高效生产丁二酸的大肠杆菌细胞工厂HX024，并在此基础上，通过使用反向代谢工程技术，将丁二酸的糖酸转化率从1．12mol／mol提高到1．5mol／mol（理论最大转化率的88％），并在国际上提出了以NADPH酶为还原力的丁二酸合成新途径。 展开更多

关键词 合成机制 丁二酸 天津 工业生物技术 微生物细胞 最大转化率 大肠杆菌细胞 生物质资源

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医药其它

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第1期95-98,共4页

编码HIV病毒一l或HIV病毒一2蛋白质的DNA序列是新的.含上述新序列的表达载体质粒也是新的.这些新的表达载体质粒转化大肠杆菌细胞后能在其中表达.

关键词 表达载体质粒 大肠杆菌细胞 七叶树素 病毒培养 陈玉梅 融合蛋白 分子克隆 链霉菌 克隆载体 SEPHAROSE

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激素和活性多肽

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第4期47-48,共2页

关键词 大肠杆菌细胞 活性多肽 还原酶 折射体 生物学活性 融合蛋白 表达载体 转染细胞 异源表达 单加氧酶

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核酸及蛋白质合成、提取、纯化

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第9期20-21,共2页

关键词 蛋白质合成 大肠杆菌细胞 操纵子 同聚物 基因组文库 克隆基因 BamHI 操纵基因 重组蛋白 克隆载体

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DNA分析与扩增

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第10期25-29,共5页

关键词 DNA分析 基因克隆 酵母人工染色体 定序 编码序列 染色体步移 聚合酶 大肠杆菌细胞 缺失突变株 RNA

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激素和活性多肽

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第4期82-83,共2页

关键词 活性多肽 胺化作用 降钙素基因 大肠杆菌细胞 双体 真空冷冻干燥 血浆钙 高钙血症 六聚体 生物学活性

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激素和活性多肽

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第3期83-84,共2页

关键词 活性多肽 促生长因子 深层通气发酵 穿梭载体 大肠杆菌细胞 条件培养基 转化细胞 受体活性 合成基因 游离细胞

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食品上的应用

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第4期98-104,共7页

911326 纤维素一步转化为果糖[英]/Storey,K.B,…//Appl.Biochem.Biotechnol.-1990,23(2).-139～154[译自DBA,1990,9(17),90-10079]将纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和葡萄糖异构酶(GI)共固定在聚氨酯泡沫(Hypol FHP2002)载体上使纤维素一步... 911326 纤维素一步转化为果糖[英]/Storey,K.B,…//Appl.Biochem.Biotechnol.-1990,23(2).-139～154[译自DBA,1990,9(17),90-10079]将纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和葡萄糖异构酶(GI)共固定在聚氨酯泡沫(Hypol FHP2002)载体上使纤维素一步转化为果糖.在pH值低达6.8时固定化GI仍独自有活性.镁离子和果糖的Km值分别增加4.5倍和62%.固定化GI的连续水解半衰期约160hr。 展开更多

关键词 Β-葡萄糖苷酶 聚氨酯泡沫 连续水解 酿酒酵母 细胞蛋白 后保 基因克隆 自主复制序列 重组体 大肠杆菌细胞

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农业其他

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第9期91-95,共5页

902500 经免疫电子显微镜接高压冰冻、冰冻取代和低温包埋研究外源蛋白在转基因植株中的原位定位[英]/Hippe,S.…//Eur.J.Cell Biol.-1989,50(1).

关键词 转基因动物 基因克隆 外源蛋白 启动子片段 免疫电子显微镜 低温包埋 外源基因 植物基因 大肠杆菌细胞 嵌合基因

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基因工程

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第10期29-41,共13页

902560 pIP501从球菌属 Enterococcus faccalis 向嗜盐片球菌的接合转移[英]/Toda,A.…//Agric.Biol.Chem.-1989,53(12).-3317～3318[译自 DBA,1990,9(6),90-03013]实现了20MDa 质粒 pIO501(表达大环内酯-Lincodamide-蜜柑霉素 B

关键词 嗜盐片球菌 蜜柑霉素 逆病毒载体 大肠杆菌细胞 多克隆位点 噬菌体文库 球菌属 DNA 启动子 基因组分析

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抗生素

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第3期73-77,共5页

910854 新的抗生素-AK-165-3结构中胍基的测定[德]/Ivanova,V.…// Acta Microbiol.Bulg.-1990,25.-16～23[译自DBA,1990,9(15),90-08713]从土壤中分离出吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)111-81,该菌培养时可大量生产抗生素.培... 910854 新的抗生素-AK-165-3结构中胍基的测定[德]/Ivanova,V.…// Acta Microbiol.Bulg.-1990,25.-16～23[译自DBA,1990,9(15),90-08713]从土壤中分离出吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)111-81,该菌培养时可大量生产抗生素.培养基提取物含7种成分,均具抗菌和杀真菌活性,其主要成分为抗生素-AK-165-3。 展开更多

关键词 胍基 吸水链霉菌 提取物 表异构酶 大量生产 金霉素链霉菌 发酵液 大肠杆菌细胞 洗脱物 生物合成基因

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其它药剂

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第9期105-111,共7页

892939 用重组酵母生产人表皮生长因子的动力学[会,英]/Coppella,S.J.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1988,196 Meet.-MBTD84[译自 DBA,1989,8(3),89-01372]在酿酒酵母(Saccharomyces cerevi-siae)

关键词 SACCHAROMYCES 神经白细胞素 人表皮生长因子 基因克隆 大肠杆菌细胞 细胞生长 实验生物学 融合蛋白 化学限定培养基 RNA

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抗生素和干扰素

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第2期39-41,共3页

关键词 抗生素生产 抗菌活性 酚基转移酶 丙氨酸脱氢酶 阴离子交换层析 新型抗生素 菌株培养滤液 发酵罐 大肠杆菌细胞 头霉素

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