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大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究
被引量：
2
1
作者
王秋颖
李宁
向本琼
《北京师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期647-652,共6页
以大肠杆菌碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）高活性突变株（L138PG233S）为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析.结果发现...
以大肠杆菌碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）高活性突变株（L138PG233S）为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析.结果发现：与亲本酶相比,突变体酶的酶活性降低了18%-85%,Vmax值降低,Km增加,内源荧光发射峰λmax增大等.与亲本酶相同,Zn^2＋,Mn^2＋,Mg^2＋仍是它们的激活剂,Na3PO4是它们的抑制剂;这些实验结果说明突变体酶活性的降低直接与其构象变化有关,被替换的氨基酸在维持碱性磷酸酶的结构和功能方面具有特定的作用.
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关键词
大肠杆菌碱性磷酸酶
重叠延伸PCR
突变体
特性分析
荧光光谱
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职称材料
乙醇对大肠杆菌碱性磷酸酶活性与构象的影响
被引量：
1
2
作者
戴伟龙
井健
《北京师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期34-37,共4页
常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶(EAP)活性影响状态作用机制进行了研究.结果表明,EAP酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对EAP有明显的失活作用,IC50为13%.关于乙醇对EAP失活作用机制的研究表明,乙醇对EAP的失...
常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶(EAP)活性影响状态作用机制进行了研究.结果表明,EAP酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对EAP有明显的失活作用,IC50为13%.关于乙醇对EAP失活作用机制的研究表明,乙醇对EAP的失活作用是以非竞争性机制模式进行的.应用荧光光谱研究EAP经乙醇微扰后的分子构象变化,发现EAP的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,说明酶蛋白分子中的荧光发色基团所处微环境已经发生变化,乙醇对EAP分子构象存在显著影响.
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关键词
大肠杆菌碱性磷酸酶
乙醇
酶促活性
构象
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职称材料
大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究
被引量：
5
3
作者
高明春
李雪萌
+1 位作者
张润祥
王君伟
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期48-53,共6页
使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM...
使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM（DE3）pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。
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关键词
大肠杆菌碱性磷酸酶
ATCC25922
表达纯化
活性鉴定
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职称材料
题名
大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究
被引量：
2
1
作者
王秋颖
李宁
向本琼
机构
河北旅游职业学院
北京师范大学生命科学学院
出处
《北京师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期647-652,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30370333)
国家基础科学人才培养基金资助项目
文摘
以大肠杆菌碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）高活性突变株（L138PG233S）为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析.结果发现：与亲本酶相比,突变体酶的酶活性降低了18%-85%,Vmax值降低,Km增加,内源荧光发射峰λmax增大等.与亲本酶相同,Zn^2＋,Mn^2＋,Mg^2＋仍是它们的激活剂,Na3PO4是它们的抑制剂;这些实验结果说明突变体酶活性的降低直接与其构象变化有关,被替换的氨基酸在维持碱性磷酸酶的结构和功能方面具有特定的作用.
关键词
大肠杆菌碱性磷酸酶
重叠延伸PCR
突变体
特性分析
荧光光谱
Keywords
alkaline phosphatase in E. coli
Over-lap extension PCR
mutant
property
fluoresence spectrum
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
乙醇对大肠杆菌碱性磷酸酶活性与构象的影响
被引量：
1
2
作者
戴伟龙
井健
机构
北京师范大学生命科学学院
出处
《北京师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期34-37,共4页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目
文摘
常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶(EAP)活性影响状态作用机制进行了研究.结果表明,EAP酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对EAP有明显的失活作用,IC50为13%.关于乙醇对EAP失活作用机制的研究表明,乙醇对EAP的失活作用是以非竞争性机制模式进行的.应用荧光光谱研究EAP经乙醇微扰后的分子构象变化,发现EAP的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,说明酶蛋白分子中的荧光发色基团所处微环境已经发生变化,乙醇对EAP分子构象存在显著影响.
关键词
大肠杆菌碱性磷酸酶
乙醇
酶促活性
构象
Keywords
Escherichia coli alkaline phosphatase（EAP） ethanol enzymatic activity conformation
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究
被引量：
5
3
作者
高明春
李雪萌
张润祥
王君伟
机构
东北农业大学动物医学学院
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期48-53,共6页
基金
国家科技支撑计划(2007BAD60B02)
黑龙江省科技计划(GAO06B202)
文摘
使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM（DE3）pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。
关键词
大肠杆菌碱性磷酸酶
ATCC25922
表达纯化
活性鉴定
Keywords
Escherichia coli alkaline phosphatase （EAP）
ATCC 25922
prokaryotic expression and purification
enzymatic activity analysis
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究
王秋颖
李宁
向本琼
《北京师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
乙醇对大肠杆菌碱性磷酸酶活性与构象的影响
戴伟龙
井健
《北京师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究
高明春
李雪萌
张润祥
王君伟
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
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职称材料
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