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蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定
被引量：
2
1
作者
陈欣虹
刘琼
詹金彪
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2005年第3期201-206,共6页
目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;...
目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。
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关键词
蓖麻蛋白
蓖麻毒素A链
发光蛋白质类
重组融合蛋白质类/生物合成
基因表达
大肠杆菌/代谢
聚合酶链反应
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职称材料
题名
蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定
被引量：
2
1
作者
陈欣虹
刘琼
詹金彪
机构
浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2005年第3期201-206,共6页
基金
国家自然科学基金(30270294和30070166)
浙江省自然科学基金(301057).
文摘
目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。
关键词
蓖麻蛋白
蓖麻毒素A链
发光蛋白质类
重组融合蛋白质类/生物合成
基因表达
大肠杆菌/代谢
聚合酶链反应
Keywords
Ricin
Ricin A chain
Luminescent proteins
Recombinant fusion proteins/biosyn
Gene expression
Esherichia coli/metab
Polymerase chain recation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定
陈欣虹
刘琼
詹金彪
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2005
2
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