大肠杆菌热敏感肠毒素的检测与制备 被引量：2

1

作者 张永红 崔德凤 +4 位作者 阮文科 李焕荣 马允英 路苹 于同泉 《北京农学院学报》 2004年第3期22-26,共5页

为探索猪源大肠杆菌热敏感肠毒素的简易检测方法和纯化方法,拟采用兔回肠结扎试验、兔皮肤蓝斑试验和平板免疫溶血试验比较检测热敏感肠毒素的方法。初步试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性... 为探索猪源大肠杆菌热敏感肠毒素的简易检测方法和纯化方法,拟采用兔回肠结扎试验、兔皮肤蓝斑试验和平板免疫溶血试验比较检测热敏感肠毒素的方法。初步试验表明:平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素,并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;采用SephadexG 100纯化热敏感肠毒素LT并采用SDS PAGE电泳检测蛋白纯度,表明该方法可以除去杂蛋白,肠毒素蛋白分子量为12 展开更多

关键词 猪 大肠杆菌热敏感肠毒素 纯化 蛋白 外毒素

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产热敏肠毒素大肠杆菌小鼠攻毒模型的建立 被引量：9

2

作者 刘小宝 孔春梅 +2 位作者 刘彦慈 穆祥 许剑琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期75-76,共2页

关键词 产肠毒素大肠杆菌 热敏感 模型 攻毒 小鼠 热稳定肠毒素 体外生长 ETEC

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热不稳定大肠杆菌肠毒素B亚单位免疫调节功能的实验研究 被引量：5

3

作者 王静 郑瑾 +4 位作者 杨筱凤 孔令洪 来宝长 司履生 王一理 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-114,共3页

目的 :探讨大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LTB)的免疫调节功能及其可能的机制。方法 :用SephacrylS 10 0凝胶柱层析纯化LTB蛋白。选用BALB/c小鼠 ,以鸡溶菌酶 (HEL)为抗原 ,经鼻黏膜单独免疫 ,或以不同剂量的LTB为佐剂与HEL共免疫。用... 目的 :探讨大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LTB)的免疫调节功能及其可能的机制。方法 :用SephacrylS 10 0凝胶柱层析纯化LTB蛋白。选用BALB/c小鼠 ,以鸡溶菌酶 (HEL)为抗原 ,经鼻黏膜单独免疫 ,或以不同剂量的LTB为佐剂与HEL共免疫。用ELISA法检测血清和肠分泌液中HEL特异性抗体的水平。用3 H TdR掺入法 ,体外测定LTB蛋白对刀豆蛋白A(ConA)及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应的影响。结果 :HEL单独免疫组血清中仅有弱的抗HELIgG ,未检测到抗HELIgA ,且其肠分泌液中亦未见HEL特异性IgA抗体。但加用LTB佐剂的 3个组 ,其血清中抗HELIgG、IgA的水平及肠分泌液中抗HELIgA的水平均显著高于HEL单独免疫组 (P <0 .0 0 1)。体外实验显示 ,LTB可明显抑制ConA及同种异体抗原介导的淋巴细胞增殖反应。结论 :我们制备的LTB蛋白对免疫系统具有双向的调节功能 ,既可作为有效的黏膜佐剂 ,辅佐外来抗原刺激机体产生黏膜免疫应答 ,又具免疫抑制效应 ,有效地抑制淋巴细胞活化。LTB免疫调节功能的发挥 。 展开更多

关键词 大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 LTB 免疫调节 黏膜免疫佐剂 鸡溶菌酶

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抗大肠杆菌耐热肠毒素中药方剂的筛选 被引量：3

4

作者 孔春梅 刘小宝 +2 位作者 宋洁 穆祥 许剑琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期64-66,共3页

关键词 产肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素 中药方剂 筛选 热稳定肠毒素 鸟苷酸环化酶 幼畜腹泻 微循环障碍

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猪源大肠杆菌热稳定肠毒素的检测 被引量：1

5

作者 崔德凤 张永红 +2 位作者 李焕荣 孙英健 田洁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期17-20,共4页

关键词 猪 热稳定肠毒素 肠毒素型大肠杆菌 腹泻 菌毛

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大肠杆菌热不稳定肠毒素无毒突变体LTR72基因重组质粒的构建

6

作者 葛艳 尤永进 +2 位作者 徐泉兴 陈波 饶忠 《上海农业学报》 CSCD 2003年第4期15-17,共3页

用PCR方法扩增大肠杆菌LT基因 ,将LT基因重组入pET32a质粒载体 ,对构建的重组质粒pET LT进行酶切、核苷酸序列分析 ,结果表明 ,插入片段LT的核苷酸序列与预期一致 ,且阅读框正确。并在影响LT毒性的关键氨基酸位点 ,用PCR方法引入点突变 ... 用PCR方法扩增大肠杆菌LT基因 ,将LT基因重组入pET32a质粒载体 ,对构建的重组质粒pET LT进行酶切、核苷酸序列分析 ,结果表明 ,插入片段LT的核苷酸序列与预期一致 ,且阅读框正确。并在影响LT毒性的关键氨基酸位点 ,用PCR方法引入点突变 (丙氨酸→精氨酸 ) ,成功构建了含有LTR72突变体基因的重组质粒pET LTR72。 展开更多

关键词 大肠杆菌 热不稳定肠毒素 突变体LTR72 基因重组 质粒 免疫原性 佐剂功能 核苷酸序列

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贵州羔羊致病性大肠杆菌血清型和热稳定性肠毒素的研究 被引量：2

7

作者 谭诗文 艾玉萍 +2 位作者 冉懋韬 肖耀南 范泽明 《贵州畜牧兽医》 2002年第6期4-5,共2页

从腹泻羔羊中分离到大肠杆菌80株,对80株菌株做血清型鉴定,55株为埃希氏大肠杆菌。分属为O119、O34、O8、O78O101、O96种血清型,其中O119、O24为主要“O”类型。每个血清型筛选出的CH9612、SC9938、CH986、CH9817、LL9934、GL988株菌6... 从腹泻羔羊中分离到大肠杆菌80株,对80株菌株做血清型鉴定,55株为埃希氏大肠杆菌。分属为O119、O34、O8、O78O101、O96种血清型,其中O119、O24为主要“O”类型。每个血清型筛选出的CH9612、SC9938、CH986、CH9817、LL9934、GL988株菌6株。用乳鼠胃内投服试验,测定出6株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性(ST)。 展开更多

关键词 贵州 羔羊 致病性大肠杆菌 血清型 热稳定性肠毒素

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大肠杆菌肠毒素二价苗构建的研究进展(综述) 被引量：1

8

作者 王莹 李震 +1 位作者 周智爱 曹祥荣 《上海农业学报》 CSCD 2000年第3期29-31,共3页

产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)是引起幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原菌之一。肠毒素是其主要的毒力因子 ,包括耐热性肠毒素 (ST)和热敏感肠毒素 (L T)。STI基因和 L TB基因融合后产生的融合蛋白不仅增强了 STI 的免疫原性 ,而且降低了... 产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC)是引起幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原菌之一。肠毒素是其主要的毒力因子 ,包括耐热性肠毒素 (ST)和热敏感肠毒素 (L T)。STI基因和 L TB基因融合后产生的融合蛋白不仅增强了 STI 的免疫原性 ,而且降低了 STI 的生物毒性 ,这就给抗幼畜腹泻的基因工程亚单位苗开发带来了新的希望。 展开更多

关键词 耐热性肠毒素 热敏感肠毒素 基因工程亚单位二价苗 幼畜腹泻 大肠杆菌毒素

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利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株 被引量：3

9

作者 檀克勤 马现永 +2 位作者 崔艺燕 田志梅 邓盾 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期666-675,共10页

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88的热不稳定性肠毒素(heat-labile toxin,LT)基因进行无痕敲除并获得K88 LT-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列,并... 本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88的热不稳定性肠毒素(heat-labile toxin,LT)基因进行无痕敲除并获得K88 LT-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列,并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段;将供体片段转化至ETEC K88,同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统,对LT基因进行敲除;通过PCR验证获得了K88 LT-缺陷菌株,并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示,λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段,CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除,最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明,K88 LT-缺陷菌株的溶血能力丧失,并且生长速度比野生型菌株减缓,LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌(ETEC) CRISPR/Cas9 λ-Red同源重组系统 热不稳定性肠毒素

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貉产肠毒素型大肠杆菌的分离鉴定

10

作者 李丽云 东贤 《今日畜牧兽医》 2011年第S1期53-56,共4页

致病性大肠杆菌能产生一种或多种肠毒素,称为毒素型大肠杆菌(ETEC)。ETEC是导致人畜腹泻的主要致病菌,借助于所产生的菌毛抗原黏附于动物小肠粘膜定居并产生作用于肠壁的外毒素称为肠毒素。主要有两类肠毒素:一类是不耐热性肠毒素,即热... 致病性大肠杆菌能产生一种或多种肠毒素,称为毒素型大肠杆菌(ETEC)。ETEC是导致人畜腹泻的主要致病菌,借助于所产生的菌毛抗原黏附于动物小肠粘膜定居并产生作用于肠壁的外毒素称为肠毒素。主要有两类肠毒素:一类是不耐热性肠毒素,即热敏感性肠毒素(LT);另一类是耐热性肠毒素,即热稳定性肠毒素(ST)。仔猪的黄、白痢。 展开更多

关键词 产肠毒素型大肠杆菌 琼脂培养基 致泻性大肠埃希氏菌 小肠粘膜 培养特性 热敏感肠毒素 甲基红试验 分离株 氟苯尼考 药敏试验

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LT-B转基因烟草植株的建立 被引量：4

11

作者 刘红莉 雷霆 +6 位作者 张铮 郑瑾 来宝长 孔令洪 王喆之 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期425-429,共5页

目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启... 目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果　经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论　建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 转基因烟草 植物疫苗 根瘤农杆菌

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纯化ETEC K88菌毛特异性卵黄抗体的加工贮藏及体外抗粘附性研究 被引量：5

12

作者 程学慧 王劼 +2 位作者 蒋思文 彭健 詹志春 《饲料研究》 CAS 2005年第4期3-5,共3页

分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC) K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均... 分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC) K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均为1∶1280;卵黄抗体粉在90℃干热条件下处理5min后抗体效价下降50%,而90℃湿热条件下处理5min抗体效价无明显变化,但处理15min后下降75%;经过1h的干热或湿热处理,抗体均基本失活;4℃和常温下放置半年对卵黄抗体粉活性无影响;体外抑制粘附试验表明,抗K88卵黄抗体能抑制K88对肠上皮细胞的粘附。 展开更多

关键词 卵黄抗体 ETEC 特异性 K88菌毛 纯化 粘附性 间接ELISA法 抗体效价 贮藏 喷雾干燥 肠上皮细胞 湿热条件 抗体滴度 抗体活性 粘附试验 试验结果 加工前后 湿热处理 产肠毒素 大肠杆菌 体外抑制 菌毛抗原 产蛋鸡 毛蛋白 下降

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引起羊腹泻的传染病的诊断 被引量：2

13

作者 周洪 《养殖技术顾问》 2014年第10期180-180,共1页

1大肠杆菌病 大肠杆菌可引起羔羊病和败血症两种类型。羔羊病多在出生后48小时即可出现兽医临床症状,大多因母羊乳房被污染,羔羊饮奶被感染的结果。肠杆菌能分泌热稳定肠毒素和K99吸着因子,肠上皮细胞在外毒素作用下迅速被破坏,细菌大... 1大肠杆菌病 大肠杆菌可引起羔羊病和败血症两种类型。羔羊病多在出生后48小时即可出现兽医临床症状,大多因母羊乳房被污染,羔羊饮奶被感染的结果。肠杆菌能分泌热稳定肠毒素和K99吸着因子,肠上皮细胞在外毒素作用下迅速被破坏,细菌大量繁殖,可引起羔羊迅速死亡,或短期内表现腹痛,疲乏无力。 展开更多

关键词 羔羊病 传染病 大肠杆菌病 诊断 腹泻 热稳定肠毒素 肠上皮细胞 临床症状

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疫苗

14

《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第2期67-72,共6页

960592 脑膜炎奈瑟氏球菌5C外膜蛋白的克隆和表达[英]/Guillen, G.…∥Acta Biotechnol.-1995,15(1).-97～106[译自DBA,1995,14(12),95-06948]

关键词 融合蛋白 脑膜炎奈瑟氏球菌 结核分枝杆菌 内皮细胞 抗原决定簇 髓过氧物酶 毒素大肠杆菌 大肠杆菌热稳定肠毒素 重组杆状病毒 口服疫苗

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