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题名紫茎泽兰高分子量核DNA制备方法的研究
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作者
张迎新
贾晓鸥
张月荣
杜向红
万方浩
宋卫宁
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机构
西北农林科技大学农学院
中国农科院植物保护研究所植物病虫害国家重点实验室
国家小麦改良中心杨凌分中心
旱区逆境生物学国家重点实验室
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出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期2551-2557,共7页
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基金
国家(973)重点基础研究发展规划(2009CB119200)
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文摘
以紫茎泽兰暗培养幼嫩叶片为材料,在细胞核提取缓冲液中加入PVP、抗坏血酸和氨基甲酸钠3种强抗氧化剂,较好地去除了多糖多酚等次生代谢物,经低熔点琼脂糖包埋细胞核及蛋白酶K原位裂解DNA胶块,以获得大分子量DNA;最后分别采用2种不同的限制性内切酶(BamHⅠ和HindⅢ)和5个浓度梯度(0U、0.2U、0.4U、0.6U、0.8U)进行酶切,并对不同的回收方法进行比较分析。结果表明:经脉冲电泳检测,本方法提取的DNA片段长度>600kb,基本无细胞器DNA和蛋白质污染;酶切条件以0.4U酶浓度HindⅢ的效果最好,酶切后的DNA片段主要集中在100～300kb之间,DNA片段大小满足构建BAC文库的要求;对回收方法进行比较分析,电洗脱法回收的大片段DNA浓度远远大于琼脂糖酶切法,大于8mg.L-1,这完全能够满足构建大片段基因组文库对DNA浓度的要求。
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关键词
紫茎泽兰
高分子量DNA
脉冲场凝胶电泳
大片段基因组文库
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Keywords
Ageratina adenophora
HMW-DNA
Pulsed Field electrophoresis （PFGE）
Large-fragment ge-nomic library
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分类号
Q781
[生物学—分子生物学]
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