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八肋游仆虫含绿色荧光蛋白基因的大核人工染色体的构建
被引量：
4
1
作者
李娜
柴宝峰
+1 位作者
王景涛
梁爱华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期436-441,共6页
为研究八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)相关基因的功能,构建了八肋游仆虫大核人工染色体(macronuclear artificial chromosome ofE.octocarinatus,EoMAC-G),其两端为克隆自八肋游仆虫大核β2-微管蛋白基因的5′和3′非编码区和两侧...
为研究八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)相关基因的功能,构建了八肋游仆虫大核人工染色体(macronuclear artificial chromosome ofE.octocarinatus,EoMAC-G),其两端为克隆自八肋游仆虫大核β2-微管蛋白基因的5′和3′非编码区和两侧的端粒序列,中间为多克隆位点和密码子优化后的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP-Eo)报道基因.用脂质体转染方法将携带有EoMAC-G的pBTub-Tel载体转入八肋游仆虫大核,分析EGFP-Eo基因在八肋游仆虫细胞中的表达.荧光显微镜观察发现,EGFP-Eo产生的荧光均匀分布于八肋游仆虫细胞质中.在细胞进行有丝分裂的情况下,荧光可持续20 d以上.相比pEGFP-N1质粒转化的游仆虫,人工染色体中的EGFP-Eo基因表达的荧光亮度强、稳定且持续时间长.Western杂交分析进一步证实,外源EGFP-Eo基因在细胞中过量表达.通过细菌喂食法进行纤毛虫RNA干扰实验,抑制了外源EGFP-Eo基因在八肋游仆虫细胞中的表达.利用构建的人工染色体不仅可以在八肋游仆虫细胞内表达外源基因,对目的蛋白质进行活细胞实时动态的定位分析,还可通过RNA干扰的方法调控外源基因在纤毛虫细胞中的表达,便于进一步分析目的蛋白质的功能.
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关键词
八肋游仆虫
绿色荧光蛋白
大核人工染色体
基因表达
RNA干扰
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职称材料
题名
八肋游仆虫含绿色荧光蛋白基因的大核人工染色体的构建
被引量：
4
1
作者
李娜
柴宝峰
王景涛
梁爱华
机构
化学生物学与分子工程教育部重点实验室
山西大学生物技术研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期436-441,共6页
基金
国家自然科学基金(No.30770294
No.30670282)
山西省自然科学基金资助(No.2009011040-1)~~
文摘
为研究八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)相关基因的功能,构建了八肋游仆虫大核人工染色体(macronuclear artificial chromosome ofE.octocarinatus,EoMAC-G),其两端为克隆自八肋游仆虫大核β2-微管蛋白基因的5′和3′非编码区和两侧的端粒序列,中间为多克隆位点和密码子优化后的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP-Eo)报道基因.用脂质体转染方法将携带有EoMAC-G的pBTub-Tel载体转入八肋游仆虫大核,分析EGFP-Eo基因在八肋游仆虫细胞中的表达.荧光显微镜观察发现,EGFP-Eo产生的荧光均匀分布于八肋游仆虫细胞质中.在细胞进行有丝分裂的情况下,荧光可持续20 d以上.相比pEGFP-N1质粒转化的游仆虫,人工染色体中的EGFP-Eo基因表达的荧光亮度强、稳定且持续时间长.Western杂交分析进一步证实,外源EGFP-Eo基因在细胞中过量表达.通过细菌喂食法进行纤毛虫RNA干扰实验,抑制了外源EGFP-Eo基因在八肋游仆虫细胞中的表达.利用构建的人工染色体不仅可以在八肋游仆虫细胞内表达外源基因,对目的蛋白质进行活细胞实时动态的定位分析,还可通过RNA干扰的方法调控外源基因在纤毛虫细胞中的表达,便于进一步分析目的蛋白质的功能.
关键词
八肋游仆虫
绿色荧光蛋白
大核人工染色体
基因表达
RNA干扰
Keywords
Euplotes octocarinatus
EGFP-Eo
macronuclear artificial chromosome
gene expression
RNA interference
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q74 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
八肋游仆虫含绿色荧光蛋白基因的大核人工染色体的构建
李娜
柴宝峰
王景涛
梁爱华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
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