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大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63毒性检测及佐剂效果研究 被引量:6
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作者 白雪飞 郭静玉 +1 位作者 雷万军 段广才 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期69-71,共3页
目的对已构建的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63进行表达、纯化、毒性检测,并对其佐剂活性进行研究。方法采用已知的最佳诱导表达条件进行诱导表达,诱导表达产物经亲和层析、纯化浓缩后,进行毒性检测。将纯化后的mLT63联合幽门螺... 目的对已构建的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63进行表达、纯化、毒性检测,并对其佐剂活性进行研究。方法采用已知的最佳诱导表达条件进行诱导表达,诱导表达产物经亲和层析、纯化浓缩后,进行毒性检测。将纯化后的mLT63联合幽门螺旋杆菌(Hp)亚单位疫苗UreB、Omp11经口途径免疫BALB/c小鼠,免疫后取血清、胃组织提取液、粪便提取液进行ELISA试验,检测其中的特异性抗体水平,将结果进行统计分析。结果经家兔回肠袢毒性试验验证本室构建大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63没有毒性,mLT63联合Hp亚单位疫苗UreB、Omp11免疫小鼠实验证实mLT63具有佐剂活性。结论本室构建、表达的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63无毒,并具有免疫佐剂的活性。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 突变体 佐剂
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大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究 被引量:6
2
作者 唐思静 刘惠莉 +1 位作者 马勋 赵艳敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期697-701,共5页
为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获... 为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 免疫原性 ADP-核酸转移酶
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大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的表达及活性研究 被引量:3
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作者 赵艳敏 刘惠莉 +2 位作者 邢继兰 潘洁 曹祥荣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期30-34,52,共6页
利用重叠延伸PCR扩增技术,体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段,酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换... 利用重叠延伸PCR扩增技术,体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段,酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换。诱导表达产物用SDS-PAGE检测,野生型LT蛋白及3个突变体均表达出约33.0Ku和13.0Ku的2个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量大小相吻合;Westernblot检测,2个蛋白带均可与抗His抗体发生特异性免疫反应,而13.0Ku的蛋白带还可与抗霍乱毒素(CT)抗体发生免疫学反应。ADP-核糖转移酶活性试验分析,各突变体蛋白酶活性均低于野生型LT蛋白,但仍保留一些酶活性。Patent-mouse毒性试验检测,LTK63、LTR72和LTG192突变体蛋白的毒性均有不同程度降低,LTK63毒性降低最显著,LTG192蛋白毒性相对较大。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 突变体 表达
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大肠杆菌不耐热肠毒素突变体作为佐剂的研究进展 被引量:4
4
作者 唐思静 吕转平 +2 位作者 马博 王艳萍 苏晓月 《上海畜牧兽医通讯》 2013年第5期16-18,共3页
黏膜免疫是防止病原菌侵入黏膜表面引起疾病的最有效的途径,通过黏膜免疫不仅能产生全身免疫反应,还能产生局部的黏膜免疫反应,该免疫途径无痛苦且易操作,同时减少疾病传播的风险.但大多数抗原的黏膜免疫原性都很差,通过口服或滴鼻免疫... 黏膜免疫是防止病原菌侵入黏膜表面引起疾病的最有效的途径,通过黏膜免疫不仅能产生全身免疫反应,还能产生局部的黏膜免疫反应,该免疫途径无痛苦且易操作,同时减少疾病传播的风险.但大多数抗原的黏膜免疫原性都很差,通过口服或滴鼻免疫可溶性蛋白通常引起特异性免疫耐受,这些使得在黏膜免疫中使用恰当的佐剂成为必须. 不耐热肠毒素(Heat— labile enterotoxin,LT)是由肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia col i,ETEC)分泌的一种外毒素,既有较强的免疫原性又有较强的黏膜佐剂效应.但由于强的毒性,限制了它的广泛应用,因此通过构建各种突变体使之具备优良的佐剂活性且没有显著的毒性是当前研究的主要目标.本文主要从突变体的酶活性、毒性以及佐剂活性进行综述,为黏膜疫苗的研制打下一定基础. 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 佐剂效应 突变体 黏膜免疫 肠毒素大肠杆菌 免疫反应 免疫原性 疾病传播
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建 被引量:1
5
作者 全胜 严杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期14-15,20,共3页
从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨... 从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %~ 99.71%和 97.5 8%~ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 基因表达系统 构建
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在鸭体内的吸收代谢及组织分布
6
作者 周晓丽 王一成 +3 位作者 姜平 袁秀芳 李军星 杜晓莉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期104-109,共6页
研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量... 研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量;连续3次肌注rLTB后,观察临床症状和剖检病理变化,并采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑制备组织切片,HE染色观察组织病理学变化,免疫酶组织化学染色观察rLTB在各脏器内的分布及含量变化。结果表明:鸭血清中的rLTB含量变化及维持时间与rLTB注射剂量呈正相关。1 mg/kg注射组2 h达到峰值,维持至6 h开始下降,24 h后基本检测不到;50,100 mg/kg注射组分别于2 h和1 h达到峰值,并均维持至12 h才开始下降,48 h后基本检测不到。HE染色切片显示50 mg/kg注射组肝细胞轻度浊肿变性,肺脏轻微炎症;100mg/kg注射组肝细胞浊肿变性明显、肺脏重度炎症、脑组织出现局灶性坏死。免疫组化染色结果显示,在被检脏器中均检出rLTB,以大脑含量最高,脾脏和肝脏次之,心脏和肺脏检出量低。rLTB大剂量肌肉注射可引起鸭一定的组织学病变,对鸭的安全使用剂量应不超过50 mg/kg。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 吸收代谢 组织分布
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位与产气荚膜梭菌毒素融合蛋白的免疫原性
7
作者 曾瑾 马臣杰 +1 位作者 邓光存 刘晓明 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第11期216-218,共3页
梭菌毒素作为产气荚膜梭菌的主要致病因子可引起家畜的多种疾病,其中β1毒素和β2毒素是由C型菌产生的2种引起动物坏死性肠炎的主要致病因子。基因工程重组毒素蛋白已作为潜在候选疫苗用于预防该菌所引起的多种传染性疾病,大肠杆菌不耐... 梭菌毒素作为产气荚膜梭菌的主要致病因子可引起家畜的多种疾病,其中β1毒素和β2毒素是由C型菌产生的2种引起动物坏死性肠炎的主要致病因子。基因工程重组毒素蛋白已作为潜在候选疫苗用于预防该菌所引起的多种传染性疾病,大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)是一种常用的黏膜免疫佐剂。本研究将ltb-cpb2-cpb1及ltb-cpa融合基因进行IPTG的诱导表达,制备了包涵体粗提物,并对小白鼠进行免疫攻毒试验及其免疫后抗原免疫保护期的免疫原性的研究。结果显示,经LTB-CPB2B1及LTB-CPA重组蛋白免疫后的小白鼠在第28、第56天时用产气荚膜梭菌强毒攻击,可获得很好的保护,产气荚膜梭菌毒素与LTB融合基因重组菌株能够有效刺激免疫小白鼠产生特异性抗体。说明该重组菌株可以作为预防产气荚膜梭菌所引起疾病的候选菌株。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 毒素 大肠杆菌不耐热肠毒素 亚单位 免疫原性 疫苗保护周期
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基表达系统的研究进展 被引量:2
8
作者 刘汉清 武力 +2 位作者 李美娣 王甜 苏胖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期333-338,共6页
随着分子生物学的快速发展,各种工程菌株的遗传操作体系逐渐完善,蛋白质、酶和多肽制剂等产品的生产制备在满足科研需要的同时,也为生物制剂市场带来了巨大的经济效益[1]。原核和真核表达系统是使用最广泛和研究最成熟的表达系统,利用... 随着分子生物学的快速发展,各种工程菌株的遗传操作体系逐渐完善,蛋白质、酶和多肽制剂等产品的生产制备在满足科研需要的同时,也为生物制剂市场带来了巨大的经济效益[1]。原核和真核表达系统是使用最广泛和研究最成熟的表达系统,利用原核或真核表达系统获取各种发酵产物开始进入工业化生产阶段[2]。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 生物制剂 表达系统 B亚基 生产制备 遗传操作 分子生物学 工程菌株
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的纯化及生物学活性鉴定 被引量:3
9
作者 田文标 邹全明 +4 位作者 吴超 张卫军 杨珺 冉向阳 王缚鲲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期131-134,共4页
目的 纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法 重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ... 目的 纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法 重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ,然后采用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,并选用ELISA、动物实验和Western blotting实验对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 得到纯度达 97 85 %的rLTB ,复性的rLTB经检测具有良好的生物学活性。结论 得到纯度较高、生物学活性较好的rLTB 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 B亚单位 纯化 生物学活性
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平板免疫溶血试验快速检测大肠杆菌不耐热肠毒素 被引量:7
10
作者 冉雪琴 王嘉福 +1 位作者 王宇波 叶在荣 《贵州农业科学》 CAS 1995年第2期7-10,共4页
琼脂糖为介质,进行固相平板免疫溶血试验测定毒素源性大肠杆菌不耐热肠毒素(LT),同时与ELISA,兔肠结扎试验测定LT进行了比较。结果表明,平板免疫溶血试验特异性强,标准的ETEC发生溶血,非ETEC不发生溶血,灵敏... 琼脂糖为介质,进行固相平板免疫溶血试验测定毒素源性大肠杆菌不耐热肠毒素(LT),同时与ELISA,兔肠结扎试验测定LT进行了比较。结果表明,平板免疫溶血试验特异性强,标准的ETEC发生溶血,非ETEC不发生溶血,灵敏度与ELISA相似,比肠结扎试验敏感8倍左右;对151份样品的检测说明平板免疫溶血试验与ELISA具有很高的符合性。此外对不同来源的红血球用于测定LT进行了研究。 展开更多
关键词 不耐热肠毒素 ETEC 免疫溶血 大肠杆菌
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究 被引量:4
11
作者 田文标 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期115-118,共4页
目的 研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法 先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行... 目的 研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法 先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行改良优化。结果 经试验确定了rLTB基因工程菌发酵罐培养的各项条件的最佳组合 ,优化后工程菌菌体产量平均可达 40 5g/L ,目的蛋白的表达率平均为 3 0 6%。结论 建立了稳定、高效的工程菌发酵工艺。 展开更多
关键词 毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素B亚单位 发酵
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在毕赤酵母中的表达及鉴定 被引量:7
12
作者 陈明 李超 +7 位作者 王瑞 王秋华 黄婷 雷爱莹 陈福艳 甘西 余晓丽 梁万文 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期2093-2097,共5页
为了在毕赤酵母中高效表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及研制具有粘膜免疫佐剂活性的无毒重组LTB,采用PCR方法从产毒型大肠杆菌H44815菌株扩增获得LTB完整编码区DNA,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K的分泌信号肽基因下游,构建真核... 为了在毕赤酵母中高效表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及研制具有粘膜免疫佐剂活性的无毒重组LTB,采用PCR方法从产毒型大肠杆菌H44815菌株扩增获得LTB完整编码区DNA,将其克隆到酵母表达载体pPIC9K的分泌信号肽基因下游,构建真核表达载体pPIC9K-LTB;重组质粒经核苷酸测序确认并线性化后电转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选转化子,并以小量诱导表达筛选高效表达工程菌株,最后Western blotting分析甲醇诱导上清中的LTB及采用亲和层析和HiTrap Desalting预装柱脱盐纯化蛋白。结果表明,PCR克隆获得的LTB编码DNA序列与GenBank登录DNA序列完全一致,定向插入pPIC9K载体,可获得表达LTB的酵母分泌表达载体pPIC9K-LTB;电转化后的重组酵母菌KM71诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,发现甲醇诱导的培养基上清中含LTB,且具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 大肠杆菌肠毒素B亚单位(LTB) 基因表达 毕赤酵母 粘膜免疫佐剂
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合表达载体的构建及应用 被引量:2
13
作者 鲁东水 毛旭虎 +1 位作者 吴超 邹全明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第14期1275-1277,共3页
目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的融合表达载体。方法 PCR扩增LTB基因 ,并在其 3′端去掉终止密码子 ,引入编码TAPI接头 ,通过EcoRⅠ和EcoRⅤ酶切位点重组于PinpointXa Ⅰ载体上 ,将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位与之融合 ,转化E .c... 目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的融合表达载体。方法 PCR扩增LTB基因 ,并在其 3′端去掉终止密码子 ,引入编码TAPI接头 ,通过EcoRⅠ和EcoRⅤ酶切位点重组于PinpointXa Ⅰ载体上 ,将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位与之融合 ,转化E .coliJM10 9,SDS PAGE及Westernblotting分析其表达。结果 成功构建了LTB融合表达质粒 ,并获得了幽门螺杆菌尿素酶B亚单位与之融合表达。结论 LTB融合表达载体的成功构建为研究分子内佐剂疫苗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 不耐热肠毒素B亚单位 融合表达 载体 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位
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大肠杆菌不耐热肠毒素及其分子生物学 被引量:2
14
作者 翁庆北 王嘉福 《贵州师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2001年第4期92-96,共5页
产肠毒素大肠杆菌是与腹泻相关的一类大肠杆菌 ,肠毒素可分为耐热肠毒素和不耐热肠毒素。文章从肠毒素免疫性与作用机理 ,不耐热肠毒素的基因质粒、定位、亚基因克隆及表达 。
关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 基因质粒 分子生物学 免疫性 作用机理 基因克隆 腹泻
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大肠杆菌不耐热肠毒素A、B亚单位基因双价植物表达载体的构建 被引量:2
15
作者 祝建波 史芳芳 周鹏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期140-144,162,共6页
不耐热肠毒素LT是肠产毒性大肠杆菌(EnterotoxigenicE.coli,ETEC)分泌的一种热不稳定性肠毒素,由A、B两种亚单位组成的AB5型杂六聚体蛋白,是目前人们发现的最强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂之一。本研究利用基因工程技术,从强致病菌... 不耐热肠毒素LT是肠产毒性大肠杆菌(EnterotoxigenicE.coli,ETEC)分泌的一种热不稳定性肠毒素,由A、B两种亚单位组成的AB5型杂六聚体蛋白,是目前人们发现的最强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂之一。本研究利用基因工程技术,从强致病菌株K88ac中,分别克隆了LTA和LTB基因,并利用高效植物表达载体pBI121、pBLG和pCAMBIA2300成功构建了带有内质网滞留信号RDEL/KDEL不耐热肠毒素A、B亚单位基因双价植物表达载体pCAMBIA2300-LTA-LTB。为研究LT全毒素在植物中的正确组装及进一步构建带有保护性抗原类全毒素嵌合植物疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热毒素LT 植物疫苗 载体构建
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产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因克隆及表达 被引量:1
16
作者 王万胜 方利君 +3 位作者 王顺林 蒋惠秋 李宏年 顾健人 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第1期31-34,共4页
目的研究克隆并表达产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位。方法合成2条引物用PCR法扩增包括产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素(ETEC,LT)B亚单位基因编码区及起始密码子上游793bp的DNA片段。PCR产物克隆入pBlue... 目的研究克隆并表达产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位。方法合成2条引物用PCR法扩增包括产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素(ETEC,LT)B亚单位基因编码区及起始密码子上游793bp的DNA片段。PCR产物克隆入pBlueScriptSK(-)并转化进入XL-Blue工程菌中。结果经ELISA,Western-blot测定共获得22株菌表达LT-B,表达水平比H10407高2~3倍。克隆的基因经测序证实有一个碱基置换,但无氨基酸序列改变。结论本工作成功表达了产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位。 展开更多
关键词 大肠杆菌 肠毒素 聚合酶链反应 基因工程 ETEC
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大肠杆菌不耐热肠毒素的分子生物学及粘膜免疫佐剂效应 被引量:7
17
作者 王星 覃宗华 刘定发 《广东畜牧兽医科技》 2005年第4期18-21,共4页
大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-Labile,LT)是由产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)分泌的一种外毒素。LT既有较强的免疫原性又有较强的粘膜佐剂效应,其毒力较霍乱毒素(choleratoxin,CT)小而被认为是替代CT的最有潜力... 大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-Labile,LT)是由产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)分泌的一种外毒素。LT既有较强的免疫原性又有较强的粘膜佐剂效应,其毒力较霍乱毒素(choleratoxin,CT)小而被认为是替代CT的最有潜力的粘膜免疫佐剂。本文从LT的分子结构、分子生物学特性、免疫原性、粘膜佐剂效应及其作用机制以及LT的粘膜免疫佐剂的应用等方面进行了讨论。 展开更多
关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 分子生物学 粘膜免疫 佐剂效应
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酶联免疫吸附测定大肠杆菌不耐热肠毒素 被引量:4
18
作者 吴拥军 王嘉福 《贵州农学院学报》 1997年第2期24-26,共3页
应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对贵州省主要家畜大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)进行了研究、同时与平板免疫溶血试验(PIHA)、基因探针(Geneprobe)测定LT进行了比较。通过对贵州省主要地区的猪、鸡、牛等239... 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对贵州省主要家畜大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)进行了研究、同时与平板免疫溶血试验(PIHA)、基因探针(Geneprobe)测定LT进行了比较。通过对贵州省主要地区的猪、鸡、牛等239份腹泻样品中的124份E.coli分离物测定,LT阳性检出率为ELISA51.6%、Geneprobe61.3%、PIHA13.5%.结果表明,肠毒素大肠杆菌是引起家畜腹泻致病的主要原因,尤其是遵义地区检出率更高。 展开更多
关键词 不耐热肠毒素 ELISA 大肠杆菌
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因的原核表达
19
作者 梁望旺 周丹娜 +5 位作者 刘泽文 伍锐 杨克礼 段正赢 邓均华 徐涤平 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第11期2627-2629,共3页
大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用。试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体上,构建了重组质粒pKG-LTB,... 大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用。试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体上,构建了重组质粒pKG-LTB,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的LTB基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-LTB分子量约为35kDa,并具有免疫反应活性。这为进一步研究LTB蛋白黏膜免疫原性和黏膜佐剂的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素 克隆 原核表达
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猪大肠杆菌不耐热肠毒素基因的PCR检测 被引量:1
20
作者 陈芳 池仕红 +5 位作者 陈汉林 杨林 刘为民 张浩吉 王政富 马春全 《广东畜牧兽医科技》 2007年第6期32-33,共2页
以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法。该方法对987p+、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均... 以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法。该方法对987p+、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均为阴性。对15株分离自腹泻仔猪的待检菌株进行检测,有3株LT基因阳性。结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC) 不耐热肠毒素基因(LT) PCR
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